不同基本培养基对籼稻粤泰A与粤泰B成熟胚愈伤组织诱导及继代的影响

选用红莲型细胞质雄性不育籼稻不育系粤泰A与保持系粤泰B成熟胚为材料,比较了4种不同基本培养基(N 6、NB、MS、CC)对二者愈伤组织诱导率及初愈组织的继代生长的影响.结果表明,N6、NB、MS三种培养基均可用于YTA和VrB种子愈伤的诱导,而用NB及N 6培养基进行第一次继代培养效果较好,4种基本培养基均不适合于YTA和YTB进行二次继代培养.在相同培养基上,YTB愈伤诱导率、愈伤生长状况及继代培养时的褐化率都优于YTA,证明细胞质基因型对愈伤的诱导和生长有重要影响.     

分子标记辅助构建同质同核近等基因恢复系L-Rf5

红莲型水稻恢复系9311中有2个红莲型恢复基因Rf5和Rf6,不育系YTA中有2个不育基因orfH79和orf216;为了研究2个恢复基因与2个不育基因之间的互作关系,将红莲型水稻不育系YTA与恢复系9311杂交,杂种后代再以YTA为轮回亲本回交8代;根据Rf5基因序列设计特异分子标记,并对L-Rf5进行检测,结合花粉镜检结果,筛选出只含Rf5的纯合株系,多代自交后其表型一致,说明纯合株系L-Rf5构建成功;对近等基因恢复系的不育基因orfH79和orf216的表达量进行分析,结果显示:L-Rf5中orfH79的表达量较YTA明显下降;纯合的L-Rf5比杂合的L-Rf5不育基因orfH79的表达量稍低;L-Rf5中orf216的表达量较YTA下降并不明显。同时克隆了YTA、9311、近等基因恢复系中Rf1B序列,发现它们之间没有差异。     

黄芪灵芝增免口服液对雏鸡免疫功能的影响

正在养禽生产中普遍存在疫苗免疫接种预防效果不佳的现象,加大药量后仍未达到理想的预防和治疗效果,造成细菌耐药性或兽药残留,破坏家禽的免疫系统,产生免疫抑制,导致家禽免疫系统功能下降,抗病能力低下,从而给畜牧业的可持续发展带来了严重危害[1]。中兽药类产品具有无毒副作用、安全无残留、不产生抗药性、兼有营养和药用双重作用等得天独厚的优势[2-3],能够有效避免上述问题的产生,故本试验特此研制开发出黄芪灵芝增免口服液,其中黄     

转sm-Ngt1基因水稻遗传稳定性分析

为检测转sm-Ngt1基因株系后代的遗传稳定性,对连续2年种植的15个转sm-Ngt1基因T4代水稻株系进行了阳性鉴定,并以农业部要求的9对引物对转基因标记物进行检测,同时对其农艺性状进行了统计。结果显示,15个转基因株系中,编号1、3、5、7-9、11-15这11个转基因株系中含有sm-Ngt1基因,除编号8株系外,sm-Ngt1基因在其余10个株系中均能稳定遗传;在9对检测标记物引物中5对能扩增出特异性条带,其中3对引物（NOS-F1/NOS-R1、T35S-F1/T35S-R1、NPTF68/NPTR356）在所有转基因水稻株系后代中（T5、T6代）都能扩增出特异性条带,2对引物（35S-F1/35S-R1、HPTF226/HPTF69）检测结果与sm-Ngt1检测结果相同。结果表明编号1、3、5、7、9、11-15的10个转基因株系中含有35S启动的sm-Ngt1基因和HPT基因能稳定遗传,且这些转基因株系生育期、株高、结实率及千粒重与受体品种之间差异不显著。     

水稻线粒体基因atp6超表达载体的构建及遗传转化

[目的]克隆水稻线粒体基因atp6,构建转基因表达载体,获得35S∷Rf1b5'∷atp6转基因水稻植株。[方法]设计目的基因的特异引物,采用TRIzol法提取水稻叶片总RNA,借助Toyobo反转录试剂盒反转录为cDNA,通过PCR扩增得到atp6全序列;将atp6连接到含线粒体信号肽(Rf1b5')的pCAMBIA1302双元表达载体上,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行水稻的遗传转化。[结果]利用目的基因atp6成功构建了35S∷Rf1b5'∷atp6植物表达载体,并获得了转atp6基因的阳性植株。[结论]为探讨水稻中超表达atp6对水稻生长的影响奠定基础。     

武陵山区抗稻瘟病新组合长优72的选育及应用

[目的]探讨武陵山区抗稻瘟病新组合长优72的推广应用价值及开发潜力。[方法]介绍长优72的选育经过、特征特性、制种技术要点、栽培技术要点。[结果]长优72由中南民族大学生命科学院和福建省农业科学院水稻研究所合作以福建省农业科学院稻麦研究所培育的不育系长丰A与中南民族大学生命科学院选育的恢复系R01-72配组育成,是适用于武陵山区中低海拔(500～800m)的杂交迟熟中稻新组合,表现出生长势强,耐肥抗倒,米质较优,抗稻瘟病等特点,于2012年通过湖北省品种审定。[结论]该研究可为长优72的大面积推广应用奠定基础。     

HL-CMS同质异核近等基因恢复系‘L-Rf6’的构建

为了研究红莲型水稻中2个恢复基因与2个不育基因的互作关系,用红莲型水稻不育系‘粤泰A’(‘YTA’)与恢复系‘9311’杂交,所得F1代再与保持系‘粤泰B’(‘YTB’)多次回交,最终构建了与不育系‘YTA’同质异核的近等基因恢复系‘L-Rf6’。根据Rf5和Rf6的基因序列设计了特异性分子标记,并对‘L-Rf6’进行检测。结果显示成功构建了近等基因恢复系‘L-Rf6’。对近等基因恢复系的不育基因orfh79的表达量进行分析,结果显示‘L-Rf6’中orfh79的表达量与‘YTA’比较明显下降。该近等基因恢复系的构建为阐述红莲型水稻多个恢复基因与多个不育基因的互作关系打下基础。     

水稻线粒体基因orf290功能的初步研究

从红莲型不育系粤泰A(YTA)线粒体基因组中克隆并鉴定了一个6.7kb的CMS相关片段HLsp1,序列预测发现了2个orf,其中一个编码290个氨基酸,暂命名为orf290。构建带有线粒体信号肽的超表达载体35S::Rf1b5'::orf290,通过农杆菌介导转化受体保持系粤泰B(YTB),以水稻的单拷贝基因蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)作为内参基因,以潮霉素抗性基因(hpt)作为目的检测基因,基于实时荧光定量PCR鉴定转基因T0代植株中外源基因的拷贝数,并对阳性植株进行花粉镜检和结实率统计。结果显示获得了2株单拷贝转35S::Rf1b5′::orf290植株,并且都有orf290的表达。单拷贝超表达orf290植株的平均花粉可育度30.8%,平均套袋结实率41.6%。这些结果初步证实,线粒体基因orf290可能与水稻细胞质雄性不育相关。     

水稻HL-CMS中orf216蛋白的原核表达和多克隆抗体制备

以常规基因重组技术,将orf216基因克隆入含有内含肽标签的原核表达载体pTYB1中,得到重组质粒pTYB1-orf216,经鉴定正确后,转化至大肠杆菌ER2566感受态细胞,15℃下0.8 mmol/L IPTG诱导15 h后,SDS-PAGE检测到大小约85 ku的特异性蛋白条带,融合蛋白以可溶组分形式存在.融合蛋白经亲和纯化后制备多克隆抗体,Western blot分析表明多克隆抗体具有较高的特异性,可与免疫原特异结合.     

提高农杆菌介导的籼稻成熟胚愈伤组织再生频率研究

为了提高籼稻红莲型保持系粤泰B(YTB)成熟胚愈伤组织再生频率和遗传转化效率,利用培养基种类、菌液浓度、侵染方法、共培养方法、愈伤组织干燥处理方法、筛选剂浓度等6个方面设计农杆菌不同的培养条件进行试验。结果表明：LB和YEB培养基都可以作为农杆菌的培养方法;真空负压处理可以明显提高转化率;共培养时在共培养基上加滤纸有利于后续的除菌工作,能够提高转化效率;愈伤组织经过适当的干燥处理可以明显提高转化效率;适宜的潮霉素浓度在40~50 mg/L之间;采用V型筛选的方法,可以使转基因植株的阳性率有所提高。总之,通过对农杆菌培养条件的优化能有效地提高农杆菌介导的籼稻成熟胚愈伤组织再生频率。