朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21(DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件。结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68kD的朱砂叶螨AChE蛋白。底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响。确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5mg/mL。通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础。     

朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶真核表达载体构建及在293T细胞中表达条件

乙酰胆碱酯酶(AChE;EC 3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标。目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道。本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在293T细胞中表达条件摸索。将朱砂叶螨野生型ace完整读框和去掉3’疏水区的ace基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,经PCR和双酶切鉴定及测序验证后,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/ace。采用GFP报告基因确定在293T细胞中表达条件摸索,结果表明293T细胞的最适转染时间为48h和LipofectamineTM2000转染试剂的最适加样量为20μL。本试验成功构建了朱砂叶螨AChE的真核表达载体,确定了在293T细胞中的表达条件,为后续筛选新型选择性AChE抑制剂奠定了基础。     

强化屋顶绿化养护 确保植物种植成活——北京地区屋顶绿化存在问题及解决方法的探讨

屋顶绿化是城市绿化的有益补充,在城市绿地资源高度紧张的情况下,它是提高城市绿化覆盖率,改善生态、景观环境,节约能源,缓解城市热岛效应,建设宜居城市的重要举措之一。因此,北京市把做好屋顶绿化工作作为为群众办实事、提高2008年奥运环境质量的重要举措来抓。近年来,北京市各区、县园林绿化主管部门在屋顶绿化协会和北京市园林绿化局的领导下,大力开展屋顶绿化工作,使全市屋顶绿化工作快速发展、成效显著。目前,北京市屋顶绿化工作已成为城市绿化美化工作的一项重要组成部分,     

城市绿地系统规划的方法与实践

分析和阐述了城市绿地系统的相关概念和与之相适应的理论,指出了传统城市绿地系统规划存在的一些主要问题,并结合常德城市绿地系统规划实践,探讨相应的规划措施。     

山花烂漫，精彩无限（四）

野生花卉作为栽培植物的祖先或是物种基因库，已经在我们身边生长了若干年，它们与栽培植物相比也许没有那么艳丽、开花也没有那么华贵!然而，它们却有着栽培植物所没有的那种特立独行、坚忍不拔的气质。这期介绍几种公园里或者城市里常见的园林栽培植物的祖先。     

观赏野花系列之“五福花”

"五福花",喜欢它是从喜欢它的名字开始。在中国人习俗中,"福"字代表了吉祥安康、幸福美满、富贵长寿等等良好的祝愿。因此在汉语的祝福语中经常可以见到幸福吉祥、五福临门等家喻户晓的辞句。甚至于奥运吉祥物都被称为"五福娃"。经考证,"五福"这个名词,始出于《书经》和《洪范》,有着悠久的历史。书中记载的五福第一福是‘长寿’,第二福是‘富贵’,第三福     

膨润土改善土壤抗渗性试验研究

以宁夏广泛分布的黏性土、黄土、砂土为研究对象,试验研究了膨润土的掺入量对3种土样压实干密度和渗透系数的作用效应,揭示了作用机理和作用规律,得出了膨润土的最优掺配比,为膨润土直接与土壤拌和应用于防水工程提供了理论依据.试验表明:膨润土能明显降低土壤的渗透性,时砂土抗渗性能的改善作用尤为明显.膨润土掺配比存在一个最优值,当膨润土掺量小于最优值时作用效应显著,超过最优值后作用效应增幅很小.对于砂土,膨润土的最优掺配比为8%(重量百分比),黄土和黏土的最优掺配量在6%左右.     

我国发展低碳农业面临的问题

农业的低碳化在当今讲求环保节能的社会是一种不可阻挡的趋势和潮流,中国的低碳农业虽然已有一定的发展,但相比于世界先进水平仍然存在着不少问题。     

花期喷施生长调节剂和氨基酸肥对枣树结实和育性的影响

以两个枣品种为试材,研究了花期喷施生长调节剂和氨基酸肥对自花授粉和自然授粉条件下的结实及种仁发育的影响。结果表明,低浓度的GA3(5~10 mg/L))虽可提高枣树的结实率但降低了枣果的可育率,当GA3浓度达到35 mg/L时结实率亦降低;150 mg/L的6-BA0、.02 g/L氨基酸肥对自花结实率、自然结实率、自然可育率都有降低作用。     

秋季里话“秋”花

正秋季,百花凋零,百草渐枯,难免使人有些悲愁。然而对于那些喜欢花花草草的朋友们来说,大可不必过于感伤。因为,在这"百花凋谢"的秋季里,如果你仔细留意,还是可以找到很多顽强盛开的野花的。至少在古代最具豪情的农民起义军首领兼诗人——黄巢的眼中,就不乏秋花。一首荡气回肠的《不第后赋菊》道出了他的雄心壮志,同时也将秋天最美丽的菊花描写的淋漓尽致。"待到秋来九月八,我花开后百花杀。冲天香阵透长安,满城