3株猪博卡病毒的全基因遗传进化及重组分析

[目的]了解猪博卡病毒(Porcine bocavirus,PBoV)在广西猪群中的流行状况及遗传学特征,为有效防控PBoV感染提供科学依据.[方法]采用PCR对采自广西境内养殖场的388份猪源样品进行PBoV检测,挑选3份阳性样品(1份为PBoVG1阳性样品,2份为PBoVG3阳性样品)进行全基因扩增,测序获得的序列使用LaserGene进行处理及多重比对分析,应用MEGA 5.2中的ClustalW进行遗传进化分析,通过邻接法(NJ)构建系统发育进化树,并以SimPlot 3.5.1进行潜在基因重组事件分析.[结果]猪内脏组织(肺脏、脾脏和淋巴结的混合样品)、扁桃体、脑组织和公猪精液的PBoV阳性率分别为25.19%、8.33%、2.94%和1.54%.在所有检测样品中,PBoVG3基因群的阳性率最高,为9.02%,PBoVG2和PBoVG1基因群的阳性率均为1.55%;不同基因群的PBoV存在混合感染现象,其中,PBoVG1+PBoVG3二重感染率为1.03%,PBoVG2+PBoVG3二重感染率为0.77%.从PBoV阳性样品中扩增获得3条PBoV全基因序列(毒株),命名为GXBH2014、GXBH2015和GXLC2014,对应的GenBanK登录号为MN747332、MN747333和MN747339.其中,GXBH2014株序列全长5055 bp,GXBH2015株序列全长5070 bp,GXLC2014株序列全长4313 bp.GXBH2014株和GXBH2015株与PBoVG3基因群参考毒株SH20F各编码基因的推导氨基酸序列同源性较高,为70.9%~98.5%;GXLC2014株与PBoVG1基因群参考毒株SX各编码基因的推导氨基酸序列同源性最高,为98.0%~99.1%.基于PBoV全基因编码区(CDS)全长序列构建的系统发育进化树也显示,GXBH2014株和GXBH2015株同处于PBoVG3基因群分支上,GXLC2014株处于PBoVG1基因群分支上.基因重组分析结果显示,在GXBH2014株的全基因序列中检测到1个潜在的重组断点,位于NP1基因的第391位核苷酸;而在GXBH2015株和GXLC2014株的全基因序列中均未检测到潜在的重组断点.[结论]广西猪群中普遍存在PBoV感染,且PBoVG1、PBoVG2和PBoVG3基因群毒株同时存在.其中,GXBH2014株可能是IA159-2株(KF025386)与MN154-1株(KF025384)基因重组进化的产物.     

巴马小型猪内源性反转录病毒感染对HEK293细胞周期调控相关基因mRNA表达的影响

以巴马小型猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)感染HEK293细胞模型(PERV-BMHEK293)为研究对象,分析PERV整合对HEK293细胞活性的影响,同时建立7种与人细胞增殖和周期调控密切相关基因的实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法,并对细胞感染模型中7个基因的mRNA表达情况进行分析。细胞活力分析结果显示,随着培养代次及培养时间增加,相对于母源HEK293细胞PERV感染模型的细胞活力下降;qPCR检测方法建立结果显示,所构建的cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、c-myc、p53、p16基因检测方法检测各基因在1.0×10~1~1.0×10~9 copies/μL反应范围内有很好的线性关系,扩增产物熔解曲线只出现特异性单峰,各组内变异系数在0.31%~2.01%之间,组间变异系数在0.46%~2.19%之间,重复性好,可稳定地用于相关基因mRNA的定量检测。用建立的q-PCR检测方法对PERV感染模型进行细胞周期调控相关基因mRNA表达分析,结果显示,与母源细胞相比,模型细胞cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、p53和p16基因的mRNA表达无明显变化,原癌基因c-myc基因表达下调,提示PERV感染可能抑制c-myc基因表达。该研究结果可为评价巴马小型猪来源PERV在人-猪异种移植中生物安全性提供参考。     

枣品种营养评价及加工利用综述

红枣是我国的特有果品,具有较高的利用价值。本文对目前红枣品种资源的营养评价和红枣的加工利用进行了综述,并分析了其中存在的问题,以期为红枣今后的研究提供理论依据,也为红枣产业延伸发展和产业结构调整提供参考。     

架子牛快速育肥

我国广大农村和牧区饲养肉牛多比较粗放，他们饲养的牛多是架子牛。对架子牛进行3-6个月的强度短期快速育肥，可加快肉牛出栏，提高经济效益。     

家蚕越年种感温的注意事项

蚕种感温是促进胚子发育齐一,提高越年种孵化率最安全、最有效的方法.本文总结几个现行家蚕品种越年种感温处理的经验,提出以下建议:首先应根据丁1期胚子发育程度来确定降温冷藏的时间,再根据冷藏时间来确定感温的时间;需要结合制种日期、品种特性、用种时间制定感温计划;需加强感温期间的技术管理,确保感温蚕种的安全性和保护质量.     

鸭甲型肝炎病毒1型3D基因克隆与表达

提取鸭甲型肝炎病毒1型（DHAV-1）RNA作为模板,进行RT-PCR扩增,得到714bp的3D基因,将纯化的3D基因片段与pMD18-T载体进行连接,构建DHAV-13D基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a（＋）表达载体,筛选获得原核表达载体pET-32a-3D。经ITPG诱导,SDS-PAGE分析表明,3D基因得到正确表达,融合蛋白分子量为71.4kDa。Western blotting结果表明纯化的融合蛋白与DHAV-1阳性血清具有反应性。     

武清区夏播玉米品种的主要农艺性状及产量研究

本文分析了武清区44个夏播玉米品种的主要农艺性状,比较不同玉米品种2014年的产量表现,为农民合理选择高产抗逆夏玉米品种提供科学依据。     

天津市南繁生产现状及发展建议

<正>1现状天津现有超过10家种子企业建立了南繁基地,基地总面积26.7hm~2,主要分布在三亚市和乐东县。租期10年以上的基地有2个,其余均为短期租赁。南繁作物有玉米、水稻、棉花和蔬菜等。南繁主要开展科研育种、品种鉴定、亲本繁制和小规模制种等。主要开展科研育种、品种鉴定、亲本繁制和小规模制种等。众多典型优质的农作物新品种及亲本经海南繁育后加速了育种进程,提高了育种效率,在亲本扩繁、种子纯度鉴定等方     

籽用南瓜新品种星雪1号的选育及高产栽培技术

1品种来源及选育经过星雪1号(原代号:艾单603)是以自交系H6为母本,自交系H1为父本,杂交方法选育而成的杂交籽用南瓜新品种。于2012年通过黑龙江省农作物品种审定委员会审定,审定编号为:黑登记2012037。     

叠加法拟定鸡的磺胺-6甲氧嘧啶多剂量的给药方案

本文介绍根据药物动力学原理及有关定义,运用叠加法拟定鸡静注及口服磺胺-6甲氧嘧啶的多剂量给药的有关参数。