长期刈割及围栏封育方式对大油芒种群构件特征的影响

对松嫩平原长期刈割和围栏封育利用方式下的大油芒（Spodiopogon sibiricus）种群构件特征进行了研究,结果表明,2种利用方式下,大油芒种群分株由2~3个龄级构成,根茎由3~4个龄级构成,均呈增长型年龄结构。长期刈割方式下,潜在种群由苗和芽组成,而围栏封育方式下仅存在芽构件。在2种利用方式下,分株生产力、根茎贮藏力、分株和根茎的营养繁殖力均以年轻龄级最高。相对于围栏封育方式,长期刈割促进了苗的输出,增加了根茎营养繁殖力,但整体上使大油芒种群分株数量和生物量、根茎长度和生物量、分株生产力和总芽数显著降低。因此,长期刈割对大油芒种群的维持和更新产生不利影响。     

普洱茶茶褐素对大鼠尿液影响的代谢组学研究

本研究采用核磁共振(NMR)代谢组学法研究普洱茶茶褐素(TB,分子量50 k Da)对大鼠尿液代谢的影响。将实验大鼠分为正常对照组、正常+TB组、高脂组和高脂+TB组,以生物核磁共振技术结合正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)研究灌胃高剂量普洱茶茶褐素后大鼠尿液内源性代谢物的变化。结果表明,正常+TB组与正常对照组,高脂+TB组与高脂组的尿液代谢谱有明显差异;筛选出缬氨酸、柠檬酸、牛磺酸、丙酸盐、α-酮戊二酸、β-羟基丁酸等6种普洱茶茶褐素标志性代谢物;普洱茶茶褐素对大鼠尿液的影响可能涉及到氨基酸代谢、能量代谢、三羧酸循环、脂类代谢和氧化应激反应。     

普洱茶渥堆发酵中嗜热真菌的分离和鉴定

应用传统的普洱熟茶渥堆方法进行发酵,研究分析普洱茶渥堆发酵过程中嗜热微生物的种类,应用测序技术对分离的微生物进行了鉴定。每天取样,进行微生物的分离、纯化及鉴定,并对分离出来的几种嗜热霉菌在不同温度、不同pH条件下培养,观察其生长情况。对普洱茶发酵过程中的微生物进行全面分析,运用分子生物学方法对分离的微生物进行鉴定。发现了普洱茶渥堆发酵过程中起重要作用的嗜热微生物,为揭示普洱茶高温发酵的机理奠定了基础。     

两株海洋微生物抗肿瘤代谢产物的筛选及其菌种鉴定

对5株海洋微生物进行发酵培养,发酵液离心后,收集上清液,采用饱和正丁醇萃取制备海洋微生物的代谢产物,采用MTT活性跟踪法,以BEL-7402、RKO、A549、U251和MCF-7等细胞系为模型,对代谢产物进行抗肿瘤活性的筛选。结果显示,菌株S-1和N16代谢产物的活性组分具有较好的抗肿瘤活性:菌株S-1对MCF-7、U251和BEL-7402三种肿瘤细胞的IC50值分别为44、102和82μg/ml;菌株N16对MCF-7和BEL-7402两种肿瘤细胞的IC50值分别为84、133μg/ml。对菌株S-1和N16进行了16S r RNA序列分析、生理生化特征鉴定,结果显示,菌株S-1为短芽孢杆菌属(Brevibacillus sp.),N16为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。通过显微镜观察了菌株Brevibacillus sp.S-1和Bacillus sp.N16代谢产物的活性组分对BEL-7402细胞形态的影响,表明两株菌的活性组分可以改变肝癌细胞BEL-7402的细胞形态,抑制细胞增殖。该研究为新型抗肿瘤先导化合物的发现提供了新的海洋微生物种质资源。     

壳聚糖固定化海洋微生物YS2071脂肪酶及其酶学性质

采用壳聚糖为载体,优化了海洋微生物YS2071脂肪酶的壳聚糖固定化条件。结果显示,在壳聚糖浓度为2% (m/v)、氢氧化钠浓度为12% (m/v)、乙酸浓度为1% (v/v)、戊二醛浓度为0.25% (v/v)、与戊二醛交联的时间为12 h及添加2 ml (1120 U)的游离脂肪酶时,固定化脂肪酶的活力最高,其活力回收率达到69.4%。对游离脂肪酶与固定化脂肪酶的酶学性质进行比较,结果显示,游离脂肪酶的最适反应温度为40℃,而固定化脂肪酶的最适反应温度为45℃,固定化脂肪酶的温度稳定性明显优于游离脂肪酶。最适反应pH均为8.0,脂肪酶经过固定化之后,酸碱耐受性增大。重复利用10次的固定化脂肪酶的酶活力保留率仍高于65%。固定化脂肪酶贮藏半衰期为96 d,而游离脂肪酶的贮藏半衰期是33 d。固定化脂肪酶与游离脂肪酶的酶活力保留率在不同有机试剂中表现出不同的稳定性。     

香菇无床架三柱连体半熟料高产栽培技术

香菇无床架三柱连体半熟料栽培方法是近几年继辽宁香菇块栽和地栽生产模式之后，又探索出来的一种最新栽培模式，具有成品率高、污染率低、方法简单、操作粗放、成本低、产量高、周期短，产品质量好，经济效益高等特点。在建立香菇基地时，此模式适合东北地区大规模生产应用。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中EGCG及其药动学研究

[目的]建立一种LC-MS/MS测定大鼠血浆中EGCG浓度的方法,进而研究其药动学.[方法]选用Agilent SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-水(90:10)为流动相,等度洗脱,ESI离子源,多反应离子监测,负离子扫描;以香草醛为内标,采用内标法定量.[结果]EGCG和内标不受基质干扰;定量限分别为10 ng/mL(EGCG)和5 ng/mL(香草醛),血浆样品批内和批间精密度(RSD)≤11.5％,准确度在92.0％～118.9％,萃取回收率≥92.7％,基质效应为95.3％～115.3％,大鼠腹腔注射20 mg/kg EGCG后的血浆动力学符合二室模型,消除半衰期较长,表观分布容积(Vd)大于总体水体积.[结论]该方法重现性好、分析时间短,能满足EGCG在大鼠血浆中浓度的检测要求,并符合《中国药典》2015年版对生物样品分析的要求,可用于大鼠血浆中EGCG的浓度测定和药代动力学研究.     

咖啡因在小鼠中的抗凝血作用研究

研究了咖啡因灌胃对BALB/c小鼠尾出血时间(BT)、凝血时间(CT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)等的影响。结果表明:咖啡因显著地延长了小鼠的体内和体外凝血时间,但对APTT、PT、TT值,以及纤维蛋白原含量、PT活性和PT国际标准化比率均没有显著的影响。     

南极磷虾粗酶液中蛋白酶的基础酶学性质研究及抑制剂的开发

本研究探讨了反应温度、pH、金属离子(Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Al~(3+)和Ca~(2+))对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的影响,研究了苯甲基磺酰氟(PMSF)、EDTA·2Na、碘乙酰胺(IAM)和甲苯磺酰–苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)对蛋白酶活性的抑制效果。结果显示,南极磷虾粗酶液中蛋白酶的最适反应温度为40℃;最适反应pH值为8.0;当金属离子浓度为0.5 mmol/L时,Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)和Al~(3+)金属离子对蛋白酶酶活的抑制率分别为55.02%、55.02%、35.39%、20.67%和41.12%,而Ca~(2+)离子对蛋白酶活有明显的促进作用;PMSF和EDTA·2Na对蛋白酶酶活具有较为显著的抑制作用,PMSF的浓度为8.0 mmol/L时,抑制率为60%;EDTA·2Na浓度为0.6 mmol/L时,抑制率为86.67%;IAM在低浓度时有一定的抑制作用;TPCK低浓度时抑制效果不明显,浓度升高时有一定的抑制作用。在5~30℃的温度范围内,随着温度升高,EDTA·2Na对蛋白酶酶活的抑制效果逐渐增加。本研究阐明了影响南极磷虾粗酶液蛋白酶酶活的因素,开发了针对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的抑制剂,为南极磷虾在食品领域的开发利用提供了基础理论数据。     

枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质

构建了枯草芽孢杆菌CH_2菌株(Bacillus subtilis CH_2)壳聚糖酶基因的真核表达载体p PIC9K-CH2-Cns,在毕赤酵母GS115(Pichia pastoris)中进行重组表达,获得了有生物学活性的重组壳聚糖酶,对重组壳聚糖酶的酶学特性及酶解产物进行了分析。结果显示,重组壳聚糖酶的分子量为29 k D,粗酶的比酶活达到133.60 U/mg,纯化后重组蛋白的比酶活为338.08 U/mg;该酶的最适作用温度为50℃,最适pH为4.5,酶动力学常数Vmax=24.39(μmol/mg)·min~(-1),Km=5.48 mg/m L;Fe2+、K+等对其酶活力有一定的激活作用,其中Mn~(2+)能使酶活力提升2.4倍,Ag~+、Mg~(2+)、Hg~(2+)、EDTA、EGTA和SDS等存在时则对其酶活力有强烈抑制作用。利用重组壳聚糖酶酶解壳聚糖,酶解产物主要为聚合度2~10的壳寡糖,且分布均匀。以上结果表明,枯草芽孢杆菌CH_2菌株壳聚糖酶基因在毕赤酵母GS115中成功表达,获得了一种内切型的高酶活力重组壳聚糖酶,该重组酶具有反应条件温和、酶解产物均一等特点,可被应用于海洋甲壳质加工应用中。