樱桃谷鸭源鹅出血性多瘤病毒VP3基因的克隆与序列分析

为明确福建地区是否存在鹅出血性多瘤病毒（goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV）感染,本研究对2016年福建省临床送检测19份鸭组织样品进行GHPV检测,结果从1例樱桃谷鸭中检测到GHPV感染阳性（记为GHPV-FJ201601株）。随后根据GenBank中GHPV参考株序列特征,设计针对GHPV的VP3基因特异性引物,利用PCR技术扩增获得GHPV的VP3基因片段。结果显示,GHPV-FJ201601株的VP3基因全长为654 bp,编码217个氨基酸。对编码的VP3蛋白分析发现其理论等电点为9.37,带负电荷氨基酸为23个（Asp+Glu）,带正电荷氨基酸为28个（Arg+Lys）;不稳定指数为38.43,是一个稳定蛋白;脂肪系数64.33,总平均疏水性指数为－0.744;该蛋白无典型的信号肽切割位点;其亚细胞定位类型为核定位;对其进行磷酸化分析发现,该蛋白存在14个氨基酸磷酸化位点。核苷酸同源性分析显示,不同来源GHPV代表株VP3基因相互之间核苷酸同源性均较高,均不低于99.7%。VP3基因遗传进化结果显示,GHPV-FJ201601株和鹅源GHPV分离株（匈牙利14234株与法国Toulouse Goose 2000株）处于同一遗传进化分支,与鸭源分离株（法国Toulouse Muscovy Duck 2008株、法国Toulouse Mule Duck 2008和中国106株）却处于不同的遗传进化分支,但所有GHPV分离株VP3基因遗传进化均较近。本研究首次证实福建地区樱桃谷鸭群中存在GHPV感染,为丰富不同地区与宿主的GHPV分子流行病学数据提供参考。     

新型鸭肝炎病毒VP1基因的序列分析及其原核表达

参照已公布的新型鸭肝炎病毒(new type Duck hepatitis virus,N-DHV)基因序列设计特异性引物,运用RT-PCR方法成功扩增出N-DHV FJ01株VP1基因,经克隆测序后得到全长为720 nt的FJ01株VP1基因序列。将所得测序结果用DNAstar软件包MegAligntkg程序进行序列比对分析表明,N-DHV FJ01株与GenBank登录的韩国病毒株的同源率为94.2%~98.9%,与台湾病毒株04G和90D的同源率仅分别为72.3%和72.5%,与DHV-1病毒株DHV-HS和DRL-62的同源率仅分别为70.8%和70.7%;通过系统进化树可以发现韩国型与台湾型鸭肝炎病毒可分为2小群。本研究同时将N-DHVVP1基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1,诱导表达后经SDS-PAGE和Western blot分析表明VP1基因已成功地在大肠杆菌中得以表达。     

基于“3＋3”模式的“营养与配餐设计”课程建设研究

长沙环境保护职业技术学院的＂营养与配餐设计＂课程,按照＂专业＋车间＋检验室＂的人才培养模式,实现了课程教学过程及教学内容上的三个相统一。教学过程的三个统一是：理论与实践知识相统一,教材与职业资格鉴定标准（营养配餐员和公共营养师）相统一,真实实践场所与对应岗位相统一。教学内容的三个统一是：课程内容与职业标准相统一,课程目标与职业工程相统一,考核成绩与职业鉴定相统一。在实施的两年时间内,学生职业资格鉴定通过率100%,教师职业教学能力得到较大提升。     

肉鸡H9N2亚型禽流感病毒全基因测序及遗传进化分析

根据GenBank登陆的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）的全基因序列,设计11对引物,运用RT-PCR方法扩增A／Chicken／Zhejiang／HJ／2007(H9N2)毒株8个基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。基因序列比较及遗传进化分析结果表明,所克隆的8个基因片段均有HJ毒株完整的开放阅读框（ORF）,其血凝素（HA）基因蛋白裂解位点的氨基酸组成为-PSKSSR*G-,为不连续的碱性氨基酸,符合低致病性AIV HA基因裂解位点的序列特征;与QA/HK/G1/97的进化关系较近,处在同一分支。其神经氨酸酶（NA）基因在63、64、65位点上有3个氨基酸（T、E、I）缺失,在遗传进化上属于常见的CK/BJ/1/94（DK/HK/Y280/97）群系。核蛋白（NP）基因整合有同地分离的H5N1亚型流感病毒NP基因片段,进化关系较近。基质蛋白（M）基因与1999年香港感染儿童的两株流感病毒（HK/1073/99和HK/1074/99）进化关系属于同一分支。非结构蛋白（NS）基因与近年来分离的猪源H9N2亚型流感病毒进化关系相近,和1998年首次报道的猪源H9N2亚型流感病毒（SW/HK/9/98）处在同一进化分支。聚合酶蛋白（PA、PB2、PB1）中,PB1从33-47位存在15个连续碱基缺失,是首次报道该基因ORF内存在缺失,从遗传进化上和近年来分离的H5N1亚型流感病毒处在同一分支上;PA基因从遗传进化上和PB1基因类似;PB2基因与常见的流感病毒毒株的遗传进化关系较远,在相应的进化树另成分支。因此,A／Chicken／Zhejiang／HJ／2007(H9N2)是由不同流感病毒基因亚系间发生自然重排的产物。     

反光膜对北疆滴灌葡萄生长、光合作用及品质的影响

通过裸地、PE膜、反光膜3种覆膜滴灌栽培弗雷无核葡萄大田大区试验表明,反光膜增加葡萄园土壤深层(40~60 cm)和行间含水量,提高葡萄叶片净光合速率,增加葡萄对氮、磷、钾的吸收,促进葡萄生长,增加葡萄枝条长度、叶片数、节间数、日生长量、枝条鲜重、干重,增加葡萄产量,提高果实Vc含量、可溶性糖含量、可溶性固形物含量及果皮硬度,葡萄提早10 d采收。结果表明,不同处理对葡萄生长和品质的影响表现为反光膜>PE膜>裸地。     

面向微服务的高职院校图书馆员角色定位及能力建设思考

微服务是近年来比较火的新型服务类型,主要是通过微信、微博等新型媒体的运营向大众提供服务,从而提高运营方的服务质量。高职院校图书馆管理既不同于一般性的图书馆管理,同时也与其他类型的图书馆管理有所区分。本文浅谈了现今高职院校的图书管理员的角色定位和如何提高图书管理员的能力。     

鹦鹉幼雏病病毒福建株VP1基因的克隆及序列分析

为明确虎皮鹦鹉源鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease polyomavirus,BFPyV)福建株(命名为FJ-2016株)结构蛋白VP1基因特征,本研究针对BFPyVVP1基因特点设计特异性引物,利用PCR方法扩增获得FJ-2016株VP1基因全长序列,目的片段经胶回收后进行克隆测序。结果显示,BFPyV FJ-2016株VP1基因全长为1 032bp,编码343个氨基酸。所编码VP1蛋白的理论等电点为5.77,不稳定指数为40.91,是不稳定蛋白;脂肪系数为74.72;总平均疏水性指数为-0.366。将获得的VP1基因序列提交至GenBank,登录号为:MG148345。核苷酸同源性分析表明,不同时间、地区和品种BFPyV的VP1基因十分保守,相互之间的核苷酸同源性均在99.1%以上。遗传进化分析发现,不同时间和地域BFPyV相互之间亲缘关系较近,但可细分为两个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2)。从宿主品种来看,虎皮鹦鹉源BFPyV各分离株的遗传进化与分离时间及地域无明显关系,虎皮鹦鹉源BFPyV分离株在Clade 1和Clade 2分支均有分布。本研究首次证实福建地区虎皮鹦鹉中存在BFPyV感染,相关研究结果为丰富不同地区BFPyV分子流行病学数据提供参考。     

鸡黄病毒的分离与初步鉴定

2010年12月,福清市某蛋鸡场210日龄的蛋鸡群发生急性的严重产蛋下降,但未见鸡只死亡,使用抗菌药物和抗病毒药物治疗无明显效果。     

鸭坦布苏病毒试验感染麻鸭的组织病理学研究

以经肌肉注射途径人工感染鸭坦布苏病毒的110日龄麻鸭为试验材料,研究感染麻鸭的眼观及组织病理学变化。研究发现,感染麻鸭的眼观病变为卵泡充血、出血、变性。组织学病变为卵泡充血、出血,卵泡颗粒细胞坏死,卵巢内异嗜性白细胞浸润,卵黄液溶解;肝脏间质结缔组织及胆管增生;肝脏、胰腺、肾脏、腺胃中淋巴细胞浸润;肠道呈卡他性肠炎。以上结果表明,鸭坦布苏病毒感染麻鸭以卵巢病变为特征,表现为卵泡充血、出血、变性,卵巢内异嗜性白细胞浸润等症状。     

鹅源鸭1型甲肝病毒的分离与鉴定

2012年广东省某鹅场发生一种以肝脏出血为主要病变特征的传染病。从病死鹅肝脏中分离到1株病毒(命名为GD-01),该病毒能在96h内致死10日龄番鸭胚。人工感染8日龄雏番鸭后,濒死前出现角弓反张,病变为肝脏出血。应用鸭1型甲肝病毒特异性引物对GD-01进行RT-PCR检测,可扩增到约199bp目的条带。经RT-PCR鉴定和遗传进化分析证实该病毒分离株为鹅源鸭1型甲肝病毒。