鸡睾丸生精上皮细胞冷冻保存研究

以广西土鸡为试验材料，利用两步酶解法从出壳后20～30日龄公鸡睾丸中获取生精上皮细胞，以含20％胎牛血清的DMEM为基础培养液，比较了不同浓度DMSO和蔗糖对生精上皮细胞冷冻保存效果的影响。结果表明：DMSO的最佳浓度为10％，添加蔗糖对冻存有害。以10％DMSO为防冻剂，复苏后生精上皮细胞原代混合培养可形成典型的精原干细胞集落，集落呈碱性磷酸酶（AKP）阳性，说明以10％DMSO为防冻剂的冷冻体系适合鸡睾丸生精上皮细胞的冷冻保存。     

姜黄素对草鱼生长性能、抗氧化应激能力及核因子 E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路相关基因表达的影响

本试验旨在研究姜黄素对草鱼生长性能、抗氧化应激能力以及核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路相关基因表达的影响。选择初体质量为(5.11±0.08) g的草鱼幼鱼525尾,随机分为5组(每组3个重复,每个重复35尾),分别饲喂在基础饲料中添加0(对照)、200、400、600和800 mg/kg姜黄素的5种饲料。试验期60 d。饲养试验结束后,每重复取15尾规格基本一致的草鱼,每尾鱼腹腔注射10 mg/kg BW敌草快,进行急性氧化应激试验,在注射前(0 h)、注射后24 h时分别采样,检测草鱼血清和肝脏相关的生理生化指标,以及肝脏抗氧化相关基因的mRNA表达水平。结果表明:1)随着饲料中姜黄素添加量的增加,草鱼幼鱼的增重率、特定生长率和成活率均先升高后下降,而饲料系数和肝体指数则先下降后升高,当饲料中姜黄素添加量为400、600 mg/kg时草鱼的生长性能较佳,而脏体指数和肥满度在各组间的差异均不显著(P0.05)。2)在草鱼注射敌草快前,其血清皮质醇(COR)、葡萄糖(GLU)含量及谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性在各组间均无显著差异(P0.05);在注射敌草快24 h后,草鱼血清上述指标随着饲料中姜黄素添加量的增加呈先下降后升高的变化趋势,当饲料姜黄素添加量为400、600 mg/kg时达到较低水平,显著低于对照组(P0.05)。3)在草鱼注射敌草快前、注射24 h后,随着饲料中姜黄素添加量的增加,草鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,总抗氧化能力(T-AOC)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,Nrf2、铜与锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、CAT、GSH-Px和诱导型热休克蛋白70(HSP70) mRNA表达水平均呈先升高后下降的变化趋势,而肝脏活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)mRNA表达水平均呈先下降后升高的变化趋势,当饲料姜黄素添加量为400、600 mg/kg时,这些指标分别达到较高或较低的水平。由此可见,饲料中添加姜黄素400、600 mg/kg可促进草鱼幼鱼的生长,降低饲料系数,提高鱼体抗氧化应激能力,对敌草快诱导的急性氧化应激损伤具有保护作用,并可激活Nrf2/ARE信号通路相关基因的表达。     

露水草粉碎粒度和添加水平对日本沼虾生长性能、肝胰腺消化酶活性及非特异性免疫指标的影响

本试验旨在研究富含蜕皮激素的露水草(Cyanotis arachnoidea C.B.Clarke)对日本沼虾生长性能、肝胰腺消化酶活性及非特异性免疫指标的影响。试验1:分别将粉碎粒度为10、30、50和180μm的露水草添加到基础饲料(不含露水草)中,并使饲料中蜕皮激素含量均为10 mg/kg;试验2:将粉碎粒度相同(粉碎粒度为180μm)但蜕皮激素含量不同的露水草添加到基础饲料中,使饲料中蜕皮激素含量分别为3.30、6.60、13.20和26.40 mg/kg。将配制的8种试验饲料分别饲喂初始体重为(0.08±0.01)g的日本沼虾,同时试验1和试验2中各设1个饲喂基础饲料的对照组。每种饲料设3个重复,每个重复70尾,试验期60 d。饲养试验结束后对各组日本沼虾进行嗜水气单胞菌感染试验。结果显示:在试验1中,与对照组相比,添加不同粉碎粒度露水草组日本沼虾的特定生长率(SGR)和增重率(WGR)均显著升高(P0.05),饲料系数(FCR)显著降低(P0.05);成活率(SR),肝胰腺指数(HSI),肝胰腺胃蛋白酶、类胰蛋白酶和淀粉酶活性,血细胞总数(THC),血淋巴吞噬活性(HPA)以及血浆超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(AKP)活性各组之间无显著差异(P0.05);各组日本沼虾经嗜水气单胞菌处理后的累积死亡率无显著差异(P0.05)。在试验2中,与对照组相比,6.60 mg/kg蜕皮激素组和13.20 mg/kg蜕皮激素组的WGR和SGR显著升高(P0.05),FCR显著降低(P0.05);26.40 mg/kg蜕皮激素组的W GR、SGR、SR和HPA显著低于对照组(P0.05),其WGR和SGR也显著低于其他添加露水草组(P0.05);3.30 mg/kg蜕皮激素组、6.60 mg/kg蜕皮激素组、13.20 mg/kg蜕皮激素组之间W GR和SGR差异不显著(P0.05);各组日本沼虾的HSI,肝胰腺胃蛋白酶、类胰蛋白酶和淀粉酶活性,THC以及血浆SOD、AKP活性的差异均不显著(P0.05);26.4 mg/kg蜕皮激素组经嗜水气单胞菌处理后的累积死亡率与其他组相比显著升高(P0.05)。由此可见,饲料中添加露水草使蜕皮激素含量达到6.60~13.20 mg/kg时对日本沼虾具有显著的促生长作用,日本沼虾对蜕皮激素的吸收和露水草的粉碎粒度无显著相关性。露水草主要药用成分蜕皮激素对日本沼虾无免疫增强作用,且露水草蜕皮激素过量(饲料中蜕皮激素含量为26.4 mg/kg)还将导致日本沼虾SR和抗菌能力降低。     

饲料中蝇蛆粉用量对青鱼生长、体成分和消化酶活力的影响

用不添加蝇蛆粉的对照饲料和添加1.0%、1.8%、2.6%、3.4%、4.2%、5.0%蝇蛆粉的6种试验饲料,分别饲喂初重为(127.42±4.83)g的青鱼8周,研究蝇蛆粉对青鱼生长、体成分和消化酶活力的影响。试验结果表明:摄食添加5.0%蝇蛆粉组青鱼终末体重和特定生长率最高,饲料系数最低;饲料中添加蝇蛆粉可降低青鱼肝体比和脏体比,当添加量为5.0%时降至最低且与对照组差异显著(P0.05)。摄食添加4.2%蝇蛆粉组,青鱼全鱼粗蛋白含量达到最大值,与对照组和蝇蛆粉添加量为1.0%、1.8%组差异显著(P0.05),添加量为3.4%、4.2%、5.0%组鱼体肌肉中的粗蛋白含量较对照组显著升高(P0.05)。摄食添加4.2%蝇蛆粉的试验饲料后,青鱼肠道和肝胰脏蛋白酶活力以及肠道淀粉酶活力均达到最大值且与对照组差异显著(P0.05),摄食5.0%蝇蛆粉组其肠道和肝胰脏脂肪酶活力达到最大值与对照差异显著(P0.05)。因此,在试验条件下,饲料中添加4.2%~5.0%的蝇蛆粉能促进青鱼的生长、提高青鱼肠道和肝胰脏消化酶活力,提高全鱼蛋白含量改善肌肉品质。     

绿色荧光蛋白在鸡胚成纤维细胞中的表达

应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-C1转染到培养至第二代的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,同时使用活体DNA染料Hoechst3334(2H342)对CEF细胞核荧光染色,通过荧光倒置显微镜和RT-PCR方法检测GFP的表达产物。在荧光倒置显微镜下可见CEF的胞质和核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质,在H342作用下,细胞核呈现蓝色荧光;转染细胞中转录产物经RT-PCR扩增后,在凝胶上可见与GFP基因片段分子量大小一致的条带。可见,GFP基因可以被转染至CEF中,并在CEF中表达。     

青鱼对8种饲料原料中营养物质的表观消化率

本试验旨在研究青鱼(Mylopharyngodon piceus)对国产鱼粉、蝇蛆粉、玉米蛋白粉、大豆粕、花生粕、棉籽粕、菜籽粕和米糠8种饲料原料干物质、粗蛋白质、氨基酸、粗脂肪、总磷和总能的表观消化率。试验饲料由70%基础饲料和30%待测饲料原料组成,并以0.1%的三氧化二钇(Y2O3)为外源指示剂。选取平均体重为(60.17±1.28)g的青鱼270尾,随机分成9组,每组3个重复,每个重复10尾鱼。对照组试验鱼饲喂基础饲料,试验组试验鱼分别饲喂1种试验饲料。饲喂1周后采用自排法收集粪便待测。结果表明:8种饲料原料的干物质、粗蛋白质、粗脂肪、总磷、总能以及总氨基酸的表观消化率的范围分别是62.17%～86.47%、83.34%～95.84%、78.93%～100.06%、37.33%～81.99%、66.75%～89.86%、86.33%～96.58%。在8种饲料原料中,玉米蛋白粉的干物质、总磷和总能的表观消化率最高,而大豆粕的粗蛋白质、粗脂肪和总氨基酸的表观消化率最高;棉籽粕的干物质和总能的表观消化率最低,米糠的粗脂肪和总磷的表观消化率最低。各饲料原料中总氨基酸表观消化率与粗蛋白质表观消化率的变化趋势一致,其中以蝇蛆粉最低。由此可见,大豆粕和玉米蛋白粉是青鱼的优质植物蛋白质源,可适量替代鱼粉;蝇蛆粉中粗蛋白质和氨基酸的消化率都较低,在青鱼饲料中的添加量不宜过高;花生粕、棉籽粕和菜籽粕也是较好的植物性蛋白质源,在青鱼饲料中适量添加既有利于饲料的营养平衡,还可降低饲料成本;米糠作为青鱼的能量原料必须保持新鲜,并控制其在饲料中的用量。     

不同冷冻液对鸡精原干细胞冷冻-解冻后存活力的影响

采用两步酶解和差异贴壁法分离、纯化鸡精原干细胞(SSCs),比较了6种冷冻保护液对其冷冻保存效果,结果表明:FBS浓度为10%时,10%DMSO与10%甘油解冻后细胞存活率分别为54.05%和37.49%,差异显著(P<0.05);以10%DMSO为冷冻保护剂时,FBS浓度从10%增加到20%,解冻后细胞存活率分别为54.05%和69.06%,差异显著(P<0.05);在冷冻液Ⅰ基础上,添加3种不同浓度的蔗糖溶液,解冻后细胞存活率分别为52.49%、47.65%和51.94%,三者之间差异不显著(P>0.05),且与冷冻液Ⅰ组差异也不显著(P>0.05);将解冻后细胞接种饲养层上培养,除甘油组外,SSCs均能增殖并形成AKP阳性集落,但10%DMSO加上20%FBS组细胞增殖速度和集落数优于其他组合,表明10%DMSO加上20%FBS为鸡SSCs最佳冷冻保护剂。     

鸡胚睾丸支持细胞的传代培养与鉴定

以孵化18d的广西土鸡鸡胚为实验材料,采用两步酶消化法分离鸡胚睾丸支持细胞,置于37℃、5％C02的培养箱中培养,用低渗的磷酸缓冲液（PBS）处理进行纯化,并对原代和传代支持细胞进行了鉴定。结果显示,睾丸支持细胞生长良好,已传至第4代;经低渗处理,可去除绝大部分的生精细胞,获得的支持细胞纯度可达95％;鉴定结果显示,支持细胞为碱性磷酸酶（AKP）阴性;油红O染色显示,支持细胞胞质内舍有大量的脂肪滴,核内有双极小体;丫啶橙染色证明支持细胞的细胞质中富含RNA,细胞核内的DNA含量也较高;罗丹明123染色证明支持细胞含有丰富的线粒体。结论：经两步酶消化法以及低渗处理后能得到纯度较高的鸡胚睾丸支持细胞;37℃、5％CO2的培养条件适宜支持细胞的生长;AKP染色、油红O、丫啶橙和罗丹明123等方法简单易行,适用于鸡胚睾丸支持细胞的鉴定。     

大学生实践创新能力培养研究——以湖州师范学院细胞工程研究所为例

以湖州师范学院细胞工程研究所为例,介绍了大学生实践创新能力的培养内容,提出了培养大学生创新实践能力的措施,分析了该研究所在培养大学生实践创新能力工作中取得的进展与成果。