鹅源草酸青霉CBHⅠ基因克隆及真核表达载体构建

【目的】鹅源草酸青霉F67(Penicillium oxalicum Currie Thom)纤维素酶二糖水解酶(cellobiohydrolase,CBHⅠ)基因克隆并构建真核表达载体,为该菌株分子特性的进一步研究及构建高效纤维素分解菌奠定基础。【方法】首先通过兼并PCR法扩增CBHⅠ基因片段,然后利用改良热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术克隆CBHⅠ基因5′端和3′端侧翼序列,最后采用RT-PCR法扩增鹅源草酸青霉F67CBHⅠ基因序列全长,并对该基因进行生物信息学分析,构建pPIC9K真核表达载体。【结果】分别扩增到鹅源草酸青霉F67纤维素酶CBHⅠ基因片段A(EU574736)、5′端序列B1(EU603295)、3′端序列B2(EU652768)及全长基因C(EU727171),并成功构建真核表达载体pPIC9K-CBHⅠ;生物信息学分析表明,该基因蛋白序列与微紫青霉氨基酸序列同源性最高,达76%,前26个氨基酸为信号肽序列,疏水性可达2.63,由催化功能域、衔接区和真菌性纤维素结合域构成,其三级结构主要为β-sheet。【结论】鹅源草酸青霉纤维素酶CBHⅠ基因全长序列的克隆进一步丰富了丝状真菌的生物信息学资源;其真核表达载体的构建为将该菌株进一步在真核宿主中表达,从而获得高效工程菌株奠定了基础。     

鲁西斗鸡IGF-I基因多态性与体型指标关系的研究

采用PCR-RFLP技术,对124只鲁西斗鸡IGD-I基因的5’端调控区进行遗传多态性研究,并初步探讨其基因型与体型指标的相关性。将扩增产物进行Pst I酶切后出现AA、AB和BB 3种基因型,其基因型频率分别是0．4516、0．3710、0．1774,等位基因A、B的频率分别是0．637、0．363。对纯合子进行测序,发现在IGF-I基因5’端距启动子7．8kb处有A→G的转换。经X^2检验,鲁西斗鸡在该位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态（P〉0．05）。分析基因型与16周龄体重体尺时发现：在体重、胸宽、胸骨长指数和胫长指数方面,存在BB〉AB〉AA的趋势,但在颈长和腿长方面,存在着AA〉AB〉BB的趋势。表明“A”等位基因与颈长和腿长相关,含此基因个体适合向着斗性强的方向选育,“B”等位基因与体重、胸宽、胸骨长和胫长指数相关,含此基因个体适合向肉用方向选育。     

不同锌添加水平饲粮中添加枯草芽孢杆菌对肉鹅生长性能、屠宰性能、肉品质和养分利用率的影响

本试验旨在研究不同锌添加水平饲粮中添加枯草芽孢杆菌对肉鹅生长性能、屠宰性能、肉品质和养分利用率的影响,旨在确定添加枯草芽孢杆菌条件下的饲粮锌适宜添加水平。选择体况相近的5周龄五龙鹅360只,随机分为6组,每组6个重复,每个重复10只鹅。对照组在基础饲粮中添加80 mg/kg锌,不添加枯草芽孢杆菌;Ⅰ～Ⅴ组为试验组,在基础饲粮中分别添加0、20、40、60、80 mg/kg锌,枯草芽孢杆菌添加水平均为250 mg/kg。试验期11周。结果表明:1)Ⅲ组肉鹅的体重和平均日增重显著高于Ⅰ、Ⅴ组(P0.05),Ⅳ组肉鹅的料重比显著低于Ⅰ、Ⅴ组(P0.05)。饲粮中锌添加水平为47.5 mg/kg时平均日增重最大,饲粮中锌添加水平为15.0 mg/kg时料重比最低。2)Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组肉鹅的屠宰率显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P0.05)。3)Ⅱ、Ⅲ组肉鹅的肌肉失水率显著低于Ⅳ、Ⅴ组(P0.05)。4)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鹅的粗蛋白质利用率显著高于Ⅰ组(P0.05);Ⅳ组肉鹅的粗脂肪利用率极显著高于Ⅱ组(P0.01),显著高于Ⅴ组(P0.05);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鹅的粗纤维利用率显著高于Ⅰ、Ⅴ组(P 0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组肉鹅的锌利用率显著低于Ⅳ、Ⅴ组(P0.05)。5)Ⅱ、Ⅲ组肉鹅的排泄氮显著低于Ⅰ组(P0.05),Ⅳ、Ⅴ组肉鹅的氮利用率显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P0.05)。6)通过配对t检验分析,与对照组相比,Ⅴ组肉鹅的体重、屠宰率、胸肌率、腹脂率、肌肉红度值以及粗蛋白质、中性洗涤纤维、氮利用率均显著增加(P0.05)。由此可见,饲粮中添加枯草芽孢杆菌和锌均能够提高生长性能、屠宰性能及粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、锌利用率,减少锌和氮排放量。在饲粮中添加250 mg/kg枯草芽孢杆菌条件下,锌适宜添加水平为15.0～47.5 mg/kg。     

发酵大豆皮对5～12周龄五龙鹅生长性能、屠宰性能和营养物质利用率的影响

本试验旨在研究饲粮不同水平发酵大豆皮对5～12周龄五龙鹅生长性能、屠宰性能和营养物质利用率的影响,以确定发酵大豆皮的使用效果和适宜添加水平.选用5周龄五龙鹅216只,随机分为6个组,每组6个重复,每个重复6只鹅(公母各占1/2).各组分别饲喂在基础饲粮中添加0(Ⅰ组,对照组)、3％(Ⅱ组)、5％(Ⅲ组)、7％(Ⅳ组)、9％(Ⅴ组)、11％(Ⅵ组)发酵大豆皮的试验饲粮.试验期8周.结果表明:1)与对照组相比,Ⅳ组、Ⅴ组显著提高了平均日增重(P＜0.05),显著降低了料重比(P＜0.05);Ⅳ组显著提高了屠宰率和胸肌率(P＜0.05);Ⅴ组显著提高了胸肌率和腿肌率(P＜0.05).2)与对照组相比,Ⅳ组、Ⅴ组均极显著提高了粗蛋白质、粗脂肪、钙、磷、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维利用率(P＜0.01).各组之间能量利用率差异不显著(P＞0.05).发酵大豆皮粗蛋白质、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和磷利用率显著或极显著高于未发酵大豆皮(P＜0.05或P＜0.01).3)与对照组相比,Ⅴ组显著提高了总氨基酸利用率(P＞0.05);Ⅳ组、Ⅴ组显著或极显著提高了大多数氨基酸的利用率(P＜0.05或P＜0.01).4)Ⅲ组和Ⅳ组小肽利用率较高,均显著高于Ⅵ组(P＜0.05).由此可见,发酵大豆皮能提高五龙鹅生长性能、屠宰性能和营养物质利用率.5～12周龄五龙鹅饲粮中发酵大豆皮适宜添加水平为7％ ～9％.     

低铜饲粮添加枯草芽孢杆菌对5～16周龄五龙鹅肠道发育、微生物菌群结构及血清酶活性的影响

本试验旨在研究低铜饲粮添加枯草芽孢杆菌对5~16周龄五龙鹅肠道发育、微生物菌群结构及血清酶活性的影响。试验选用29日龄五龙鹅360只,随机分为6组,每组6个重复,每个重复10只(公母各占1/2)。Ⅰ组为最适铜添加组(铜添加水平为16 mg/kg,未添加枯草芽孢杆菌);Ⅱ~Ⅵ组为枯草芽孢杆菌添加组,铜添加水平分别为0、4、8、12、16 mg/kg,枯草芽孢杆菌添加水平均为250mg/kg。试验期12周。结果表明:1)Ⅱ~Ⅵ组的空肠绒毛高度和绒腺比极显著高于Ⅰ组(P0.01),空肠隐窝深度显著或极显著低于Ⅰ组(P0.05或P0.01);Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组的空肠肠壁厚度显著高于Ⅰ组(P0.05)。Ⅱ~Ⅵ组之间的空肠绒毛高度、肠壁厚度和绒腺比无显著差异(P0.05);Ⅱ组的空肠隐窝深度显著低于Ⅴ和Ⅵ组(P0.05)。2)Ⅱ~Ⅵ组的盲肠大肠杆菌数量极显著低于Ⅰ组(P0.01),盲肠双歧杆菌和乳酸杆菌数量显著或极显著高于Ⅰ组(P0.05或P0.01)。Ⅱ~Ⅵ组之间的盲肠大肠杆菌、双歧杆菌和乳酸杆菌数量差异不显著(P0.05)。3)Ⅳ组的血清谷丙转氨酶(ALT)活性显著低于Ⅰ组(P0.05),Ⅴ组血清谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于Ⅰ组(P0.05);Ⅱ组血清ALT、AST、LDH活性与Ⅰ组差异不显著(P0.05)。Ⅳ组血清碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于Ⅰ组(P0.05);Ⅱ组血清AKP活性显著低于Ⅰ组(P0.05)。由此可见,低铜饲粮添加枯草芽孢杆菌能够促进五龙鹅肠道发育,优化微生物菌群结构;铜对鹅肠道发育及微生物菌群结构影响较小。适宜的枯草芽孢杆菌和铜添加水平能够维护机体健康,相互间具有协同作用。     

锰对1~4周龄五龙鹅血清脂类代谢、抗氧化指标及器官组织中锰沉积量的影响

本试验旨在研究饲粮中不同锰水平对1~4周龄五龙鹅血清脂类代谢、抗氧化指标及器官组织中锰沉积量的影响,以确定鹅饲粮中锰适宜添加水平。试验选用1日龄体重相近的五龙鹅360只,随机分为6个组,每组6个重复,每个重复10只鹅(公母各占1/2)。对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮(锰含量为20 mg/kg),试验组分别饲喂在基础饲粮中添加30(Ⅱ组)、60(Ⅲ组)、90(Ⅳ组)、120(Ⅴ组)和150 mg/kg锰的试验饲粮(Ⅵ组)。试验期4周。结果表明:1)Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组血清甘油三酯和总胆固醇含量极显著高于Ⅰ组(P0.01),Ⅲ组显著高于Ⅰ组(P0.05)。各组血清碱性磷酸酶活性差异不显著(P0.05)。2)Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组血清总抗氧化能力和谷胱甘肽过氧化物酶活性极显著高于Ⅰ组(P0.01),Ⅲ组显著高于Ⅰ组(P0.05);Ⅴ组血清丙二醛含量极显著低于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P0.01),Ⅳ、Ⅵ组显著低于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P0.05)。3)Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组血清、心脏、肝脏和胰脏中锰沉积量极显著高于Ⅰ组(P0.01),Ⅱ、Ⅲ组血清、心脏和肝脏中锰沉积量显著高于Ⅰ组(P0.05)。由此可见,饲粮中添加锰能提高五龙鹅血清甘油三酯、总胆固醇含量,增强机体抗氧化能力,增加器官组织中锰沉积量。建议鹅饲粮中锰适宜添加水平为90~120 mg/kg。     

深松铲不同翼铲安装高度时土壤扰动行为仿真与试验

翼铲的安装高度是带翼深松铲的关键结构参数之一,其对深松土壤扰动行为产生重要影响。综合运用EDEM和室内土槽试验,研究了翼铲安装高度(55、75、95、115、135 mm)对深松土壤扰动行为的影响。结果表明:随着翼铲安装高度增加,耕后犁底层土壤扰动面积先增大后减小,在翼铲安装高度为75 mm时最大,水平耕作阻力逐渐减小,深松铲铲尖和犁底层圆弧段所受水平耕作阻力为深松铲水平耕作阻力的主要来源(90%以上),其随翼铲安装高度增大逐渐减小;翼铲安装高度直接影响耕作时不同深度土壤在不同方向的位移,当翼铲安装高度为75 mm时,深松铲纵向中心位置的各层土壤在耕作方向的最大位移相对较小,其犁底层土壤在竖直方向最大位移相对较大,表层和耕作层土壤在竖直方向最大位移相对较小;翼铲安装高度对土壤扰动效果产生重要影响,且离散元仿真能够准确模拟深松土壤的扰动过程,5个翼铲安装高度下土壤膨松度、土壤扰动系数、土壤碎土系数、土壤纵向堆积角的试验值和仿真值的平均误差分别为11.69%、11.54%、14.20%、9.64%。     

凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌对肉鸭生长性能、屠宰性能、血清生化指标及肠道健康的影响

本试验旨在研究凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌对肉鸭生长性能、屠宰性能、血清生化指标及肠道健康的影响。选择健康的7日龄樱桃谷鸭180只，根据体重均匀分为6组，每组5个重复，每个重复6只。对照组饲喂基础饲粮，BC组饲喂添加凝结芽孢杆菌的试验饲粮，CB组饲喂添加丁酸梭菌的试验饲粮，BC+CB(1∶1)组饲喂添加凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌复合菌制剂(以1∶1比例混合)的试验饲粮，BC+CB(1∶2)组饲喂添加凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌复合菌制剂(以1∶2比例混合)的试验饲粮，BC+CB组(2∶1)组饲喂添加凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌复合菌制剂(以2∶1比例混合)的试验饲粮，试验饲粮中益生菌制剂总添加量均为0.3%。预试期5 d，正试期42 d。结果表明：1)与对照组相比，BC+CB(1∶2)组的12～35日龄、12～49日龄的平均日增重显著提高(P<0.05),BC+CB(1∶2)组和BC+CB(2∶1)组的12～35日龄、12～49日龄的料重比显著降低(P<0.05)。2)各组之间屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率差异不显著(P>0.05)。3)BC+CB(1∶2)组和BC+C...     

肃州区畜禽粪污第三方处理利用模式研究

本文通过调查研究，从技术模式、工艺流程、技术要点和适用范围等方面详细总结提炼了肃州区畜禽粪污资源化利用技术(第三方处理模式),以供参考。     

胆碱对产蛋期种鹅繁殖性能、血液生殖激素及蛋品质的影响

试验旨在研究饲粮中添加不同水平胆碱对产蛋期种鹅繁殖性能、血液中生殖激素和蛋品质的影响。选择34周龄体况相似的种鹅(五龙鹅)180只，随机分为6组，每组6个重复，每重复5只(4母1公)，各组饲粮中胆碱添加水平分别为0、200、400、600、800、1 000 mg/kg。预试期1周，正试期10周。结果表明：400～800 mg/kg组种蛋合格率高于0 mg/kg组(P<0.01),600 mg/kg组产蛋率高于0、200 mg/kg组(P<0.05),600mg/kg组孵化率高于0、1000mg/kg组(P<0.05);600、800mg/kg组孕酮、睾酮及雌二醇含量高于0mg/kg组(P<0.01);400～800mg/kg组蛋白高度高于0mg/kg组(P<0.01),600mg/kg组蛋壳强度高于0 mg/kg组(P<0.01)，孕酮与蛋合格率显著相关，睾酮与种蛋合格率及产蛋率极显著相关，雌二醇与产蛋率、蛋合格率及孵化率极显著相关。可见，600 mg/kg胆碱可显著提高种鹅产蛋率、种蛋合格率、种蛋孵化率，显著提高种蛋蛋壳强度、蛋白高度，显著增加血...