一株新型Bt菌株的鉴定及其抗椰子茎泻血病菌和杀小菜蛾活性

从海南采集的土样中分离鉴定获得1株可抑制椰子茎泻血病菌和杀小菜蛾幼虫的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, 简称Bt）WENCHANG-BT20;经cry基因的鉴定明确了该菌株含有cry1Aa、cry1La、cry1Ai、cry1Ac、cry1Be、cry1Ka、cry1Ia、cry2Ab基因。生物学检测结果表明,该菌株晶体蛋白对小菜蛾幼虫的LC50为0.088 μg/mL（95％置信区间为0.046~0.127 μg/mL）;该菌株对椰子茎泻血病菌菌丝生长有一定的抑制作用,平板对峙培养法培养5 d后,抑菌圈直径为22 mm。     

利用免疫共沉淀技术研究RSVCP、SP和NSvc4蛋白的互作

为了检测水稻条纹病毒(Rice sgipe virus,RSV)外壳蛋白(coat protein,CP)、病害特异蛋白(disease-special protein,SP)和可能的运动蛋白NSvc4自身和两两之间的互作关系,首先通过PCR扩增获得了分别融合有HA或c=Myc标签的RSV CP、SP和NSvc4基因,并将其插入到植物表达载体pEGAD或pKYLX71:35S2中.重组质粒转化根癌农杆菌(Agrobactctium tume-faciens)EHA105后,将含有不同重组质粒的根癌农杆菌菌液混合后注射烟草(Nicotiana benthamiana)叶片.提取烟草中瞬时表达的蛋白,以HA或c-Myc抗体进行免疫共沉淀试验,最后免疫混合物通过c-Myc抗体或HA抗体进行Western blot检测,确定蛋白的互作情况.结果表明,RSV CP蛋白自身能够发生互作,而CP与SP,CP与NSvc4,SP与SP,SP与NSvc4,及NSvc4与NSvc4蛋白之间均未有检测到互作现象.     

海南槟榔细菌性叶斑病病原鉴定

In 2008, a severe bacterial disease was observed in Wenchang, Hainan Province. Symptoms consisted of small circular to elongated brown lesions surrounded by yellow halos. All isolates, which formed white colonies, were gram-negative and each had a single, polar, sheathed flagellum. Isolates were oxidase and catalase positive, negative for arginine dihydrolase, gelatin hydrolysis and starch hydrolysis, and acid production from levan. Sequences of the 16S rDNA gene of the isolates shared 98% sequence identity with that of Burkholderia andropogonis strain LMG2129 (GenBank accession No. NR118985). Pathogenicity tests were conducted and fulfilled Koch's postulates, indicating that these isolates are causative agent of the disease. The results led to the conclusion that the causal pathogen of betel palm bacterial leaf spot was B. andropogonis. It is the first report of B. andropogonis causing bacterial leaf spot of betel palm in mainland China.     

油棕叶斑病的病原鉴定及其生物学特性

对油棕发生的一种严重叶部病害进行研究,对该病病原进行了分离和鉴定,经ITS序列分析确定该病病原为半知菌亚门拟茎点霉属真菌.生物学特性研究结果表明:该茵分生孢子呈椭圆形或球形,浅褐色至深褐色;马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)最适合该茵生长,其次是胡萝卜琼脂培养基(CDA)和燕麦琼脂培养基(OMA);在10 ～30℃范围内...     

海南万宁槟榔黄叶病毒病发生情况和症状分析

为查明海南省万宁市由槟榔隐症病毒1（Areca palm velarivirus 1, APV1）引起的槟榔黄叶病毒病发生情况,2020年9—11月,对该市13个乡镇（区）的黄化槟榔园进行调查、采样,共采集槟榔叶片1454份。利用RT-PCR技术对所采集样品进行了APV1检测,并对携带病毒的槟榔叶片症状进行归类整理。结果显示,由APV1引起的槟榔病毒病发生普遍,最低检出率为75%,最高检出率最达100%;进一步研究发现,感染APV1的槟榔叶片症状主要有6种类型。本研究结果可为万宁市槟榔病毒病的识别与防控提供依据。     

2,4-D丁酯对槟榔苗生理特性及土壤微生物的影响

以槟榔幼苗为研究对象,研究不同浓度2,4-D丁酯对其生长情况、叶片生理特性及土壤微生物数量的影响.结果表明,低浓度(1.30×106 mg/kg)的2,4-D丁酯会促进槟榔幼苗生长,而高浓度(2.60×106 mg/kg及6.50×106 mg/kg)会抑制其生长.同时,随着2,4-D丁酯浓度的升高,槟榔苗的叶绿素含量均显著下降;土壤微生物的数量呈现先下降后升高再下降的趋势;此外,CAT和POD活性在5倍浓度处理时显著高于对照,SOD活性在2倍及5倍浓度处理时显著低于对照.     

可可毛色二孢拮抗菌的鉴定及发酵条件优化

【目的】筛选对可可毛色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）具有拮抗作用的生防菌株,为由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病的生物防治提供菌种资源及指导。【方法】以海南发病槟榔园健康槟榔根组织及根际土壤为试验材料,采用组织匀浆法和平板稀释梯度培养法分别分离槟榔根内生细菌及根际土壤中的细菌,应用平板对峙法筛选出对可可毛色二孢菌具有拮抗作用的菌株;通过平板对峙法测定拮抗菌株菌液对3种槟榔根部病害病原真菌尖孢镰刀菌 （Fusarium oxysporum）、奇异根串珠霉菌 （Thielaviopsis paradoxa）和可可毛色二孢菌的抑制作用;通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析对拮抗菌株进行鉴定;采用盆栽试验初步验证拮抗菌株对由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病的防治效果;采用单因素变化试验等筛选拮抗菌株的最佳发酵条件。【结果】经平板对峙法筛选出5株拮抗作用较强的菌株,其中菌株wrj-2-5的抑菌率最高,为74.07%;菌株wrj-2-5菌液对可可毛色二孢菌、尖刀镰刀菌和奇异根串珠霉菌菌丝生长均有较强的抑制作用,抑制率均在70.00%以上。综合菌株形态学观察、生理生化测定和16S rDNA分析结果,将菌株wrj-2-5鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。室内盆栽试验结果表明,菌株wrj-2-5对可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病具有较好的防病作用,对照组发病率为60.00%,试验组长势正常未发病。拮抗菌wrj-2-5最佳培养基配方为酵母浸粉1.5 g、葡萄糖1.5 g、 MgSO₄·7H₂O 0.2 g、水100 mL;最佳发酵条件为转速240 r/min、培养温度28 ℃、培养时间36 h、初始培养基pH 6、初始接种量8%。【结论】菌株wrj-2-5为铜绿假单胞菌,其对可可毛色二孢菌、尖孢镰刀菌和奇异根串珠霉菌均有较好的抑制作用,对由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病有较好的防治效果,可作为研制槟榔根腐病生防菌剂的候选菌株资源。     

椰子茎泻血病菌人工接种方法的研究及抗病品种的筛选

摘要：对椰子茎泻血病病原奇异长喙壳菌（Ceretocystis paradoxa）4种离体人工接种处理方法进行试验，并对各方法进行优缺点评价，同时选取6个椰子品种进行抗病种质的筛选。结果认为：孢子液接种椰果，较为理想，其特点是接种方便，发病速度快，病情稳定，易于观察；其次是刺伤心叶菌块和孢子接种；刺伤茎秆接种，发病速度最慢；无伤接种均不发病。孢子液接种与菌块接种病原菌接种，发病速度无明显差异；孢子液浓度为3.2×107，3.2×106，3.2×105，3.2×104，3.2×103接种椰果时，前三个发病速度无差异；后两个慢。6个椰子品种均不抗病，仅不同部位发病快慢有差异，文椰78F1叶片发病最慢，其次是本地高种椰子和文椰3号。 关键词：椰子茎泻血病；人工接种；抗性鉴定     

槟榔炭疽菌生物学特性及6种杀菌剂对其抑制作用研究

对槟榔炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides的生物学特性及其对6种杀菌剂的敏感性进行了研究，结果表明，病菌菌丝生长和产孢的最适温度均为25～30 ℃，最适生长pH值为6-7。同时明确了不同碳、氮源对槟榔炭疽病菌菌落生长及其产孢的影响。杀菌剂咪鲜胺抑制毒力最高，EC50为0.020 1礸?mL-1；其次为苯甲?丙环唑，EC50为0.225 3 礸?mL-1；甲基托布津、多菌灵对槟榔炭疽病菌没有抑制作用，不能用于防治槟榔炭疽病。     

酵母双杂交技术研究NS3蛋白及其与CP，SP，NSvc4之间的互作

采用RT-PCR扩增水稻条纹病毒基因NS3,构建酵母表达载体,将其分别连接酵母诱饵载体pGBKT7与酵母捕获载体pGADT7,得到重组子pGAD-NS3和pGBK-NS3。自身毒性的实验结果表明,NS3蛋白对酵母细胞无毒性,其自身也没有自激活活性,不存在自身互作。将这2个重组子分别与水稻条纹病毒外壳蛋白CP、病害特异性蛋白SP、运动蛋白NSvc4两两共转化到酵母感受态细胞AH109中,转化产物涂布营养缺陷型培养基二缺、三缺、四缺平板,后经X-a-Gal染色观察,结果表明,NS3与SP的转化产物能在三缺平板上生长并在相应培养基中变蓝色,说明NS3与SP蛋白存在互作,该结果有助于进一步研究NS3蛋白的功能及彼此的互作在水稻条纹病毒致病机理上的作用。