小麦SRAP-PCR体系的正交设计优化（摘要）

[目的]优化小麦SRAP-PCR技术体系。[方法]以小麦丰优68为试材,利用正交设计L16（45）对小麦SRAP-PCR反应体系中的5因素（Taq聚合酶、Mg2＋、模板DNA、dNTPs、引物）在4个水平上进行优化试验。[结果]不同因素对小麦SRAP反应体系影响的大小顺序为：Mg2＋〉Taq聚合酶〉dNTPs〉模板DNA〉引物;优化的小麦SRAP-PCR体系为：在20μl反应体系中,包括10×PCR buffer2.0μl、Mg2＋2.0mmol/L、Taq聚合酶2.0U、dNTPs0.2mmol/L、模板DNA40ng、引物0.6μmol/L。[结论]该优化体系为小麦资源SRAP遗传分析奠定了技术基础。     

抗番茄黄化曲叶病番茄新品种‘科大205’

‘科大205’番茄是以优良自交系‘TR068’为母本、以‘TR131’为父本杂交育成的抗番茄黄化曲叶病毒的硬果红果型新品种。无限生长类型,生长势强,叶色浓绿,叶量中等,8 ~ 9片真叶着生第一花序。果实近圆形,果面光滑,青果无绿肩,成熟果红色,单果质量200 ~ 220 g。果实硬度高,耐贮运,商品性好,品质优良。抗番茄黄化曲叶病毒,兼抗烟草花叶病毒、枯萎病和叶霉病。中熟,平均产量153.1 t · hm-2,适宜中国北方日光温室越冬茬和秋延后栽培。     

河北省番茄黄化曲叶病毒病的发生与分子诊断

[目的]对河北省发生的一种番茄病毒病进行症状识别和分子诊断。[方法]2008年11月及2009年7～10月对河北省番茄病毒病田间发生情况和典型症状进行详细调查,然后根据已发表的番茄黄化曲叶病毒的基因组序列设计特异引物,进行PCR检测。[结果]该病毒病的发病症状与番茄黄化曲叶病毒病相一致,从症状上初步诊断为番茄黄化曲叶病毒病;在石家庄和衡水采集的病株样本的DNA均扩增出307 bp大小的特异条带,表明该片段为TYLCV的一个分离物,证明采集的番茄病株是由TYLCV侵染所致的番茄黄化曲叶病毒病。[结论]该研究是番茄黄化曲叶病毒病在河北省大面积发生及从分子水平上确诊的首次报道。     

甜柿试管苗生根条件的研究

采用正交设计，探讨了影响甜柿试管苗生根的复合因素，结果表明：在添加细胞分裂素CPPU0.2mg/L的MS（1／2N）继代培养基上，经适当时间继代培养的嫩梢经IBA250mg/L浸基部15s后转接到1／2MS（1／2N）＋活性炭1000mg/L的生根培养基中或直接接种到添加有IBA1mg/L的上述生根培养基中诱导生根的效果好。不仅生根率高，根生长快，且根条数多，易于多栽成活。     

油葵种子DNA提取和RAPD反应体系的优化

[目的]为利用RAPD技术进行油葵的亲缘关系分析及杂种鉴定奠定基础。[方法]以6种杂交油葵种子为试材,采用改良的CTAB法提取油葵基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的RAPD-PCR反应体系。[结果]采用改良CATB法提取的油葵DNA质量好、得率高,且无蛋白质和酚类的污染。油葵的最适RAPD-PCR反应体系为:2.0μl 10×Buffer、2.0 mmol/L Mg2+、150μmol/LdNTPs、1.5UTaq酶、2.0 ng/μl DNA模板、0.25μmol/L引物,总体积为20.0μl。利用该体系对不同含油量的6个油葵杂交种进行扩增,均表现为带形清晰稳定、带数适宜。[结论]该RAPD技术体系适用于各种油葵杂交种的DNA分析。     

柿品种''禅寺丸''花粉超低温保存研究

对柿品种‘禅寺丸’(Diospyros kaki Thunb．CV．Zenjimaru)花粉进行了干燥脱水法(Dehydration)和玻璃化法(Vitrification)液氮超低温保存研究，结果表明：0℃下硅胶干燥8h或(20士1)℃下玻璃化液PVS2处理40～60rnin后直接投入液氮保存，40℃解冻70s后，相对存活率(TTC检测)和萌发率都在90％以上，且活力与保存时间长短无关。该结果为柿花粉的长期保存提供了技术支持。     

小麦SRAP-PCR体系的正交设计优化

[目的]优化小麦SRAP-PCR技术体系。[方法]以小麦丰优68为试材,利用正交设计L16（4^5）对小麦SRAP．PCR反应体系中的5因素（细聚合酶、Mg^2、模板DNA、dNTPs、引物）在4个水平上进行优化试验。[结果]不同因素对小麦SRAP反应体系的影响为：Mg^2〉Taq聚合酶〉dNTPs〉模板DNA〉引物;优化的小麦SRAP—PCR体系为：在20山反应体系中,包括10×PCRBuffer2．0山、Mg^2 2．0mmol／L、砌聚合酶2．0U、dNTPs0．2mmol／L、模板DNA40ng、引物0．6μmolVL。[结论]该优化体系为小麦资源SRAP遗传分析奠定了技术基础。     

柿和君迁子试管苗缓慢生长法保存及其遗传稳定性研究

 对柿(Diospyros kaki Thunb．)和君迁子(D．1otus L)试管苗缓慢生长法保存及其恢复生长植株的遗传稳定性进行了研究，结果表明：低温(6±1)℃和光照800 lx(12 h／d)的条件下，试管苗在添加有甘露醇20 g／L或PPⅢ 1．0 mg／L的MS(1／2N)+蔗糖20 g／L+琼脂7 g／L+PVP 500 mg／L培养基上或在含有CPPU 0．2 mg／L的1／2 MS(1／2N)+蔗糖15 g／L+琼脂7 g／L+PVP 500 mg／L培养基上保存18个月，平均存活率在90％以上；上述3种方法保存后恢复生长的植株，在核DNA含量和染色体数目上没有发生改变；RAPD分析时表明，只有在添加PP 的保存中，次郎3个单芽姊妹系扩增出的1827条谱带中，增加了3条新带，变异率为0．16％，君迁子3个单芽姊妹系扩增出的1736条谱带中，增加了1条新带，缺失了l4条带，变异率为0．86％。该结果为柿属植物种质资源缓慢生长法保存的有效性和可行性提供了理论依据。     

脱毒食用仙人掌工厂化快繁技术研究

试验结果表明:‘米帮塔’幼龄掌片上的刺座芽块经70%酒精30 s,0.1%HgCl2浸泡10 min,无菌水漂洗4~5遍后切下芽体(约5mm)接种到含6-BA 1.0 mg/L和NAA 0.1 mg/L的MS培养基中,萌发的新芽接种到6-BA 0.5 mg/L和NAA 0.05 mg/L的MS培养基中继代培养4周,增殖倍数超过10;新梢转接到含NAA0.1 mg/L的1/2MS培养基中诱导生根,生根率100%;生根的试管苗移栽到蛭石∶砂土=1∶1的混合基质中成活后移植到大田,成活率95%以上。研究结果为脱毒食用仙人掌种苗的工厂化快繁提供技术支持。     

冬凌草试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

对冬凌草[Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara.]试管苗茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究。结果表明:1～2cm嫩梢在培养基MS+0.5mol/L蔗糖上培养3d,切取2～3mm茎尖,室温(20℃)下装载液(60%PVS2)过渡30min,0℃下玻璃化液(PVS2)处理45min,投入液氮保存1d后,40℃水浴化冻,1.2mol/L蔗糖的MS培养基洗涤20min,接种于6-BA0.8mg/L、IAA0.05mg/L的MS培养基上,暗处理1周后转到正常光下,成活率达到86%,再生植株生长和分化正常。