以伪狂犬病病毒(Bartha-K61)为载体正向表达狂犬病病毒(8202株)糖蛋白重组疫苗的构建

构建以伪狂犬病病毒Bartha-K61株为载体的正向表达狂犬病病毒(8202株)糖蛋白的重组活载体疫苗.将eGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的Mlu Ⅰ/Nde Ⅰ酶切位点处,经酶切鉴定为正向连接,阳性重组子命名为p8AA-eGFP/rgp.在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得rPRV/eGFP/rgp重组病毒.对纯化后的重组病毒进行RT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光鉴定.结果表明,重组病毒的滴度(TCID_(50))为10~(8.125)/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性;通过构建表达狂犬病病毒糖蛋白正向重组Bartha-K61的活载体疫苗的研制,为狂犬病疫苗的研制与开发奠定基础.     

狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区真核表达载体的构建及其在DK细胞中的表达

为了研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(rgp)膜外区在以糖蛋白为免疫原的免疫应答中的作用,提取RV的RNA,通过RT-PCR扩增RV糖蛋白膜外区1375 bp的序列,将其克隆入pMD18-T载体中,经测序比对正确后,通过酶切将其亚克隆入pVAX1表达载体的多克隆酶切位点处,将酶切鉴定正确的阳性重组子命名为pVAX-rgp,构建表达狂犬病病毒糖蛋白膜外区的真核表达载体,在质脂体介导下转染DK细胞观察其表达情况。研究结果表明,经免疫荧光和Western blotting鉴定,有特异性荧光和60 ku条带产生,证明pVAX-rgp载体中的rgp可在DK细胞中表达。本研究通过成功构建狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区的真核表达载体,为下一步有关功能基因组的研究和基因疫苗的研制奠定了基础。     

非洲猪瘟病毒JX21毒株全基因组序列分析和生物学特性研究

为了明确非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)JX21毒株的基因组变化及其生物学特性，试验采用PCR检测、病毒分离培养、病毒全基因组测序、红细胞吸附试验及动物感染试验等对从江西省某菜市场采样分离到的ASFV自然变异毒株JX21进行研究。结果表明：与ASFV SY18毒株序列比较，JX21毒株全基因组序列中出现110处碱基差异和8个基因的自然缺失。其中EP402R基因(编码CD2v蛋白)第395位碱基后插入1个碱基“A”,导致翻译提前终止，JX21毒株丧失了红细胞吸附特性。试验组5头健康家猪感染JX21毒株后，28 d内全部死亡，期间均出现较高水平的病毒血症，剖检后均出现ASFV阳性组织，病程较长。说明分离的JX21毒株属于自然变异株，基因组中存在多处变异，其中EP402R基因变异可引起病毒失去红细胞吸附特性，其毒力未见明显减弱，仍为100%致死，但病程延长。