小叶龙竹的快速繁殖与离体保存

 利用小叶龙竹种子培养的试管苗对其快速繁殖体系的建立与离体保存进行了研究,结果表明：根、茎、叶和小芽各外植体中,小芽切段可以较好的诱导芽的增殖且基本培养基MS附加3mg/L BA和0.1mg/L NAA为芽增殖最适培养基,增殖率可达1∶4.4。培养基1/2MS附加1mg/L NAA和1mg/L IBA为最佳生根培养基,15d丛芽生根率为93%,27d丛芽生根率则达到了100%。MS培养基附加10mg/L CCC培养基为最佳离体保存培养基,保存时间可达120d以上,转接到MS外加3mg/L BA和01mg/L NAA的恢复培养基上,培养50d,可以100%恢复生长。据调查：小叶龙竹的快速繁殖与离体保存研究国内外尚属首次报道     

CRISPR/Cas9系统编辑水稻Wx基因

【目的】 直链淀粉含量与稻米品质密切相关。Wx基因是控制水稻直链淀粉合成的主效基因,通过对Wx基因定点编辑以获得稳定遗传、直链淀粉含量适宜的突变体。【方法】 构建CRISPR/Cas9表达载体pGK03-Wx-gRNA (靶点1和2分别在Wx基因第1和第2外显子),利用工程菌EHA105遗传转化超级稻楚粳27,潮霉素筛选获得转化株系,对转化株系及其后代进行分子检测、测序、基因表达和遗传稳定性分析以及直链淀粉含量测定。【结果】 获得9个独立的T₀代转化株系,靶点1(L1~L5) 5个株系,突变频率100%,靶点2(L6~L9) 4个株系,突变频率75%。由T₀代突变体衍生出T₁和T₂代株系,测序发现T₀、T₁和T₂代株系出现缺失(单、双、多碱基缺失)和单碱基插入两种突变类型;T₀至T₁代部分株系(L1、L2、L3和L6)发生再编辑,T₁至T₂代遗传稳定。与野生型相比,突变株系RNA水平Wx基因表达量显著下降(P<0.01),稻米直链淀粉含量显著降低(P<0.01),从17.5%降到1.93%。【结论】 利用CRISPR/Cas9系统成功编辑水稻Wx基因,获得了稳定遗传、低直链淀粉含量的突变体,为稻米品质改良提供了材料。     

花药培养获得优质抗稻瘟病水稻

用低海拔优质粳稻江南香糯和高海拔高抗稻瘟病粳稻云系3号进行常规杂交,稻瘟病抗性跟踪,于F2取稻瘟病抗性好的稻穗进行花药培养,共接种花药4608枚,获得绿苗567株,绿苗克隆35个。经宜良稻瘟病病圃田间稻瘟病抗性筛选获得19个高抗稻瘟病克隆,结合米质外观考察等筛选到H18等9份优质抗稻瘟病水稻材料。同一份克隆来源的花培后代植株株系内性状整齐一致,可直接测恢或转育不育系,为开展优质抗稻瘟病滇型杂交水稻新品种选育提供了材料。     

1996～1998年杂交水稻主要品种的胞质类型分析

杂交水稻的生产应用为我国粮食生产作出了巨大贡献,其种植面积占水稻年播种面积的50%以上.本文采用九种不育胞质类型划分法,对我国1996～1998年杂交水稻主要品种的胞质类型进行了分析.生产上应用的三系杂交稻按其胞质类型所配组合的播种面积比重排序依次为野败型、冈·D型、印尼水田谷型、矮败型、两系、红莲型、K型和BT型;野败型的面积比重在逐年下降,冈·D型、印尼水田谷型和矮败型等的面积比重在逐年增加.两系杂交稻10余个组合通过了省级审定,培矮64S的广泛应用展示了两系杂交稻超三系的广阔前景.我国已育成超级杂交稻苗头组合,个别组合在部分连片示范点(6.7hm2)达到了日产稻谷100 kg/hm2的超级稻指标.     

滇型杂交粳稻亲本种质资源抗瘟性研究

１９９３～１９９６年，测定了８０６份滇型杂交粳稻种质资源的抗瘟谱，筛选出抗谱较广的材料６４份。探讨了恢复系对杂种Ｆ１抗瘟性的贡献，提出了利用恢复系进行杂交粳稻抗病基因布局来控制稻瘟病发生的育种对策。     

抗稻瘟病紫米921H的离体诱选

 1992年用稻瘟病菌(Pyricularia grisea)粗毒素掺入水稻花药培养基中在愈伤组织阶段进行抗性诱导,采用一穗单传选变异法,异地加代,1994年在DH群体四代中获得13份抗性较好的株系,其中紫米921H农艺性状优良且高抗稻瘟病,单产可高达7500kg/hm².     

甘蔗遗传转化中不同阶段潮霉素抗性筛选

以新台糖22的胚性愈伤组织为材料,在诱导培养基、分化培养基及生根培养基中,分别添加不同浓度的潮霉素(Hyg)为选择性试剂,以确定甘蔗遗传转化时的最佳筛选浓度。结果表明:潮霉素对不同阶段培养基的敏感性存在一定差异,在甘蔗遗传转化时3种培养基的抗性筛选浓度分别以50、30、30mg/L为佳;在分化培养基内的毒性作用比在诱导培养基内更快、效果更好,故遗传转化时可直接将Hyg用于分化培养基进行抗性芽筛选试验。     

云南高原粳稻新品种(品系)抗瘟性研究

 我们参加云南省"八五"科技攻关重点协作项目"高原粳稻新品种选育及应用配套技术研究",具体承担稻瘟病抗性鉴定部份的研究工作.     

一份云南地方稻广谱持久抗稻瘟病初步分析

为发掘利用广谱持久抗稻瘟病水稻质源,接种分析了云南地方粳稻品种子预44对云南省7群18个稻瘟病菌生理小种的苗叶瘟抗性,考察了该品种大田穗瘟抗性及其作为抗源育种利用的情况.结果表明,子预44抗6群16个中国稻瘟病菌生理小种,即ZA1,ZA49,ZA57,ZA61;ZB1,ZB13,ZB17,ZB25;ZC1,ZC3,ZC13,ZC15;ZE1,ZE3;ZF1和ZG1.而且作为抗源育种利用20多年还未丧失抗性,具有广谱持久稻瘟病抗性.用其作父本分别与高感稻瘟病粳稻面江新团黑谷和江南香糯杂交,获得F1、F2和BC1F1遗传群体.用稻瘟病菌生理小种ZB13和ZE1分别对亲本丽江新团黑谷、江南香糯和子预44及其杂交后代群体F1、F2和BC1F1进行分蘖期接种鉴定和遗传分析.结果表明,子预44对稻瘟病菌生理小种ZB13和ZE1均表现为单基因控制的显性遗传.这些研究结果为进一步开展子预44抗稻瘟病基因的定位与克隆,以及育种利用提供了重要基础.     

有效去除农杆菌和籼稻转化系统优化

为了提高根农杆菌籼稻转化效率，将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck和潮霉素磷酸转移酶基因hpt：分别置于紧密相连的2个T-DNA上，构建载体pCDMARUSCK-HPT，电激法将表达载体转化农杆菌LBA4404．获得工程菌。比较了提门叮和国产噻孢霉素对工程菌LBA4404．的抑制效果，试验得出提门叮在500mg／L以内比噻孢霉素能更有效地去除水稻细胞中的农杆菌，而且低浓度条件下(250mg／L)就能有效地抑制工程菌LBA4404，并且有利于水稻转化细胞成功地再生植株。确立了工程菌LBA4404菌液浓度OD值0．8，浸染时间5min为明恢86合适的转化参数。在此基础上，采用优化的农杆菌介导法转化杂交籼稻优良恢复系明恢86，获得转基因植株127个克隆，转化效率4．5％。