甜瓜cDNA-AFLP分析体系的建立

选用新疆甜瓜伽师和皇后为试材,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适合于甜瓜的cDNAAFLP反应体系.结果表明:适用于甜瓜cDNA-AFLP分析的RNA可以用Trizol试剂提取的总RNA,双链cDNA合成应用置换法,双链酶切用Vsp Ⅰ、Taq Ⅰ和EcoR 、Mse Ⅰ,效果均能达到目标.相比较而言,Vsp Ⅰ、Taq Ⅰ酶切组合更为理想.酶切cDNA用量、连接产物、预扩增产物稀释倍数参照常规AFLP技术中的常用即可满足要求.检测采用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显色,操作较文献介绍的变性胶方法简单、方便.实验得到了较为理想的甜瓜mRNA指纹图谱,建立的反应体系可以应用于甜瓜差异基因表达分析等方面的研究.     

转基因小麦后代外源目的基因的遗传分析

采用PCR和SDS-PAGE技术,分析了转基因小麦后代外源基因1Dx5的遗传分离及表达规律.结果显示:外源目的基因1Dx5在转基因小麦后代中完全符合孟得尔遗传分离规律,稳定遗传都达到了纯合状态,并在后代中发现了该目的基因超表达的差异表达现象,转基因植株不存在基因沉默.     

独行菜种子DREB类转录因子家族及LaDREB表达对幼苗冷胁迫响应

DREB是广泛存在于植物中的一类重要的转录因子,其调控一些参与非生物胁迫相关基因的表达,在植物抗逆方面起重要作用。本研究在转录组数据基础上,比较了独行菜(Lepidium apetalum Willd.)种子在实验室条件耐受和不能耐受低温萌发的两组样本,对其DREB转录因子家族成员进行了分析,并对该家族成员表达差异极显著的基因LaDREB进行了克隆、序列分析、结构预测,研究了其表达在独行菜幼苗中对低温胁迫的响应。结果表明,萌发中的独行菜种子,至少有13个DREB转录因子表达,相对于低温萌发停滞组,在低温萌发耐受组的独行菜种子中,有1个下调、10个上调、2个表达差异不显著。其中表达量最显著上调的c18023_g1序列,包含639 bp的开放阅读框,功能注释到DREB类基因,与宽叶独行菜LiDREB序列一致性最高,因此该基因命名为LaDREB。其编码210 aa的蛋白质、具有典型AP2结构域、分子式为C1927H3217N639O815S124、理论等电点为5.18、分子量为52.352 9 k D。定量表达分析表明,LaDREB在独行菜幼苗期,经低温处理后,其表达量快速显著上调,表明LaDREB可能在独行菜幼苗抵抗低温胁迫中起调控作用,为深入探讨LaDREB转录因子在独行菜幼苗耐受低温中的作用提供理论参考。