一株高产谷氨酰胺酶菌株的鉴定和酶活特性的研究

对筛选得到一株高产谷氨酰胺酶菌株进行了初步鉴定并对酶活特性做了研究.通过生理生化实验并结合菌体形态特性,结果发现该菌株可以确定该菌属于柠檬酸细菌属(Citrobacter).通过单因素试验,考察了温度、pH、NaCl和产物谷氨酸对该菌株产生的谷氨酰胺酶的影响.结果发现菌株产生的谷氨酰胺酶的最佳反应pH为6.2,酶最适反应温度为50℃.酶最稳定的pH为6.2,温度低于40℃,酶具有较高的稳定性.高浓度的NaCl对谷氨酰胺酶活性基本无影响.谷氨酸对酶也没有明显的抑制作用.     

比熊母犬生产前后养护要点

1比熊母犬孕前注意事项1.1选择最佳配种日期比熊母犬在成长到6~8个月会首次发情,但此时的比熊母犬并未发育完全,如果此时进行交配,会对母犬身体健康带来影响。比熊母犬每次发情间隔时间约6~9个月,而比熊母犬第一次配种的最佳犬龄为2周岁开始,前提是保证躯体健康,交配季节最好选择在春季。比熊母犬的发情期共21 d,母犬发情的第10~13天是最佳的配种日,所以想让母犬顺利受孕,一定要把握住最佳时机。一般在母犬发情的第10天进行首次交配,再隔1 d交配一次,配种时间选择上午,在最佳配种日交配2次,通常在这种情况下经过配种的母犬最易受孕。     

耐氮胁迫玉米种质材料的筛选研究

为筛选耐低氮玉米种质材料,采用水培法对20份具有不同代表性的玉米种质材料于氮素营养临界期进行氮素胁迫试验.通过对缺氮症状指数、叶绿素、总干重、根冠比、含氮量、氮素转化率等指标分析得出,不同品种在低氮胁迫条件下的差异很明显,2号、3号、6号、11号、12号和18号是耐低氮玉米种质材料,5号、13号、14号、16号和20号是不耐低氮的玉米种质材料.     

玉米DDGS中抗生素残留分析

【目的】玉米发酵生产燃料乙醇的副产物酒糟蛋白饲料（DDGS）常作为蛋白质替代饲料广泛用于动物生产中。随着DDGS产业链的扩大,其生产过程中所带来的抗生素的残留问题应该得到重视,但目前关于DDGS中抗生素的残留研究报道较少。对全国经营和使用环节的玉米DDGS进行抽样调查,对70种抗生素的残留含量进行分析测定,以了解目前中国饲料用DDGS中抗生素的残留情况。【方法】首先利用四级杆飞行时间质谱（quadrupole time-of-flight mass spectrometry,QTOF）建立了大环内酯类、氟喹诺酮类、磺胺类、喹恶啉类、β-内酰胺类、林可胺类、四环素类、酰胺醇类等共70种抗生素药物基于质量数、保留时间和特征碎片离子的数据库。在全国9个省、市、自治区抽取经营和使用环节的玉米DDGS样品74批次,筛查其中可能含有的抗生素药物。样品的前处理：取一定量的均质样品,加入乙腈和水的混合溶液进行提取,经涡旋、震荡、离心后,取上清液过NH2固相萃取柱,收集淋洗液N2气浓缩至一定体积,过0.22 μm滤膜。样品的分析：首先利用QTOF建立的筛查列表对样品DDGS中可能残留的抗生素进行初步筛选,以确定残留抗生素的种类,而后采用液相色谱串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）对发现疑似含有抗生素残留的样品进行定量分析,以确定抗生素的残留量。【结果】欧盟指令2002/657/EC规定了在应用质谱仪对目标化合物进行确证时的准则。一个母离子为2分,一个子离子为2.5分。在本试验条件下所有抗生素的检测结果都能达到这个要求,符合对目标化合物的确证准则。经QTOF定性分析后,抽样的所有DDGS中有一批次样品中含有抗生素残留,种类为甲氧苄啶。样品母离子峰、二级特征离子碎片、出峰时间与标准品完全一致,样品和标准品所有提取碎片离子及离子丰度比一致。利用LC-MS/MS对残留抗生素进行定量分析后,确定其残留量为107.7 ng•g-1。甲氧苄啶在添加浓度为10-1 000 ng•mL-1,平均添加回收率为75.2%-97.9%,线性相关系数大于0.99,日内标准偏差为2.8%-5%,日间标准偏差为8%-10%。【结论】利用QTOF建立DDGS中抗生素类药物的定性筛选方法可作为玉米DDGS中残留抗生素快速筛查方法。存在残留的甲氧苄啶抗生素,可能在玉米发酵生产DDGS前被添加,目的是抑制有害微生物的生长繁殖。抽样分析结果表明,目前中国玉米DDGS中抗生素残留的种类较少、残留量也较低,但DDGS中抗生素残留情况仍不容忽视,相关部门也未给出DDGS发酵过程中可使用的抗生素的种类范围、使用限量以及使用规范。此外,还应该研究直接采用QTOF进行定量分析的方法,以及研究包括维吉尼亚霉素在内的其他抗生素的QTOF分析方法。     

重组死亡素-蜂毒素杂合肽表达·分离纯化的研究

[目的]采用pET-28a系统包涵体表达死亡素-蜂毒素杂合肽。[方法]将死亡素基因重组到pET-28a质粒上,转化到大肠杆菌BL21中构建基因工程菌,SDS-PAGE电泳检测工程菌诱导表达时间,亲和层析纯化目的蛋白。[结果]表达的目的蛋白为包涵体,工程菌诱导表达时间8h最佳。[结论]包涵体方式表达死亡素-蜂毒素可以获得较高的表达量,纯化后蛋白纯度较高。     

二苯乙烯苷和三七总皂苷配伍对Aβ25-35致PC12细胞损伤影响的研究

目的 探讨二苯乙烯苷(TSG)和三七总皂苷(PNS)配伍对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的影响。方法 PC12细胞采用Aβ25-35诱导建立阿尔茨海默病的损伤模型,被随机分成空白组、模型组、多奈哌齐组（10 μmol/L）、TSG（100 mmol/L）组、PNS组（50 mg/L）、TSG-PNS配伍组（TSG100 mmol/L+PNS50 mg/L)。取细胞上清液测各组的乙酰胆碱酯酶（AchE）及超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量。结果 与模型组比较,TSG组、PNS组、TSG-PNS配伍组可降低AchE活力、MDA含量及提高SOD活力(P<0.05)。且TSG-PNS配伍组的效应比TSG或PNS单用组效应更好(P<0.01)。结论 TSG和PNS配伍对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与胆碱能系统及氧化应激有关。     

深化改革我国农村基本经营制度的思考

文章结合十七届三中全会《中其中央关于推进农村改革发展若干重大问题的决定》，探讨深化改革我国农村基本经营制度的主要内容。作者认为，必须坚持稳定和完善农村基本经营制度，赋予农民更加充分而有保障的土地权利，发展农村土地承包经营权流转，推进农业产业组织创新。     

不同土壤耕作方式对东北风沙土区玉米田土壤质量及产量的影响

[目的]研究黑龙江省西部不同土壤耕作方式对玉米产量及土壤性状的影响,为该地区农业生产提供参考。[方法]比较常规耕作、旋耕、翻耕、深翻和超深翻耕作对玉米产量和土壤物理特性的影响。[结果]翻耕和超深翻耕作增加了土壤含水量和田间持水量,降低了耕层土壤渗透速率、土壤容重和土壤紧实度,但是增加犁底层土壤渗透速率、土壤容重和土壤紧实度。翻耕、深翻和超深翻处理耕层土壤三相结构距离(STPSD)和土壤结构指数(GSSI)较好;翻耕、深翻和超深翻处理显著降低犁底层土壤的GSSI,增加STPSD;旋耕处理没有显著影响犁底层土壤GSSI和STPSD。与常规耕作处理相比,翻耕和超深翻分别增加玉米产量7.6%和6.0%。翻耕比超深翻玉米产量高10.9%。深翻处理玉米产量为5.58t/hm2,比常规耕作减产8.1%。[结论]在不完全打破犁底层情况下,在黑龙江西部地区翻耕是比较理想的耕作方式。     

生物炭对侵蚀黑土团聚体的影响

[目的] 探讨生物炭对侵蚀黑土团聚体的修复效果,揭示生物炭对侵蚀黑土团聚体的影响机制,为修复侵蚀黑土提供科学依据。[方法] 以侵蚀黑土为研究对象,研究未剥离农田（CK）、未剥离农田施生物炭（CK+BC）、模拟侵蚀土壤（RS）、侵蚀土壤施生物炭（RS+BC）4个处理生物炭对黑土团聚体的影响。[结果] 与CK处理相比,CK+BC处理中0.25～2 mm粒级团聚体含量增加了14.01%,RS+BC处理中0.25～2 mm粒级团聚体含量比RS处理增加了12.11%,生物炭提高了团聚体的几何平均直径（GMD）和大于0.25 mm团聚体含量,增加了CK+BC和RS+BC两个处理的原土和>0.25 mm粒级团聚体中的土壤有机碳含量（SOC）,GMD分别与SOC和交换性钠呈正相关和负相关,且SOC对团聚体的胶结作用大于交换性钠的分散作用,提高了侵蚀黑土团聚体稳定性。[结论] 生物炭改善黑土侵蚀后的结构,促进了土壤团聚化,对侵蚀土壤具有良好的修复作用,是修复侵蚀黑土的有效措施。     

基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

旨在建立蓝舌病病毒（BTV）血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法。SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot显示,纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0 μg·孔^-1;血清最佳稀释倍数为1：200,酶标二抗最佳工作浓度为1：4 000,临界值分别为0.29和0.35。上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1：1 600;批内和批间重复性变异系数均小于10%;检测76份重庆地区牛群血清样品,阳性符合率为98%,阴性符合率为100%。本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础。