猪hsp70和hsp90荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA序列,设计并合成3对引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,系列稀释作为阳性标准品,用于标准曲线的绘制和样品检测,并用持家蛋白GAPDH基因对样品进行归一化,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并对其扩增效率、敏感性、特异性进行了检测.结果证明,建立的一步法荧光定量RT-PCR技术可以真实地反映反应管中模板的数量,可用于猪hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA水平的检测.     

聚肌胞对小鼠的一般毒性和致突变作用

为探讨聚肌胞对实验动物的毒理学效应,本试验通过急性毒性、蓄积毒性、亚慢性毒性和致突变作用等试验研究聚肌胞对昆明系小鼠的一般毒性和特殊毒性。结果表明,聚肌胞注射液对小鼠的LD50为83.5mg·kg-1,95%可信限为66.28~105.32mg·kg-1;聚肌胞注射液对小鼠的蓄积系数(K)大于5,为弱蓄积性,且小鼠对聚肌胞注射液小剂量长期染毒出现耐受现象;亚慢性毒性试验表明,高剂量组死亡小鼠呈现腹泻、肠道臌胀、肠道有水样内容物等消化系统毒性特征的毒性反应,中剂量组呈现微弱毒性反应,而低剂量组无明显毒性;骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性,表明聚肌胞注射液的致突变作用较弱。     

聚肌胞诱导新城疫病毒感染肉鸡α-干扰素及免疫活性研究

对人工感染新城疫病毒的肉鸡注射聚肌胞,测定其诱导肉鸡α-干扰素、特异性和非特异性免疫功能,以研究聚肌胞对感染病毒畜禽诱导IFN-α的确实效果以及免疫活性状态.结果显示,注射0.02 mg/kg( bw),0.01 mg/kg( bw)和0.005 mg/kg(bw)的聚肌胞后,肉鸡死亡率分别为40%、20%和26.7%,均极显著低于攻毒对照组的63.3%(P<0.01);聚肌胞剂量增加,诱导IFN-α的能力升高,但超过一定范围后反而出现抑制;3个剂量的聚肌胞对肉鸡外周血CD3 细胞均显示出较明显的提升效果,而各用药组肉鸡体内的新城疫抗体水平与攻毒对照组相比差异并不显著.说明聚肌胞的抗病毒作用可能一方面通过诱导IFN-α以降低NDV对淋巴细胞的损害;另一方面参与提高机体的细胞免疫发挥作用,在体液免疫方面并没有显示明显增强作用.     

多西环素在鸡粪中吸附-解吸附行为及影响因素研究

通过批处理平衡试验,研究了养殖业中广泛使用的典型兽药抗生素多西环素在鸡排泄物中的吸附和解吸附行为及机制,以及pH、离子类型与强度等因素对解吸附的影响。结果表明:多西环素在鸡粪中吸附过程呈现L型吸附,等温线为非线性,吸附和解吸附过程可以用Freundlich方程进行拟合;多西环素在鸡粪中解吸附能力与溶液pH和离子强度相关,在pH6时,pH越小,鸡粪中多西环素解吸附能力越强,且pH 2和pH 4间解吸附量差异显著(P0.05),pH≥6时,解吸附能力没有明显变化;在0.01 mol·L~(-1)离子强度下,二价Ca~(2+)离子对鸡粪中多西环素解吸附能力比一价Na~+和K~+有增强趋势,但差异不显著,而在0.1 mol·L~(-1)离子强度下,NO_3~-和Ca~(2+)离子对鸡粪中多西环素解吸附能力与其他离子比较差异极显著(P0.01)。研究表明:酸雨和化学肥料的施用能促进动物粪便中多西环素的解吸附,对水体和土壤环境存在迁移风险,但在对粪肥处理时,一定的酸性和离子环境有助于残留抗生素的析出与降解。     

3株樱桃谷肉鸭源和2株番鸭源新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

[目的]本文旨在对临床表现为肝、脾坏死的病死鸭进行鸭呼肠孤病毒(NDRV)分离与鉴定。[方法]通过接种10日龄鸭胚进行病毒的初步分离培养,结合PCR检测及σC基因序列分析进行分子生物学鉴定。将NDRV分离毒株接种鸡肝癌细胞(LMH)、鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肝细胞(CEL),经绒毛尿囊膜接种11日龄樱桃谷肉鸭胚,经腿部肌肉接种4日龄雏樱桃谷肉鸭进行生物学特性鉴定。通过测定NDRV分离毒株对氯仿和胰蛋白酶的敏感性进行理化特性鉴定。[结果]分离到5株新型鸭呼肠孤病毒(NDRV),分别为RPVA1311、RPVA1312、RPVA1313、RPVA1314和RPVA1315。NDRV分离毒株σC基因序列与新型鸭呼肠孤病毒的核苷酸同源性为94%～98%,与禽呼肠孤病毒(ARV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)相似性较低,分别为38%～41%和40%～50%; NDRV分离毒株能在LMH、CEF和CEL中增殖并产生细胞融合,形成合胞体的细胞病变,2株番鸭源分离病毒的LMH细胞毒滴度(lg[TCID_(50)]:6.32、6.63)明显高于3株樱桃谷肉鸭源病毒的滴度(lg[TCID_(50)]:5.83、5.68、5.63); NDRV分离毒株能100%致死11日龄樱桃谷肉鸭胚,且2株番鸭源分离病毒的鸭胚组织毒滴度(lg[ELD_(50)]:5.50、5.63)稍高于3株樱桃谷肉鸭源病毒的滴度(lg[ELD_(50)]:5.32、5.17、5.00),主要病变表现为全身性出血; 4日龄雏樱桃谷肉鸭接种NDRV分离毒株后,出现与自然发病鸭相似的病症,发病率为100%,同时能从病死鸭的肝、脾中再次分离到原病毒;病死鸭主要病变为脾脏肿大、坏死,组织病理学观察可见脾脏淋巴细胞数量减少、组织细胞坏死,肝细胞变性、炎性细胞在汇管区周围浸润;理化性质测定结果显示,NDRV分离毒株对氯仿不敏感,对胰蛋白酶具有不同程度的敏感性。[结论]分离的5株病毒是属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属的一种新型鸭呼肠孤病毒。     

饲料中硝基呋喃类药物高效液相色谱检测方法的建立

为检测饲料中硝基呋喃类药物,建立呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮和呋喃他酮4种硝基呋喃类药物检测的高效液相色谱法。采用乙腈提取饲料中4种呋喃类药物,将提取液浓缩后用上样液溶解残渣,经过HLB固相萃取柱净化后,以乙腈-乙酸铵溶液为流动相,反相色谱柱分离,在Waters Sunfire C18色谱柱上,紫外检测器365 nm波长下分离检测,外标法定量。结果表明:4种硝基呋喃类药物的标准曲线回归系数均在0.999 7以上,线性范围在0.2~30.0μg/mL;不同添加浓度的加标回收率≥70%~98%,回收率标准偏差≤10%;呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮和呋喃它酮的检测限依次为0.020、0.020、0.020和0.100μg/mL;定量限依次为0.50、0.50、0.50和1.00mg/kg。本试验建立的高效液相色谱法具有操作相对简单,线性范围良好,且重复性好的特点,且适于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中硝基呋喃类药物的检测。     

热应激对鸡脾脏和法氏囊细胞凋亡的影响及其调节

 18只 AA肉鸡于22℃饲养。30日龄时，随机分成3组，分别进行0 、5和10h的41℃高温应激处理。用流式细胞仪检测应激后不同时间脾脏和法氏囊细胞 DNA含量、细胞凋亡率以及Caspase-3和Bcl-2的表达。结果表明，应激处理0、5和10 h时，脾脏DNA合成期（S期）细胞比例分别是4.67%、5.11%、4.78%，法氏囊S期细胞分别是30.52%、24.71%、24.04%；脾脏和法氏囊细胞凋亡率分别是0.22%、0.42%、0.32%和0.32%、0.62%、0.41%；脾脏和法氏囊 caspase-3表达阳性细胞率分别为5.49%、10.36%、9.80%和8.60%、10.51%、9.41%； Bcl-2表达阳性细胞率脾脏分别是31.32%、24.01%和29.26%，法氏囊则是30.24%、27.10%、31.54%；脾脏细胞凋亡率，应激后5 h 与 0 和10 h有显著差异（P＜0.05）；在高温应激过程中，脾脏和法氏囊的细胞凋亡率与Caspase-3表达阳性细胞率呈方向一致的变化关系，均是从0 h到5 h逐渐升高，以后又逐渐下降；而与Bcl-2表达阳性细胞率呈反向变化关系。据此说明高温应激能明显影响脾脏和法氏囊细胞凋亡，而这种细胞凋亡的变化受Caspase-3和Bcl-2表达的调节。     

运输应激猪肝脏中热应激蛋白的定位与表达

利用免疫组织化学定位方法和Western blot技术，对长途运输试验猪肝脏中5种不同分子量的热应激蛋白HSP70、HSP72、HSP86、HSP90和HSP27进行定位和表达。所有长途运输后应激猪和对照猪肝脏组织中均同时检测到了上述5种HSP。肝细胞胞浆和胞核均显示阳性信号，但HSPs在肝细胞中的定位有差异，大多数HSP70、HSP72和HSP27主要分布于肝细胞胞浆内，而HSP90和HSP86阳性颗粒在核内的分布比其在胞浆中的分布更为明显。肝小叶周边区有明显颗粒变性和脂肪变性的肝细胞中HSPs的阳性染色信号较弱。6h的长途运输应激后，与对照组相比，HSPs在肝脏组织中的表达量存在差异，表现为HSP70家族的HSP70和HSP72的表达没有明显的升高（P＞0．05），HSP90家族的HSP90的表达出现极显著的增加（P＜0．01），然而，HSP90家族的HSP86和小分子量家族的HSP27的表达量呈现明显的下降（P＜0．05）。     

小麦联合收获机的使用

用户新购置的、大修后的或长时间存放后的联合收获机,为保证良好的技术状态和正常的使用,必须按照《使用说明书》的要求进行各项检查、调整和试运转后才能开始使用。使用时要按如下规程操作：     

警监合作初探

近年来,黑龙江省海林市农机安全监理站在前进中与时俱进,创新监管方式,加大农机安全生产监管力度,实行警监联合,取得了显著成效。