小鼠胚胎着床相关基因中mir-21靶基因的初步验证

利用microRNA靶位点预测网站结合小鼠胚胎着床芯片数据预测了mir-21的5个与着床相关的靶基因:Reck、F3、Upk1 b、Ggh、Tmed6,通过分别构建含有靶基因3′UTR的重组报告载体、pre-mir-21或/和mir-21inhibitor体外转染细胞、双荧光素酶活性分析初步确定mir-21的靶位点。pre-mir-21可显著降低转染上述5个重组载体的细胞内荧光素酶活性;mir-21 inhibitor可显著增加转染Reck、Upk1 b和Tmed63′UTR的重组载体的细胞内荧光素酶活性;pre-mir-21和mir-21 inhibitor共转染可分别显著增加转染含有Reck3′UTR、F33′UTR、Upk1 b3′UTR和Ggh3′UTR的重组载体的细胞内荧光素酶活性。Reck和Upk1b可能是mir-21的靶基因。     

小鼠子宫内膜诱导蜕膜化的研究

[目的]建立体内和体外诱导小鼠子宫内膜蜕膜化的方法。[方法]利用假孕小鼠子宫角注油和激素处理体外分离的4周龄小鼠子宫内膜基质细胞进行诱导蜕膜化,通过半定量PCR和实时定量PCR检测蜕膜化标志分子蜕膜/滋养层泌乳雌激素相关蛋白。[结果]假孕第4天子宫角注油和雌激素与孕酮联合处理小鼠子宫内膜基质细胞都可显著提高蜕膜化标志分子的mRNA水平,可诱导产生蜕膜化。[结论]建立了体内和体外诱导蜕膜化的方法,为验证小鼠蜕膜化芯片奠定了基础。     

草坪的春夏季管理方法

草坪除了对环境有美化作用外,还能起到保护和改善环境的作用。随着气温逐渐转暖,草坪草开始返青。此时需要采取严格措施,除了防止草坪遭到人畜过度践踏,尽量避免新生嫩芽受到损伤外,还需以下管理措施:     

种子生产企业应走出种子包衣后销售的误区

20世纪90年代初期,玉米种衣剂开始投入农业生产,成功地解决了地下害虫、苗期害虫及丝黑穗病危害对玉米生产的影响.90年代中期,玉米种衣剂广泛应用于生产,成为生产玉米必不可少的重要生产资料.90年代未期,我国各大种子企业纷纷应用种衣剂对玉米种子进行包衣后销售.到2004年,全国玉米种子包衣后的销量达325亿千克,占全国玉米种子用量的40%.然而玉米种子包衣后销售在管理、使用和生产过程中也出现了一些问题.     

利用褐藻酸钠生产污水提取褐藻糖胶

从海带综合利用生产褐藻酸钠、碘、甘露醇后的污水中提取褐藻糖胶的实验条件研究表明：Na2CO3溶液与污染 水用量比（体积比）为1：5.5，pH为5.5，乙醇浓度为60％，复水温度为75℃时，提取的粗褐藻糖胶中褐藻糖的质量百分比浓度最大达到22.5%，粘度测定结果证明本法制得的褐藻糖胶与干海带直接提取的褐藻糖胶的性质是相似的。     

茶树二叶扦插与短穗扦插育苗质量分析

日本是先进产茶国，主产绿茶，气候与湖北省接近。在茶树无性系良种繁殖方面，日本采用二叶插，而我国则采用短穗扦插。笔者于2007年11月25日，在大悟县进行了两种育苗方法的比较试验，二叶扦插穗长5cm留2片成叶，短穗扦插穗长3．3cm留1片成叶，试验管理相同。2009年2月1日对两种方法培育的茶苗分别取样10株进行生长势调查，现将结果分析如下：     

奶牛NUCB2基因突变及其与产奶量关联的分析

利用PCR-SSCP和DNA测序技术首次研究了中国荷斯坦牛NUCB2基因的变异。结果表明在NUCB2基因外显子9发现两个沉默突变:27451GA和27472TC,两个碱基变化没有导致氨基酸的改变,但两个位点沉默突变同时发生,表现出3个基因型,即MM、MN和NN,经过对不同基因型与奶牛产奶量性状的关联分析,发现这些突变对奶牛产奶量产生显著影响(P0.05)。     

人工锌指蛋白随机库的构建及其在锌指核酸酶筛选中的应用

利用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP).以已知三锌指蛋白为框架,使单个锌指关键位点氨基酸编码序列产生随机突变,构建3个人工锌指蛋白随机库,建立和完善应用人工锌指蛋白随机库筛选特异性锌指蛋白的技术平台.以人DYRK1A基因为例,测试和验证该技术平台的可行性和效率,分别获得对DYRK1A基因靶序列中左侧和右侧位点具有较高亲和性的50个三锌指蛋白;然后将得到的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ连接,构建DYRK1A锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN),应用酵母验证系统测试DYRK1A锌指核酸酶的活性,结果表明,90％的组装锌指核酸酶能够在靶位点进行切割.     

靶向绵羊MSTN基因的锌指核酸酶腺病毒表达载体的构建及活性验证

旨在构建并包装打靶绵羊MSTN基因的位点特异性锌指核酸酶腺病毒表达载体,以借助腺病毒的高转染效率和非整合性以及锌指核酸酶的高效性和特异性实现对绵羊MSTN基因的敲除。本研究利用PCR扩增T2A序列和锌指核酸酶异源二聚体序列,测序鉴定后依次克隆至pAdTrack-CMV,得到pAdTrack-ZFNL-T2A-ZFNR穿梭载体,将之与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转染至BJ5183菌株进行同源重组,以构建pAdEasy-ZFNL-T2A-ZFNR表达载体。然后用上述表达载体转染HEK293细胞进行重组腺病毒的包装,将PCR鉴定阳性的病毒进行扩增并测定病毒滴度。侵染绵羊胎儿成纤维细胞检测重组腺病毒对靶细胞的侵染能力,并用Western blot方法检测绵羊胎儿成纤维细胞中ZFN的表达,进而在细胞水平验证ZFN的活性。结果,包装得到的锌指核酸酶重组腺病毒能够高效侵染绵羊胎儿成纤维细胞并表达ZFN,腺病毒介导的ZFN可识别并切割绵羊MSTN基因。本研究成功获得靶向识别并切割绵羊MSTN基因的锌指核酸酶重组腺病毒。