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猪人工授精可有效提高公猪利用率,减少公猪饲养成本,降低生物安全风险。通过分析猪人工授精技术的影响因素及关键操作,以提高人工授精的成功率。本文从人工授精技术的重要性、保障条件及成功应用该技术的影响因素等方面进行了阐述,成功进行人工授精的关键包括确保精液制备的质量、准确的母猪发情鉴定、干净卫生的输精条件、合适的输精管及输精技术熟练程度等。 相似文献
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【目的】将前期构建的含有黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA的质粒p PSPBGP-manA转染杜洛克猪胎儿成纤维细胞,利用G418筛选出转基因细胞系,通过体细胞核移植方法生产出转manA基因猪,利用分子生物学方法对转基因猪进行阳性鉴定、基因及蛋白表达水平的检测,同时测定转基因猪唾液β-甘露聚糖酶酶活、粪便营养物质含量,旨在为生产及进一步研究转manA基因猪提供一些科学依据。【方法】用限制性内切酶Not I将质粒p PSPBGP-manA线性化并通过脂质体法将其转入杜洛克猪胎儿成纤维细胞,然后用不同浓度的G418进行筛选、维持培养,将筛选后的细胞进行体细胞核移植生产克隆猪;克隆猪出生后采取尾组织样用酚-氯仿法提取基因组DNA进行PCR及Southern blotting鉴定阳性转基因猪;收集转基因猪唾液并利用DNS法进行β-甘露聚糖酶活性测定,同时收集转基因猪粪便测定粪便中营养物质含量;取转基因猪的腮腺、颌下腺、舌下腺、心脏、肝脏等组织并用Triol法提取RNA,然后进行RT-PCR鉴定manA基因的表达,再进行相对定量PCR检测manA基因在不同个体及组织间的表达差异;通过Western blotting技术分析转基因猪外源性manA基因的蛋白表达水平。【结果】经G418筛选后进行PCR鉴定得到阳性转基因细胞系;通过体细胞核移植方法生产出21头克隆猪,经PCR及Southern blotting鉴定出16头转基因猪,阳性率为76%;转基因猪唾液中β-甘露聚糖酶的活性为(0.092±0.003)U·m L-1,粪便中粗蛋白含量明显降低;经RT-PCR、相对定量PCR鉴定,manA基因在转基因猪腮腺和舌下腺组织中特异表达,其它组织不表达,腮腺组织表达量高于舌下腺组织;Western blotting检测发现在腮腺和舌下腺组织中有manA的表达。【结论】通过G418筛选得到转manA基因细胞系并成功得到转manA基因猪,外源manA基因能够在转基因猪中腮腺和舌下腺组织特异性表达,为转manA基因猪的生产及进一步研究奠定了基础。 相似文献
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胚胎附植是一个复杂的生物过程,在哺乳动物的妊娠环节中至关重要,其发生受到很多转录调控因子的影响。长链非编码RNA(Long Non-coding RNA,lncRNA)是一类长度大于200核苷酸(nt)的转录本,基本不编码蛋白质,但其参与胚胎发育、肌肉发育、性别决定与分化等多种生物学过程和疾病的调控。本文简述lncRNA的研究现状,主要介绍了lncRNA通过影响子宫内膜容受性、调节蜕膜、调节子宫内膜增殖、调节激素水平等途径促进胚胎附植,以期为哺乳动物胚胎附植期中lncRNA的功能研究提供参考。 相似文献