NPS多糖及其在果蔬保鲜中的应用研究概述

ＮＰＳ多糖系从野生半野生可食性植物种子中提取的大分子有机物，分子量７～１０万，具有良好的成膜性，可广泛用于各类果蔬的保鲜，在室温条件下可使苹果、鸭梨保鲜５～６个月，可使果菜类的西红柿、青椒、黄瓜的货架期延长１０天以上，在室温条件下保鲜４０天的西瓜仍有较好的商品性。ＮＰＳ多糖使用方法简便，可喷、可刷、可浸泡，是一种安全、高效、价廉的保鲜剂。     

尖孢镰刀菌Cu02对黄瓜的致病性及防治根结线虫的效果

通过在黄瓜品种9330上接种尖孢镰刀菌Cu02（Fusarium oxysporum）,分析Cu02对黄瓜的定殖及致病性。结果表明：Cu02在黄瓜植株内的定殖率达到100%,但是对黄瓜并不致病。通过在接种Cu02的黄瓜上接种南方根结线虫,研究Cu02对南方根结线虫的防治效果。结果表明：Cu02能减少根结线虫对黄瓜的侵染,黄瓜根结数减少38.0%,与对照差异显著。     

黄瓜根结发育早期WRKY基因的分离

为了确定黄瓜根结线虫侵染早期与取食位点形成相关的WRKY基因,以根结线虫侵染早期的黄瓜根为材料,基于黄瓜全基因组WRKY基因预测,进行RT-PCR扩增.在根结线虫侵染早期的黄瓜根组织中共分离到24个WRKY基因,分别定位于黄瓜的7条染色体上.系统进化分析表明,在分离到的WRKY基因中有17个为第二家族,6个为第一家族,1个属于第三家族.初步确定8个WRKY基因为根结线虫诱导表达基因,推测黄瓜根结线虫侵染早期为涉及多个WRKY基因参与的复杂调控体系,为进一步研究黄瓜根结线虫取食位点发育机制奠定了基础.     

南方根结线虫Mi-flp-16基因的克隆及原位杂交分析

以南方根结线虫2龄幼虫为材料，根据已知南方根结线虫flp基因的EST序列设计引物，利用末端快速扩增法（RACE）获得FLP基因Mi-flp-16的cDNA全长(GenBank登录号为EU549831)。该基因全长690 bp，包括一个528 bp的完整开放阅读框（ORF），编码一条176个氨基酸残基的多肽。序列分析表明Mi-flp-16编码3个FLP肽，即2个AQTFVRF和1个GQTFVRF。原位杂交结果显示此基因表达位置在围喉神经环。     

苏云金杆菌B24-14及其β-外毒素对植物寄生线虫的作用

分离戈壁土壤样品 ,获得 1株芽孢杆菌菌株B2 4 14 ,经 16SrDNA序列分析鉴定为苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)。用乙醇分级沉淀和紫外扫描方法 ,提取B2 4 14菌株的 β 外毒素。用细胞培养板法检测其对松材线虫 (Bursaphelenchusxylophilus)的毒杀效果 ,结果表明 :在 4mg·mL-1质量浓度下处理 8h ,线虫的杀死率可以达到93 75 % ,致死中质量浓度为 5 74 μg·mL-1;随处理时间延长和外毒素质量浓度的提高 ,毒杀效果也明显增强 ;6种质量浓度的 β 外毒素处理线虫 ,其死亡率与毒素质量浓度的自然对数呈正相关 ,相关系数为 0 981。温室防病试验表明 ,B2 4 14菌株的液体菌剂可以有效地防治根结线虫 (Meloidogynespp .) ,处理 2 1d黄瓜苗根结减退率达到71 6 %～ 84 6 % ,经多次试验其防治效果均与对照呈显著差异。     

辣椒乙烯反应转录因子基因CaJERF1 的克隆及诱导表达

 应用RT-PCR、RACE技术从乙烯诱导的辣椒中克隆到一个乙烯反应（ERF）类转录因子基因,命名为CaJERF1,其全长cDNA序列为1 379 bp,编码375个氨基酸,分子量为41.5 kD,具有一个由59个氨基酸构成的保守的ERF结构域。CaJERF1的AP2域与CaPF的同源性为100%,与JERF1的同源性为99%;全序列与CaPF和JERF1的同源性也分别达到99%和86%,属于ERF家族的第Ⅳ次家族。诱导分析表达结果表明,植物激素乙烯、苿莉酸甲酯以及盐和低温胁迫均可诱导该基因的表达,表明CaJERF1可能参与到多条信号途径中,并在多种逆境胁迫应答中发挥作用。     

南方根结线虫诱导辣椒基因CaRKNIF2的克隆与分析

 【目的】明确辣椒(Capsicum annuum L. HDA149)中与南方根结线虫(Meloidogyne incognita)不亲和互作过程中抗性相关WRKY转录因子的基因结构及其表达模式。【方法】采用RACE结合RT-PCR方法克隆cDNA序列,并根据cDNA序列设计特异引物扩增DNA序列,Southern杂交确定基因拷贝数,实时荧光定量PCR方法分析该基因在线虫侵染后辣椒的不同组织和不同时间点的表达。【结果】从辣椒中克隆到一个WRKY转录因子基因CaRKNIF2(GenBank登录号：GQ253367),该基因编码区全长1 662 bp,编码553个推定的氨基酸,为单拷贝基因。CaRKNIF2基因编码区全长DNA序列2 530 bp,包含5个内含子和6个外显子。在线虫接种诱导处理时,该基因表达具有组织特异性,根尖组织中的表达量最高;接种3 h后在根尖组织中的表达量开始升高,12 h最高,此时相对表达量约为3.1倍。【结论】CaRKNIF2在线虫接种处理后的表达上调,表明该基因参与了抗性基因Me3介导的辣椒与根结线虫的不亲和互作,可能在此过程中具有重要功能。     

香蕉相似穿孔线虫Rs-flp-14基因克隆与特征分析

类FMRF酰胺多肽(FMR Famide-like peptides,FLPs)在控制寄生性线虫侵染、取食和繁殖过程中起着重要作用。在防治线虫时,FLPs信号系统经常成为药物的作用靶标。本研究以香蕉相似穿孔线虫(Radopholus similis)为材料,用RT-PCR和RACE方法,获得了类FMRF酰胺多肽flp-14基因的cDNA全长序列,命名为Rs-flp-14。此基因cDNA序列全长为569bp,包括一个357bp的开放阅读框(0RF),编码含119个氨基酸的蛋白,分子量与等电点分别为12.85KD和9.41。序列分析表明Rs-flp-14编码2个FLP肽(2xKHEYLRFG),N端具有27个氨基酸残基组成的信号肽。Southern杂交显示其为单拷贝基因。cDNA与基因组DNA重叠分析表明基因包含三个内含子,四个外显子。聚类分析表明该基因与猪蛔虫的As-flp-14同源,相似度最高(64%)。原位杂交结果显示Rs-flp-14基因表达位置在线虫的神经环部位。本研究结果将为研究该基因功能奠定基础,并为以FLPs为作用靶标的防治线虫药物提供理论依据。     

宏基因组学及其在植物病害生物防治中的应用

利用微生物及其代谢产物来控制有害生物是生物防治的主要方法之一,目前使用的生防菌株大多来源于培养基筛选。然而由于受到技术的限制,现在能够利用培养法获得的微生物种类不足自然环境中的1%。宏基因组学技术(metagenomic technology)是完全不依赖于人工分离培养直接获得环境中理论上所有微生物基因组信息的一种有效手段,为发掘这些尚不能被纯培养的微生物资源提供了良好的契机。本文综述了宏基因组学的概念、研究策略及其在植物病害生物防治中的应用前景,以期为开发和使用新型植物病害微生物生防菌剂提供思路。     

辣椒抗根结线虫相关WRKY基因的分离

为了确定抗性基因Me3介导表达的抗根结线虫相关WRKY基因的种类及其表达特点,以含Me3基因的辣椒HDA149品种为材料,接种南方根结线虫二龄幼虫,通过同源克隆法获得辣椒4个WRKY新基因片段。利用RT-PCR技术克隆了WRKY-a、WRKY-b、WRKY-c、CaWRKY1、WRKY1和CaWRKY2等 6个WRKY基因的全长cDNA。研究表明,WRKY-a、CaWRKY2基因是受根结线虫诱导表达的;CaWRKY1基因的表达具有组织特异性,在根、叶中表达,在茎中不表达。聚类分析表明WRKY-a、WRKY-c、CaWRKY2蛋白属于第Ⅰ组WRKY蛋白,WRKY-b、CaWRKY1属于第Ⅱc亚组,WRKY1属于第Ⅱa亚组。