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蓝色花的形成主要由于是花瓣中3',5'-羟羟基花青素(飞燕草色素及其衍生物)的相对含量较高,类黄酮-3',5'-羟基化酶(F3'5H)是合成这类色素的关键酶.不同物种F3'5'H同源基因的分离与特征解析能够为蓝色花的分子育种工作提供更多的理论依据.瓜叶菊花色多变,舌状花有白色、红色和蓝紫色等.根据已知F3'5'H保守的氨基酸序列设计了3条简并引物,通过RT-PCR从蓝色的瓜叶菊舌状花中扩增出了保守序列;利用RACE方法得到了两端序列.设计全长引物RT-PCR分离出了瓜叶菊F3'5'H同源基因(PCFH).cDNA全长1 660bp,编码505个氨基酸.序列分析表明PCFH编码的氨基酸序列中包含有已确定的保守基序,包括血红素结合区、Ⅰ螺旋区和膜插入点的信号序列等.与其它物种的F3'5'H基因的序列相似性也较高.与翠菊、拟南芥和矮牵牛的序列相似系数分别为76%、59%和50%.序列相似性表明PCFH基因与茄子、矮牵牛和草原龙胆等同属于CYP75亚家族.利用pET28a载体PCFH在大肠杆菌BL21中实现了表达,IPTG诱导的差异蛋白大约为57kD,PCFH编码的多肽分子量相近,这将为进一步研究PCFH的酶学特性奠定了基础. 相似文献
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瓜叶菊F3''5''H基因cDNA的克隆、序列分析及其原核表达 总被引:2,自引:0,他引:2
蓝色花的形成主要由于是花瓣中3',5'-羟羟基花青素(飞燕草色素及其衍生物)的相对含量较高,类黄酮-3',5'-羟基化酶(F3'5H)是合成这类色素的关键酶.不同物种F3'5'H同源基因的分离与特征解析能够为蓝色花的分子育种工作提供更多的理论依据.瓜叶菊花色多变,舌状花有白色、红色和蓝紫色等.根据已知F3'5'H保守的氨基酸序列设计了3条简并引物,通过RT-PCR从蓝色的瓜叶菊舌状花中扩增出了保守序列;利用RACE方法得到了两端序列.设计全长引物RT-PCR分离出了瓜叶菊F3'5'H同源基因(PCFH).cDNA全长1 660bp,编码505个氨基酸.序列分析表明PCFH编码的氨基酸序列中包含有已确定的保守基序,包括血红素结合区、Ⅰ螺旋区和膜插入点的信号序列等.与其它物种的F3'5'H基因的序列相似性也较高.与翠菊、拟南芥和矮牵牛的序列相似系数分别为76%、59%和50%.序列相似性表明PCFH基因与茄子、矮牵牛和草原龙胆等同属于CYP75亚家族.利用pET28a载体PCFH在大肠杆菌BL21中实现了表达,IPTG诱导的差异蛋白大约为57kD,PCFH编码的多肽分子量相近,这将为进一步研究PCFH的酶学特性奠定了基础. 相似文献
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抑制性差减杂交(SSH)技术在分离植物差异表达基因中的应用 总被引:6,自引:0,他引:6
抑制性差减杂交技术(SSH)是基于抑制PCR作用的cDNA差减杂交,是在转录水平上研究差异基因表达的技术。该技术在一个循环过程中完成差异表达基因丰度的均等化及目标群体和对照群体中相同基因的去除,从而实现差异表达基因的高度富集。一个典型的SSH过程,可在一个差减杂交过程中将稀有基因序列富集上千倍。本文通过详细分析该技术在植物差异表达基因分离中的应用发现:SSH技术主要用于分离组织特异性表达和诱导型表达的基因。首先,SSH技术广泛应用在分离植物发育过程中不同发育阶段和不同组织器官中的组织特异性表达的基因,为揭示植物生长发育过程的分子机理提供了有效手段;另外,在不同植物中,该技术被大量应用于分离各种生物及非生物胁迫条件下诱导表达的抗性相关基因,可以揭示植物抗逆的分子机理。目前,SSH技术己开始应用于分离与次生代谢产物合成相关的基因。SSH技术是分离植物差异表达基因,揭示植物复杂生命现象分子机理的有效方法,将在植物差异表达基因研究中得到更广泛的应用。 相似文献
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野牦牛mtDNA Cytb基因全序列测定及系统进化关系 总被引:4,自引:0,他引:4
为从分子水平探究牦牛的分类地位和遗传多样性,试验测定了野牦牛细胞色素b基因全序列,并以绵羊为外群,构建野牦牛、家牦牛、大额牛、普通牛、瘤牛、水牛、非洲野牛、欧洲野牛、美洲野牛、非洲水牛等牛亚科种间系统进化树.结果表明:野牦牛细胞色素b基因全序列长1 140bp,序列间共有13个SNP多态位点,核苷酸变异类型包括转换和颠换,无插入和缺失,表明野牦牛具有较丰富的遗传多样性.研究结果支持将牦牛划分为牛亚科中一个独立属(即牦牛属)的观点. 相似文献
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外源激素和插穗种类对海州常山硬枝扦插繁殖的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
南太行山区的野生海州常山类群由于具有保健功能、适口性强及特殊香味,被作为"绿色食品"过度开发,导致资源近于枯竭;但是扦插快繁可使资源较快恢复,并能保持优良株的特性.本试验研究了外源激素(ABT、NAA和IBA)不同浓度(0、200、400、800 mg/L)、不同插穗(当年生硬枝和2年生硬枝)和不同插穗叶片保留处理(保留全叶、保留2/3叶片、保留1/3叶片和完全去除叶片)对插穗生根率和移栽成活率的影响.结果表明在海州常山扦插育苗中,应选择当年生硬枝,去除全部或仅保留不多于1/3的叶面积,用400 mg/L的ABT处理40 min能取得较好扦插效果,生根率达57%左右,移栽成活率达82%左右. 相似文献
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为研究干旱胁迫对木薯叶片生理特性的影响,以木薯品种华南205为材料,设置正常供水(A)、轻度干旱(B)、中度干旱(C)、重度干旱(D)4个土壤水分处理,在木薯块根形成期、膨大期测定叶片抗逆性生理指标。研究结果表明,叶片POD含量随着木薯的生长,其活性总体呈上升的趋势,POD在重度干旱处理D中急剧升高,并显著高于A、B、C处理;受到水分胁迫的各个处理总体上SOD活性呈增大趋势,D处理的SOD活性在木薯块根形成期、膨大期均显著大于A、B、c处理;MDA含量在中度干旱C和重度干旱D处理下其含量明显高于正常供水A和轻度干旱B处理;C、D处理Pro含量比A、B处理显著增高;C、D处理自由水/束缚水比值显著高于A、B处理,表明C处理(对应40%~50%的田间持水量)是木薯品种华南205生理需水的一个临界点。 相似文献