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人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的50kDa的酸性蛋白质,富含亮氨酸和半胱氨酸。作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来的胰RNase的侵袭,同时做为RNase抑制剂在各实验室广为应用。HRI主要结构是由7个富含亮氨酸的重复序列组成,7个亮氨酸重复单位有规律环状排列使N-末端、C-末端在空间上较为接近。本文用PCR的方法在HRIcDNA5'端去除30个碱基,并将此缺失突变的HRI的cDNA片段构建于质粒pPIC9K,PCR和双酶切鉴定结果为阳性,测序结果证实在HRIcDNA5'端成功引入30个碱基的缺失突变。电击转化入毕赤酵母(Pichiapastores)GS115中,进行分泌型表达。对表达产物进行亲和层析纯化。经SDS-PAGE和Western-blot免疫印迹杂交,证实表达产物为N-端缺失突变的核糖核酸酶抑制因子。 相似文献