菠菜ISSR-PCR体系的建立与优化

以菠菜雌雄成株的幼嫩叶片为材料,用改良2×CTAB法提取基因组DNA,研究影响菠菜ISSR-PCR的因素,分别对模板浓度、Mg2+浓度、引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度进行优化,建立了适用于菠菜ISSR-PCR的反应体系(25μL):模板用量为60 ng、引物浓度为0.4 μmol/L、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、dNTPs用量为0.2 mmol/L、Taq酶用量为0.5U.扩增程序为95℃预变性5 min,94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,循环35次,72℃延伸8 min.该体系以菠菜雌雄株进行扩增验证,得到的条带清晰、多态性高、重复性高,且在雌株中发现特异条带.     

RAPD技术在石榴品种分类上的应用

以55个石榴栽培品种为试验材料,利用15条多态性好的随机引物进行RAPD分析,共扩增出125条带,其中多态性条带92条,多态性百分率73.6%,说明品种间有变异。应用TFPGA软件计算55个石榴品种间的Nei’s遗传距离,并用UPGMA法构建聚类图,将55个石榴品种分为4个类群,从DNA水平上揭示了石榴品种之间的亲缘关系。结果表明,采用UPGMA法聚类的结果与形态上的分类存在着一定的差异,即与根据花色和果味进行的分类没有相关性而与瓣型进行的分类有一定的相关性。     

石榴RAPD反应体系优化及亲缘关系研究

利用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物、酶4种因素3个水平上对石榴RAPD反应体系进行优化,确立了适合石榴RAPD反应体系:在25μl反应体系中,含1×PCRbuffer、2.5mmol/LMgCl2、200μmol/LdNTP、0.2μmol/L引物、50ng模板DNA、0.5UTaq DNA聚合酶。通过梯度PCR测验,确定了适宜的退火温度37℃。利用优化的RAPD反应体系对11个石榴品种进行亲缘关系分析,结果表明,11个品种之间的多态性比较高,变异大。聚类图结果表明,11个品种被明显分为临选1号、净皮甜、新大甜、临选14号;大粒三白甜、大青皮酸、小红皮酸、白花、江石榴、薄皮糙、玉石籽两个类群。因此,这一优化体系适合于石榴品种间的亲缘关系鉴定。     

芦笋性染色体的细胞学研究

采用去壁低渗法,对芦笋的茎尖的核型进行了研究,结果表明,芦笋的性别决定方式为XY型,雄株为XY,其核型公式为2n=2x=20=13m(2SAT)+7sm(SAT);雌株为XX,其核型公式2n=2x=20=12m(2SAT)+8sm;核型类型为2B型,属于较原始的类型。对芦笋花粉母细胞的减数分裂过程进行观察,发现存在1对不能完全配对的二价体,并且染色体在由前Ⅰ期向中Ⅰ期转变过程中,可以看到1对提前分离的染色体。确定了芦笋的性别决定方式属于异型XY型性别决定方式。     

茶菊再生体系及其卡那霉素筛选体系的建立

[目的]建立高效的茶菊再生体系和卡那霉素筛选体系。[方法]以茶菊叶盘和茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同浓度的6-BA和N从设计不同的培养基,研究茶菊叶盘和茎段的最适分化条件,并进行卡那霉素敏感性试验,研究其对不定芽诱导和生根的影响。[结果]茶菊叶盘和茎段直接分化不定芽的最适培养基分别为MS＋6．BA1．0mg／L＋NAA0．3mg／L和MS＋6．BA2．0mg／L＋NAA0．1mg／L,茶菊生根较容易,在5种培养基上生根率均可达100％;茶菊对卡那霉素反应较为敏感,20．0mg／L卡那霉素即可抑制叶盘的分化,40．0mg／L的卡那霉素可抑制茎段的分化,30．0mg／L卡那霉素可抑制小苗的生根。6cm左右长的生根无茵苗经炼苗和移栽后成活率为100％。[结论]该试验为茶菊的进一步遗传转化提供了基础。     

刺儿菜性别连锁的同工酶标记分析

[目的]利用刺儿菜进行同工酶分析,确定适合作为遗传标记的同工酶类型。[方法]采用聚丙烯酰胺不连续垂直平板电泳(PAGE)技术,对刺儿菜雌雄株花和叶片中过氧化物酶(POD),苹果酸脱氢酶(MDH),苹果酸酶(ME)及酯酶同工酶(EST)的差异进行比较分析。[结果]POD、MDH及EST同工酶在刺儿菜雌雄株的花和叶中存在明显的性别差异。在花和叶片中,POD同工酶均发现了性别特异的酶带,MDH同工酶仅发现在花中具有1条雄性特异带,苹果酸酶同工酶(ME)没有明显的性别差异。除花中的酯酶酶谱外,两种同工酶在同一性别的不同个体间,酶谱无明显差异。[结论]同一种酶在刺儿菜叶片和花中的雌雄株酶谱有明显差异。     

长筒石蒜的C带分析

对长筒石蒜C-带进行了初步研究,研究表明其染色体2 n=16。对于M型染色体,带纹主要以末端带为主;而对于T型染色体,主要出现了着丝粒带纹,同时也出现了随体带。同时,对于石蒜属染色体可能的进化方式进行了探讨。     

MADS-box基因与雌雄异株植物性别决定及分化的关系

MADS-box基因的功能涉及植物多个发育过程的调控,尤其是在植物花发育过程中具有重要的调控作用。雌雄同株植物花发育的ABC(DE)模型中已知的大多数基因都属于MADS-box基因,但在雌雄异株植物中对MADS-box基因的研究较少。对已经报道的与雌雄异株植物花发育的MADS-box基因进行详细的介绍,并对MADS-box基因与雌雄异株植物的性别决定及分化间的关系进行了分析探讨。     

石刁柏Ty1-copia反转座子逆转录酶序列克隆及异质性分析

对石刁柏(Asparagus officinalis)品种UC309及TD818的两个反转座子逆转录酶序列进行了PCR扩增并对其在基因组中的异质性进行了分析。结果表明,s101366和s107518两个转座子序列均属于Ty1-copia反转座子,是Ty1-copia反转座酶的部分保守区序列,其长度分别为636和653 bp。对随机获得的两个反转座子测序表明两个反转座子存在一定的异质性,其突变主要是由于发生了碱基置换,其中碱基转换分别占到80.4%和80.0%,T圮C和G圮A转换的比例差异不显著。通过对两个石刁柏品种(TD818和UC309)中获得的序列聚类分析发现,s101366和s107518均未表现出性别间、品种间及近缘种间的保守性,甚至表现出了种内异质性大于种间的异质性特征。这说明了两个反转座子处于高度变异的状态,是产生染色体不稳定的重要因素之一。     

Fe^＋离子注入诱变莲花突变体的SRAP分析

为了在分子水平上对离子注入诱变莲花突变体进行鉴定,本研究对同一剂量Fe^＋离子注入诱变的白洋淀红莲（Baiyangdian red lotus）突变体及其对照的基因组进行SRAP扩增,并利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对SRAP-PCR扩增产物进行分析。在优化好的SRAP体系基础上,从121对引物组合中筛选出了10对可以稳...