F_(2∶3)家系法鉴定大白菜TuMV分离群体单株抗性

为筛选与目的基因连锁更加准确的分子标记以及明确分子标记鉴定技术的准确率,同时为后期进行基因精细定位研究提供技术手段,本试验采用F_(2∶3)家系进行F_2单株的TuMV抗性鉴定。结果表明,122个大白菜抗TuMV材料8407和感病材料冠291的F_(2∶3)家系中,抗病的有98个,感病的有24个,经卡方测验,符合3∶1的分离比例,与以往对该群体F_2代TuMV抗性分离比例的研究一致,表明这种鉴定方法可行。本结果可为今后分离群体单株TuMV抗性的准确鉴定提供参考。     

大白菜eIF(iso)4E.a假基因突变体的鉴别及相关检测标记的开发

马铃薯Y病毒在侵染寄主时与eIF4E或eIF(iso)4E的相互作用是一种普遍机制。大白菜病毒病主要病源是TuMV,TuMV在侵染大白菜时能同时与eIF4E和eIF(iso)4E发生作用,且在大白菜基因组中上述两基因各有三个拷贝。因而鉴定大白菜资源在上述两个位点的多样性、发现各位点的功能缺失突变体至关重要。采用同源克隆和Tail-PCR技术,鉴定了12份大白菜抗/感TuMV材料中eIF(iso)4E.a位点的多样性。结果表明：5份材料的eIF(iso)4E.a基因组序列完整,但与已知序列相比均存在显著差异,包含3种新的单倍型;7份材料的eIF(iso)4E.a缺失了第四、五外显子及3'端约1 kb的大片段,是个假基因。同时开发了鉴别完整基因与假基因的共显性标记。该策略为鉴定大白菜中eIF4E和eIF(iso)4E其他位点的多样性提供了借鉴,开发的相关检测标记可以作为标记辅助选择的工具用于创新抗病毒大白菜新种质及培育抗病毒大白菜新品种。     

西葫芦未受精胚珠离体诱导植株再生的关键因素

开花当天的西葫芦未受精胚珠在含5%蔗糖和0.8%琼脂的N6基本培养基中附加0.5 mg/L NAA和1.0mg/L 2,4-D的诱导培养基上培养最有利于诱导植株再生;所得再生植株经气孔保卫细胞叶绿体计数法鉴定,60%为二倍体,其自交后代株系内高度整齐一致,证明所得二倍体再生植株是纯合的双单倍体,来源于单倍的胚囊细胞。     

牛牌19大白菜杂交种种子纯度快速鉴定方法研究

以牛牌19大白菜杂交种为试材,从种子预处理、DNA简便提取及质量检测、引物筛选等环节,构建了大白菜杂交种入库前分子标记快速鉴定技术体系,并与田间鉴定结果相比较。结果表明:该体系分子标记鉴定结果与田间种植法鉴定结果基本一致,杂交种纯度都是97%左右;以72 h萌发处理的单株幼苗为材料、采用两步法快速提取的DNA完全可以满足分子标记检测的需要。     

大白菜抗根肿病分子标记研究进展

根肿病是由芸薹根肿菌侵染大白菜以及其它十字花科作物根部而引起的一种土传病害。该病害随着农业机械跨区域作业的实施等逐年加重,造成严重的经济损失,严重威胁十字花科作物的安全生产。开发与抗根肿病紧密连锁的分子标记、利用标记辅助选择培育高效抗根肿病大白菜新品种是应对根肿病危害的重要手段。多年来,大白菜抗根肿病QTL定位和分子标记开发取得重要进展,已经定位23个抗病位点,开发60多个连锁标记,尤其大白菜参考基因组序列的发布,大大促进了抗根肿病功能基因的鉴定,目前已经克隆鉴定了3个功能基因。本文对抗根肿病位点的特点、紧密连锁分子标记在最新版大白菜参考基因组中的物理位置、候选基因图位克隆情况以及潜在候选基因筛选等方面的进展进行综述,讨论了抗病育种存在的难题,并对下一步抗病研究重点提出了建议,以期为利用分子标记辅助选择创制大白菜持久抗根肿病新种质提供参考。     

甜瓜果实蔗糖代谢酶提取液中2种去糖方法的比较

以甜瓜鲁厚甜1号开花当天的果实为试材,分别测定蔗糖代谢相关酶—酸性转化酶(AI)、中性转化酶(NI)、蔗糖合成酶(SS)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)的活性。对酶提取液中干扰测定结果的可溶性糖采取2种方法进行去除(1)直接用SephadexG-25柱离心去糖;(2)酶提取液先经过硫酸铵沉淀,去糖,重新溶解后再用SephadexG-25柱脱盐。结果显示,方法2处理后AI和NI、SPS和SS的活性均高于方法1。这表明在研究甜瓜果实蔗糖代谢相关酶活性时,采用方法2处理酶提取液效果更好。     

甜瓜SSR引物在西葫芦中的通用性

为了筛选更多的ssR标记用于西葫芦种质资源整理、评价和遗传研究,笔者首次利用西葫芦近缘物种甜瓜的SSR标记对中国现有西葫芦主要资源进行了多态性检测.结果表明,在所选的甜瓜25对SSR引物中有6对可在西葫芦基因组中有效扩增,占所选引物的24%.多态性分析发现,6对引物中有4对可以在34份西葫芦种质中检测到多态性,等位变异数从3～6个不等,平均为4个.UPGMA聚类分析表明,来自市场主栽目的自交纯化材料和双单倍体材料之间多样性较差,说明现有栽培品种基因谱较窄;而从国家蔬菜种质资源库引进的材料多样性比较丰富,对这些材料的整理和重新评价有助于发掘新的基因源,可以为西葫芦杂交育种提供新材料.     

基于InDel 标记的大白菜育种材料分子身份证构建

以105 份大白菜育种材料为试材，精选20 对均匀分布于大白菜基因组、且只能检测出2 个等位基因的共显性InDel 标记引物进行分子标记检测，构建分子身份证。结果表明：20 对引物中有16 对引物在所有材料中均扩增出单一条带，另外 各有2 对引物在部分材料中存在缺失和加倍现象。将所有标记引物按其所处染色体编号由小（A01）到大（A10）排列，同 一染色体上的标记则按照物理位置从小到大排列，按顺序对标记赋值，构建了105 份大白菜材料的分子身份证。所筛选的 20 对引物对未知新种质的身份证构建具有通用性和兼容性，表明InDel 标记技术可以作为大白菜鉴定和分子身份证构建的有 效技术手段。     

黄瓜未授粉子房的胚状体诱导研究初报

对3个黄瓜品种未授粉子房的胚状体诱导试验结果表明,不同基因型品种、采样时期、培养基附加物和处理温度都能影响胚状体的诱导率和诱导效果.鲁黄瓜9号开花前一天取样胚状体诱导效果最佳;培养基附加40 g/L蔗糖,0.06 mg/LTDZ,35 C黑暗处理4 d,胚状体诱导率最高;附加0.1 mg/LNAA、0.8 mg/L6-BA、40 g/L蔗糖,在25 C、4 500 lx、16 h/d光照条件下继续培养,胚状体生长健壮.     

高效液相色谱测定黄瓜瓜条中赤霉素和脱落酸含量

本试验以秋露地栽培鲁黄瓜9号为试材,研究如何提取、纯化和利用高效液相色谱(HPLC)分析测定商品成熟期瓜条中赤霉素(GA3)和脱落酸(ABA)的含量。试材用液氮研磨以100%冷乙腈浸提,浸提液抽滤,氯仿去除色素,PVP去除酚类杂质,乙酸乙酯提取激素,最后过PT-C18预处理柱。以甲醇—水(含5%冰乙酸)为流动相,在μ-BandpakC18柱上进行分离,紫外检测器在252nm波长下检测、鉴定,并测得回收率分别为GA3:80 12%;ABA:81 33%。