嗜水气单胞菌菌蜕系统的构建及其免疫效果研究

【目的】探讨鱼源嗜水气单胞菌菌蜕系统的可行性和应用性。【方法】以PhiX174基因组DNA为模板,对LysisE基因进行PCR扩增,并将纯化的PCR产物与原核表达载体pBV220双酶切后连接,构建溶菌质粒pBV220-LysisE。将pBV220-LysisE转入嗜水气单胞菌LN0925株中,构建LN0925(pBV220-LysisE)菌蜕疫苗(AHGs),进而通过溶菌动力学过程检测、电镜下细菌形态观察和动物免疫保护试验等评价所制备的菌蜕疫苗。【结果】PCR扩增成功获得长度为276bp的噬菌体LysisE基因;成功构建pBV220-LysisE重组质粒及AHGs。在42℃诱导60min后,LN0925(pBV220-LysisE)菌株开始出现溶菌现象,至3h后溶菌基本结束;溶菌至210min时,其裂解效率达到99.99%。菌液浓度对菌蜕裂解效率的影响试验表明,不同浓度质粒pBV220-LysisE均可以高效诱导嗜水气单胞菌LN0925株裂解。电镜观察发现,AHGs形成明显的溶菌孔道,整体细胞形态完好,且内容物流失。动物免疫保护试验结果表明,AHGs疫苗能明显提高鲤鱼的血清抗体水平,在免疫后5-6周血清抗体凝集效价达到1∶256,从第7周开始呈下降趋势;AHGs和甲醛灭活疫苗(FKC)的相对保护率分别为77.78%和55.56%。【结论】AHGs能够有效激活鱼体的免疫系统并产生免疫保护,且较FKC具有更好的免疫保护效果。     

用紫外分光光度法测定嗜水气单胞菌的浓度

研究了用紫外分光光度法测定嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）菌液浓度的可行性。随机选取东北三省嗜水气单胞菌分离株（H、J和L）接种于胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）培养基中,培养0、3、6、9、12,及24h取样,每个样品5个平行。用紫外分光光度计（入=600nm）测定菌液OD值,同步采用10倍系列稀释法测定平皿菌落个数（CFU）。建立起H、J和L菌株OD值与CFU的回归方程式分别为：y=134．34x＋5．5206;y=135．86x＋3．1397和v：142．87x一3．7068。测定结果表明：当OD值为1时,菌液的浓度约为1．4×107CFU·mL-1。采用紫外风光光度计法测定菌液浓度时,应注意菌液浓度和培养时间的影响。     

三种助溶剂对氟苯尼考水溶液助溶效果的比较研究

氟苯尼考是一种新型动物专用氯霉素类广谱抗菌药,在畜禽及水产动物细菌性疾病的防治中应用较广。而其在水中溶解度小,所配药液浓度低,长时间贮存稳定性差,使用极其不便。本实验摸索了常用的二甲基亚砜、甲醇、乙醇三种助溶剂在不超过70%添加量下促进氟苯尼考水溶液所能达到的最大浓度,观察了在低温（4℃）、常温（20℃）和高温（30℃）下药物的稳定性,通过抑菌实验检测了助溶剂对药物抑菌效果的影响。结果表明：二甲基亚砜助溶效果最好,对药效影响最小,可作为氟苯尼考水溶制剂的首选助溶剂。甲醇最大可促进氟苯尼考溶液达到2%,乙醇仅为0.7%,两者对药物抑菌效果影响较大,但可增强药液在低温下的稳定性,长时间放置（7d）无药物析出。     

虹鳟肠炎红嘴病病理模型的构建

为探讨鲁氏耶尔森菌侵染虹鳟的致病机制,本实验建立了鲁氏耶尔森菌感染虹鳟引起的肠炎红嘴病的病理模型,制定相应的临床症状及组织病理学评分系统,并对该模型进行研究。将43尾平均体质量约为12 g的健康虹鳟随机分成5组:3个实验组(n=30)、对照组(n=10)和哨兵组(n=3)。3个实验组分别采用2.0×106、2.0×107和2.0×108 CFU/m L的鲁氏耶尔森菌感染浓度,通过腹腔注射方式进行人工感染试验。对感染鲁氏耶尔森菌的虹鳟肠、肝脏、脾脏和肾脏组织进行镜检及临床症状、剖检病变判断,结合细菌学检测,按制定的评分系统评价各组肠炎红嘴病造模效果,确定最佳造模方案。结果显示,各攻毒组虹鳟感染后72 h均出现不同程度死亡,临床症状表现为红嘴、肛门红肿、鳍(胸鳍、腹鳍、臀鳍)等出现不同程度充血,下颌部、腹部出现出血点等。组织病理学可见肝脏、脾脏、肾脏及肠组织均有炎性细胞浸润现象出现,肝细胞、肠上皮细胞和肾小管上皮细胞等实质细胞变性、坏死,脾脏部位淋巴细胞减少、红细胞死亡堆积。综合各组得分发现,2.0×107 CFU/m L组的鲁氏耶尔森菌感染虹鳟造模效果最佳,患病虹鳟的临床症状显著且组内差异较小,病程迁延较长,便于研究。研究表明,对体质量约12 g的虹鳟幼鱼腹腔注射0.1 m L浓度为2.0×107 CFU/m L的鲁氏耶尔森菌可成功构建肠炎红嘴病病理模型。     

半定量RT-PCR方法检测热应激对鲫鱼肝脏中HSP70 mRNA含量的影响

依据GenBank已公布的鲫鱼热激蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)和beta-actin mRNA序列,分别设计两对引物,应用半定量RT-PCR方法检测应激处理后不同恢复时期鲫鱼(Carassius auratus)肝脏中HSP70 mRNA的表达情况。结果表明,诱导后肝脏组织中HSP70 mRNA的表达量呈现时间依赖性,存在先升高后回落的趋势。在诱导后1h即有所升高,在4h时达到最高值,之后逐渐降低,至48h,表达量降至最初值。研究结果为鲫鱼HSP70的研究提供了基础数据,也为将HSP70用作鱼类生理状态的诊断提供了理论依据。     

恩诺沙星对两种鲟细胞色素P450活性影响的比较研究

将恩诺沙星按照0、20、40、60、80和100mg/kg浓度,对小体鲟及史氏鲟口服给药5d,停药两天后对其肝脏组织中微粒体蛋白浓度及细胞色素P450（cytochrome P450,CYP P450）酶活性进行测定。实验结果表明：两种鲟体内均含有一定量的P450酶,且史氏鲟体内微粒体蛋白浓度5.029 mg/g及P450酶活性0.102 nmol/mg?min均高于小体鲟相应的4.833 mg/g和0.088 nmol/mg?min。而恩诺沙星对史氏鲟及小体鲟体内的细胞色素P450酶活性均有一定抑制作用,随着给药浓度从0mg/kg到100mg/kg的增加,两种鲟体内的酶活性均逐渐降低,且史氏鲟体内P450酶活性降低幅度明显大于小体鲟,至100mg/kg给药组,两者差值仅为0.003 nmol/mg?min。上述结果对于探讨恩诺沙星在两种鲟体内的药物代谢及其与细胞色素P450酶之间相互作用的机制提供一定的理论依据。     

恩诺沙星对小体鲟和史氏鲟体内SOD活力影响的比较研究

在水温23℃、pH值6．5、溶氧10mg／L、氨氮含量小于0．1mg／L和亚硝酸盐含量小于0．001mg／L的条件下,将恩诺沙星按照0、20、40、60、80和100mg／kg浓度,连续口服给平均体重50．0±5．0g的小体鲟（Acipenser ruthenus Linnaeus）及史氏鲟（Acipenser sch...     

东北三省9株嗜水气单胞菌16S rDNA序列比较研究

采用特异性引物对采自黑龙江、吉林及辽宁省的9个嗜水气单胞菌分离株的保守基因16SrDNA部分序列进行PCR特异性扩增,对所得686bp扩增产物进行测序并比较研究。序列分析显示,东北三省的9个分离株同源性极高,都在百分之九十以上,测得基因序列共有保守位点613个,变异位点73个,简约信息位点3个。辽宁省与吉林省分离株遗传距离为0.005049;辽宁省与黑龙江省为0.005049;而吉林省与黑龙江省为0.004232。以致伤弧菌为外群的MP及NJ聚类树聚类结果一致,黑龙江省的第一和第二分离株聚成一个分支,而其他各分离株聚成另外一个大的分支,其中辽宁省的第二分离株与吉林省的第一和第二分离株又聚为一个较小的分支。实验结果表明,9个分离株相应保守区16SrDNA片段变化较小,同源性极高,聚类不明显,没有形成明显的区域性或特异性的变化。     

银杏速生早实繁殖技术研究

为探索银杏幼年生长缓慢、结果迟的问题，进行选择母树采种和种子处理、贮藏、催芽点播育苗、芽接、造林、抚育等系列技术研究。历经三年，获得“一年育苗，第二年造林，当年结果收益”的效果。比实生苗造林提早１５年结果，突破了银杏生产期存在的难题，为发展银杏速生、早实、丰产提供了依据。     

土豆的贮藏特性和条件

马铃薯（土豆）的食用部分为地下茎．含有大量的糖类物质及丰富的矿质元素．尤其是人体所需要的钙。马铃薯耐贮运。可以周年供应，是一种调剂蔬菜市场淡旺和深受人们喜爱的蔬菜。