广西巴马小型猪卵泡抑素的克隆及原核表达

从广西大学巴马小型猪卵巢中提取总RNA，并以其为模板，应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR），在合成的特异性引物引导下，扩增获得广西巴马小型猪卵泡抑素（follistatin）cDNA的全序列，长度为1035 bp。将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析，结果表明：广西巴马小型猪卵泡抑素cDNA序列与GenBank中已报道的家猪卵泡抑素同源性高达99.4%。同时，将目的基因插入到原核表达载体pET 32a+多克隆位点中，构建了follistatin的原核表达载体，并转化于大肠杆菌BL21。转化菌经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析，结果表明：试验已成功表达了follistatin的融合蛋白(约58.4 ku)。     

尼里——拉菲奶水牛的RAPD分析

以尼里—拉菲奶水牛基因池为模板,从22条10 bp的随机引物中筛选出17条具有清晰多态条带的引物,从中选取5条,对尼里—拉菲奶水牛基因组DNA进行RAPD扩增,结果得到53条带,其中12条表现多态,多态频率23.85%;根据N e i氏公式计算品种内的遗传相似指数F的平均值为0.9500,遗传距离指数D的平均值为0.0500。     

东北半干旱区大豆水肥耦合效应试验研究

采用四因素五水平二次回归正交设计方案,在盆栽控制条件下,对大豆水肥耦合作用进行了初步研究。在建立了水肥耦合数学模型基础上,分析了各因子的主因素和单因素效应,两因素间交互耦合效应。结果表明,各因素对大豆产量均有影响,其作用大小顺序是:水分>钾肥>氮肥>磷肥,且钾肥是负效应。     

长×巴F2代杂交猪黑素皮质激素受体Ⅰ基因克隆与多态性分析

【目的】探讨猪黑素皮质激素受体Ⅰ基因（MC1R）碱基突变与其毛色分离的相关性,为研究猪的毛色遗传分子机制及遗传育种奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的猪MC1R基因同源序列（AF326520）设计引物,以70头不同毛色的长白猪×巴马小型猪杂交F2代（长×巴F2代）猪血液总DNA为模板,PCR扩增MC1R基因序列,并利用PCR-SSCP对长×巴F2代杂交猪的MC1R基因进行单核苷酸多态性（SNP）分析。【结果】长×巴F2代杂交猪MC1R基因编码区序列约963 bp,与参考序列（AF326520）的同源性为99.37%,共有6处碱基发生突变,其中两处（284G→A和306T→C）为错义突变,284G→A导致95Val→Met,306T→C导致102Leu→Pro;其余4处均为同义突变,分别为6C→T、51G→A、364T→C和730G→A。 PCR-SSCP检测结果显示,长×巴F2代杂交猪的MC1R基因均未表现出多态性。【结论】长×巴F2杂交猪的MC1R基因存在碱基突变,其基因型为ED1,但在不同毛色的长×巴F2代杂交猪群体中并未发现MC1R基因呈多态性,即猪毛色多样性不能简单以MC1R基因的多态性进行分析。     

摩拉水牛基因组DNA的RAPD分析

摩拉水牛俗称印度水牛,原产于印度的雅么纳河西部,它是世界上著名的乳用水牛品种,年平均产奶量220 0～300 0 kg,乳脂率7.6%.该牛具有耐粗饲、耐热、抗病能力强、繁殖率高、遗传稳定的优点,但集群性强,性较敏感,下奶稍难,宜在水源多的地方饲养.     

主动免疫猪活化素重组融合蛋白疫苗对巴马小型猪生长性能的影响研究

以含有巴马小型猪活化素成熟肽基因的重组质粒pRSETA—ACTA和pRSETA—ACTB的重组融合蛋白疫苗,对60日龄的巴马小型猪进行免疫,以探讨活化素免疫调控动物生长性能的作用机理。结果表明：主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTA对巴马小型猪的日增重无显著影响（P〉0．05）;而主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTB后1～28d、29～56d、1～56d,试验组日增重比对照组分别提高了5．3％（P〉0．05）、17．4％（P〈0．05）和14．2％（P〈0．05）。ELISA检测结果发现,试验猪主动免疫ACTA或ACTB重组融合蛋白疫苗后均能显著产生抗活化素抗体（P〈0．05）;主动免疫ACTB重组融合蛋白疫苗极显著地提高了血清中卵泡抑制素（FS）的浓度（P〈0．01）。可见,该研究制备的ACTB重组融合蛋白疫苗可有效促进巴马小型生长猪的生长、提高血清中FS的浓度。     

沼泽型水牛促卵泡素基因β亚基的克隆与序列分析

根据GenBank公布的奶牛FSHβ亚基的编码序列设计1对特异性引物,成功克隆出广西沼泽型水牛FSHβ亚基cDNA,并将其序列提交到GenBank,获得接受号为EF710660。以DNA Star生物分析软件对其同源性进行分析,结果表明,广西沼泽型水牛与已公布的印度水牛（Bubalus bubalis）的FSHβ亚基cDNA序列的同源性最高,达99%,与绵羊（Ovis aries）为96%、牛（Bovine）为95%、山羊（Capra hircus）为95%、梅花鹿（Cervus nippon）为95%。