朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶真核表达载体构建及在293T细胞中表达条件

乙酰胆碱酯酶(AChE;EC 3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标。目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道。本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在293T细胞中表达条件摸索。将朱砂叶螨野生型ace完整读框和去掉3’疏水区的ace基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,经PCR和双酶切鉴定及测序验证后,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/ace。采用GFP报告基因确定在293T细胞中表达条件摸索,结果表明293T细胞的最适转染时间为48h和LipofectamineTM2000转染试剂的最适加样量为20μL。本试验成功构建了朱砂叶螨AChE的真核表达载体,确定了在293T细胞中的表达条件,为后续筛选新型选择性AChE抑制剂奠定了基础。     

朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21(DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件。结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68kD的朱砂叶螨AChE蛋白。底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响。确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5mg/mL。通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础。     

酯酶同工酶电泳法鉴定特优组合种子纯度效果研究

本文采用酯酶同工酶电泳法，对10份特优系列组合进行纯度鉴别，结果表明，同工酶酶带分析结果与田间种植鉴定结果比较一致，通过两方法一致性和相关性分析，两方法存在较好的一致性，相关系数r=0.9370，达极显著水平，两方法测定的结果之间存在着极显著的正相关关系。     

鹅观草和大麦及其属间杂种F_1酯酶同工酶分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对鹅观草、大麦及其属间杂种的幼根、剑叶和幼穗进行了酯酶同工酶分析,结果表明:不同器官的酯酶同工酶谱表型有明显差异。鹅观草和大麦同—器官酶谱差异较大,表现在酶带数目、分布区域、酶带迁移和酶的活性上。佐证了鹅观草与大麦的亲缘关系较远。杂种F_1酶谱主要表现为互补两亲本酶谱的模式,并且有偏向母本遗传的倾向。     

甜橙乙烯诱导酯酶基因家族的进化

为了解甜橙乙烯诱导酯酶基因（Citrus sinensis Ethylene-induced esterase gene、CsEIE）家族成员的进化历 史与功能分化、检索比对了甜橙基因组尧TAIR 数据库尧Phytozome 数据库和NCBI EST 数据库中多个物种的EIE 家族 基因、分析了甜橙中该基因家族的全部18 个成员的基因结构尧染色体分布尧蛋白结构域尧保守序列尧基因表达尧进化 选择方向以及系统发生关系。结果表明、CsEIE 家族成员分布在4 条染色体中、通常呈串联重复排列;不同基因的外 显子数目变异范围为1~5;该基因家族绝大多数成员含有3 个保守基序。系统发生学分析结果显示、被子植物EIE 家 族基因聚为3 个分支、表明EIE 基因家族是在被子植物分支前就已存在的古老的多基因家族、家族成员目前的分布 现状是基因不断重复和丢失的结果。系统发生树中、甜橙CsEIE1~CsEIE8 属于同一分支、推测其是在柑桔与研究中 其他物种分化后经多次基因重复事件产生。该分支在其他被子植物中也同样有多个经独立基因重复事件形成的旁 系同源、而另外两支中发生的重复事件要少得多。表达分析结果显示、CsEIE 基因家族在转录活性尧表达模式上已经 出现了较大的分化。所有结果表明CsEIE 基因家族仍在扩张、各成员在经受不同的选择压力。     

栉孔扇贝血淋巴中酯酶活性及其性质

采用紫外分光光度法测定栉孔扇贝（Chlamysfarreri）血淋巴中酯酶的活性，并研究底物、抑制剂、激活剂、温度、pH对酯酶活力的影响及酶的热稳定性。结果表明，栉孔扇贝血清与血细胞中均存在酯酶，且血细胞中的酶活力高于血清。血清与血细胞中酯酶的最适作用底物有所不同，血清中为α-醋酸萘酯，而血细胞中为α-丁酸萘酯。当以α-醋酸萘酯为底物时，血清中酯酶的最适温度为45℃，最适pH值为7．5；以α-丁酸萘酯为底物时，血清中酯酶的最适温度为40℃，最适pH值为8．0。以α-醋酸萘酯及α-丁酸萘酯为底物分别测定酶的热稳定时，酶活力变化相似，在20℃时活力最高，而后缓慢下降。栉孔扇贝血淋巴中酯酶属中温型中性酶类，低温下较稳定，底物专一性不强，血清中的酯酶可能来自血细胞，该酶在贝类的免疫防御中町发挥重要的作用。     

鲤鱼血清蛋白,血红蛋白,LDH和EST同工酶的电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了鲤鱼性成熟期雌雄个体的血清蛋白、血清脂蛋白和血红蛋白,结果是雌雄个体血清蛋白电泳图谱有差异,雌性(14条)比雄性(13条)多1条蛋白带;血清脂蛋白和血红蛋白无性别差异。同时,测定了鲤鱼血清、肝胰脏、心脏、背部肌肉和眼晶体的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶和酯酶(EST)同工酶,LDH具有组织特异性,除在肝胰脏分离出9条酶带外,在血清中也分离出8条酶带,表明有LDH—c基因的作用,EST同工酶表现出明显的多态性,表明在鲤鱼各组织中有多个基因座位起作用。     

乙酰胆碱与胆碱酯酶

乙酰胆碱是动物体内由植物神经(交感神经和付交感神经)末梢部位释放出的一种化学物质。这种化学物质，能引起有关组织器官的生理活动，如兴奋平滑肌、腺体分泌增加、瞳孔缩小，以及神经细胞间冲动传递等等作用。与此同时，体内存在着一种具有特异性的酶，叫胆碱脂酶，它有迅速水解乙酰胆碱的作用，不使乙酰胆碱在体内产生蓄积，引起组织器官功能失调，因而利于它所支配的器官组织能接受连续的神经冲动，以维持正常的生理机能。     

许氏平鮋消化道中部分消化酶的研究

对许氏平 (Sebastesschlegeli)消化道内的 5种与消化吸收有关的酶进行分布和活性测定。结果表明 ,(1)肠道各段均具很高碱性磷酸酶活性 ,最适 pH为 9.7。食道和胃几乎没有碱性磷酸酶活性。 (2 )消化道各部位均含酸性磷酸酶 ,肠道活性最高 ,自幽门盲囊起依次递降。食道和胃酸性磷酸酶活性明显低于肠 ,胃和肠酸性磷酸酶的最适 pH均为 5 .3。 (3)肠道中羧酸酯酶活性明显高于胃 ,且 2者羧酸酯酶最适 pH差别较大 ,分别为 8.4和 6 .8。(4)胃蛋白酶活性明显高于肠道 ,胃蛋白酶最适pH为 2 .6 ,肠蛋白酶最适 pH为 9.4。 (5 )胃淀粉酶活性明显低于肠道 ,胃淀粉酶最适 pH为 4 .6 ,肠道淀粉酶最适pH为 7.0。这表明许氏平对蛋白质的初步消化在胃中进行 ,在肠中进一步消化和吸收 ,而对糖类和脂类的消化和吸收主要在肠道进行     

羧酸酯酶及其介导昆虫抗药性的研究进展

本文从分类、结构和水解作用机制、抗药性以及抗药机理等方面综述了昆虫羧酸酯酶的研究进展,旨在为进一步深入研究羧酸酯酶介导昆虫抗药性提供参考和奠定基础.