奶牛子宫内膜粘液抗菌肽的分离纯化

为研发奶牛抗菌肽生物制剂,防治奶牛子宫内膜炎,本研究采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖弥散法检测子宫内膜粘液酸溶性提取物抗菌活性;应用琼脂糖电泳及水平电泳洗脱分离相应的抗菌条带,HPLC进一步分离纯化,琼脂糖弥散法检测纯化分子抗菌活性,Tricine-SDS-PAGE电泳检测其分子量。结果表明,从奶牛子宫内膜酸溶性提取物中纯化出一分子量约为14kD左右的抗菌多肽,对大肠杆菌(E.coliBL21)和金黄色葡萄球菌26003具有抗菌活性。本研究可能分离纯化出一种新的子宫内膜分泌的抗菌多肽,其可能参与奶牛子宫的天然防御机制。     

中药产复康对大鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响

为了观察中药制剂产复康对离体子宫平滑肌的收缩功能,测定了产复康对大鼠离体子宫平滑肌收缩功能和催产素引起的大鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响。结果发现低剂量产复康可以促进大鼠离体子宫平滑肌的收缩功能,提高子宫的活动性,高剂量则对子宫呈抑制作用;产复康对催产素引起的大鼠离体子宫平滑肌收缩功能具有抑制作用,且呈剂量-效应关系。产复康对大鼠离体子宫具有双向调节作用。     

人工胃/肠液和大鼠肠道菌群对氟苯尼考磺胺噻唑稳定性的影响

为新型偶联化合物-氟苯尼考磺胺噻唑(FST)研制和开发口服制剂提供数据支持,采用高效液相色谱法,对FST在5种溶液介质(无蛋白酶人工肠液、人工肠液、无蛋白酶人工胃液、人工胃液及大鼠肠道菌群培养液)中不同时刻的含量进行了研究,判断其稳定性差异。结果表明,FST在人工胃液和无蛋白酶人工胃液0～6 h含量保持基本稳定;在人工肠液和无蛋白酶人工肠液中孵育30 min已完全降解,且新出现的色谱峰在相同色谱条件下与氟苯尼考和磺胺噻唑对照品出峰时间相同。由此可知,FST的代谢产物为氟苯尼考和磺胺噻唑;FST在肠道菌群中发生了降解,0～8 h, FST含量迅速下降,而8～12 h趋于平稳,降至50%。说明FST在人工肠液中有明显的降解,在人工胃液中趋于稳定,肠道菌群对其稳定性也有一定的影响。     

高效液相色谱法测定阿司匹林丁香酚酯咀嚼片的有关物质

【目的】采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)法测定阿司匹林丁香酚酯(aspirin eugenol ester, AEE)咀嚼片的有关物质,建立一种更简便、准确的检测方法,应用于AEE咀嚼片的质量控制研究。【方法】通过HPLC法考察方法专属性、线性范围、检测限与定量限、精密度、重复性、稳定性、回收率、破坏性试验、耐用性试验及样品测定,综合评价AEE咀嚼片有关物质测定方法,并以自身对照法计算AEE咀嚼片有关物质的量。选用Phenomenex Luna C18(150 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,柱温为35℃;流动相以0.5%磷酸水溶液为A相,以乙腈为B相,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为279 nm;进样量为10μL。【结果】AEE咀嚼片有关物质的HPLC测定方法专属性高,被检测峰与其他峰分离度良好;AEE在0.26～26.00μg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好,R²=1(n=7);有关物质杂质A在0.25～25.50μg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好,R<...     

阿司匹林丁香酚酯的抗血小板聚集机制

将空白血小板样品分为8组,包括溶剂对照组以及模型组、阿司匹林组、丁香酚组、联合给药组、阿司匹林丁香酚酯(aspirin eugenol ester,AEE)低剂量组、AEE中剂量组和AEE高剂量组这7个处理组。各组加入对应的药物,并在37℃孵育3min,而后各处理组加入血小板激活剂二磷酸腺苷(ADP),并于37℃孵育5min,从而激活血小板。最后,通过ELISA检测试剂盒分别对血小板胞内cAMP含量变化以及血小板ATP释放量进行测定;利用荧光分光光度法以及钙离子特异结合的荧光探针Fura-2/AM对血小板胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]i)进行测定;通过蛋白质印迹法(Western blot)对血小板胞内Akt、ERK、JNK以及P38蛋白磷酸化程度进行测定。结果显示,AEE各组及其前药对照组均能显著降低胞内钙离子浓度以及ERK蛋白磷酸化(P0.05),但对胞内cAMP含量变化以及JNK、P38和Akt蛋白的磷酸化过程无显著性影响(P0.05)。此外,不同浓度AEE均可显著降低血小板ATP释放量(P0.01),而阿司匹林、丁香酚以及两者联用则均无显著性影响(P0.05)。在终浓度为25μmol/L时,AEE的降钙作用以及抑制ERK2蛋白磷酸化作用效果均优于其前药对照组,且该浓度下AEE能够显著降低血小板ATP释放量(P0.01)。由此可见,AEE通过降低血小板胞内钙离子含量和ATP释放量,以及抑制ERK2磷酸化从而抑制ADP诱导的血小板聚集,且相比于其前药增加了降低血小板ATP释放量这一新的作用途径。     

产复康对产后气虚血瘀证奶牛内皮素和一氧化氮的影响

[目的]观察产复康对产后气虚血瘀证奶牛血管内皮细胞的影响,探讨产复康治疗气虚血瘀证的机理。[方法]选择试验奶牛58头,分为气虚血瘀证治疗组、气虚血瘀证对照组、健康用药组和健康未用药组。分别于分娩前后测定血浆内皮素（ET）和血清一氧化氮（NO）的含量。[结果]气虚血瘀证奶牛产后血浆中ET含量和血清中NO含量显著升高;产后10d,NO含量开始有所下降,与对照组没有显著差异,但ET含量仍显著高于健康对照组;服用产复康10d后,ET含量仍显著高于对照组,而NO含量与健康对照组没有显著性差异。[结论]产复康可能通过升高气虚血瘀证奶牛ET和降低NO含量改善奶牛产后气虚血瘀证状态。     

芩连液与白虎汤对气分证家兔补体经典途径活化的影响比较

为比较经方白虎汤与自拟方芩连液的分子疗效区别,以静脉注射内毒素建立了具有高热证候的气分证家兔模型,并用白虎汤和自拟方芩连液分别进行治疗,通过ELISA检测比较治疗前后血清总补体(CH50)的含量变化,并采用实时荧光定量PCR技术检测了肝组织中补体第三成分(C3)基因和C-反应蛋白(CRP)基因的表达变化。结果表明,在气分证家兔模型中,补体系统以经典途径活化。白虎汤的治疗能同时保证C3基因和CRP基因的高表达起到治愈作用,而芩连液仅以提高CRP的表达量发挥一定的保护作用。研究表明白虎汤对动物气分证的疗效优于芩连液。     

防制胚泡着床障碍中药的筛选及药效研究

为了筛选防制胚泡着床障碍中药,本试验利用皮下注射米非司酮所致的小鼠胚泡着床障碍模型,以妊娠率、着床胚泡数、雌激素和孕激素及其比值为指标,将丹参、黄芪、川芎、黄芩、白术、菟丝子、桑寄生、续断、党参、当归等中药组成复方进行筛选和药效评价。筛选试验结果表明,方3组妊娠率显著高于方1组、菟丝子组和续断组(P＜0.05),也高于方2组和对照组,说明方3有利于小鼠胚泡的着床。方3的药效试验表明,保胎组妊娠率极显著高于对照组和高剂量组(P＜0.01),显著高于低剂量组(P＜0.05)。保胎组孕酮水平、孕酮和雌二醇比值极显著高于高、低剂量组、对照组和正常组(P＜0.01),孕酮和雌二醇比值显著高于中剂量组(P＜0.05),而保胎组、低剂量组和正常组雌二醇水平显著低于高剂量组和对照组(P＜0.05),中剂量组孕酮水平显著高于对照组(P＜0.05)。这表明方3能提高小鼠的孕酮水平及孕酮和雌二醇比值,有利于小鼠胚泡着床。     

“清宫液2号”治疗奶牛子宫内膜炎试验研究

子宫内膜炎是奶牛的重要疾病之一，在我国发病率一般为10％～30％，最高可达40％，平均约20％。奶牛子宫内膜炎引起奶牛不孕，增加胎间距，降低奶产量，给奶业造成巨大的经济损失，我国每年因该病造成的损失达数亿元人民币。采用抗生素类药物防治奶牛子宫内膜炎，虽能取得很好的疗效，但易造成抗药性，大剂量使用会造成有抗奶，危害人体健康。     

盐酸环丙沙星在子宫内膜炎奶牛乳腺排泄的研究

通过子宫内灌注盐酸环丙沙星,采用内标法以反相高效液相色谱法测定了4头患子宫内膜炎的奶牛乳汁中盐酸环丙沙星的药物浓度。研究表明,在奶牛给药后0 h~24 h,血药浓度大于乳药浓度,在24 h后,乳药浓度大于血药浓度。在48 h内盐酸环丙沙星的乳药浓度值均高于MIC值,所以仍具有抑菌作用,这对乳房炎的治疗具有重要意义。