两种抽提家蚕基因组DNA方法的比较

基因组DNA是开展分子生物学研究的基础工作,而抽提方法繁多.为此,本研究主要对蛋白酶K、CTAB法进行了系统的分析比较,结果发现两种方法抽提的DNA均能满足一般的PCR分析,CTAB法抽提耗时较短,但的蛋白酶K抽提法DNA得率更高,且不同的缓冲液对抽提效果有一定影响.这为今后广泛开展家蚕分子生物学研究有一定的参考作用.     

家蚕基因组DNA甲基化分析

DNA甲基化在生物的基因表达调控与发育调节过程中具有重要作用。应用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术对7个家蚕保存品种的胞嘧啶甲基化模式和程度进行评估。在所能检测的CCGG序列中,至少有8.6%~10.9%的胞嘧啶发生了甲基化;12对引物共获得1 156条扩增带,其中376条在品种间呈多态性,多态性比例为32.5%。结果显示:家蚕基因组可检测到DNA甲基化,各品种间的甲基化模式存在差异,CCGG序列中胞嘧啶外部甲基化(10.9%)高于内部甲基化(8.6%)。     

绿色荧光蛋白基因标记枯草芽孢杆菌研究

将源于枯草芽孢杆菌168的木糖启动子xylR和来源于载体pGFPuv的gfp基因连接,插入枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭载体pIM,成功构建了以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组载体pIM-GFP.转化枯草芽孢杆菌菌株BS523,突变株在荧光显微镜及紫外灯下均观察到较强的绿色荧光,同时PCR鉴定结果正确.表明重组载体pIM-GFP成功转入菌株BS523,并且gfp基因成功表达.     

马尾松毛虫腺苷酸转移酶基因的克隆与分析

 【目的】克隆马尾松毛虫腺苷酸转移酶基因。【方法】采用RACE方法克隆基因,利用软件分析推导蛋白的保守结构域,并与已报道的其它8种昆虫腺苷酸转移酶进行比较,并构建系统树,用southern法分析该基因在单倍体基因组中的拷贝数。【结果】获得马尾松毛虫腺苷酸转移酶基因全长cDNA（GenBank登录号：EF194157）,该基因无内含子,在烟草天蛾(M. sexta)、棉铃虫（H. armigera）、家蚕（B. mori）蜜蜂(A. mellifera)、绿蝇( L. cuprina)、果蝇(D. melanogaster )、蚊子(A. gambiae) 等昆虫间高度保守。基因组酶切后呈单一Southern杂交带。【结论】马尾松毛虫松毛虫腺苷酸转移酶基因高度保守,在基因组中单拷贝存在。     

家蚕胆碱激酶基因的原核表达与蛋白质纯化及在农药残留检测中的应用

乙酰胆碱酯酶(Ach E)是有机磷(OP)和氨基甲酸酯类农药的作用靶蛋白,在体外胆碱激酶(choline kinase)可专一性地以三磷酸腺苷(ATP)作为磷酸的供体,催化Ach E的酶促反应产物氯化胆碱发生磷酸化。依据家蚕基因组数据库中的胆碱激酶基因(Bmcok)序列(Gen Bank登录号:AK378994.1)设计合成特异引物,从家蚕5龄第3天幼虫头部克隆了家蚕胆碱激酶基因,在大肠杆菌中进行原核表达并纯化目的蛋白质,获得质量浓度约1.03 mg/m L的家蚕胆碱激酶液。纯化的家蚕胆碱激酶在30℃、p H 9.5时的活性最高,约为115.6 U/mg。通过耦合Ach E和家蚕胆碱激酶的酶催化反应,并结合ATP-荧光素发光反应,建立酶抑制-发光快速检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法。该方法对甲胺磷残留的检测限可达0.05μg/m L,灵敏度高于现有的酶抑制色卡法和酶抑制分光光度计法,初步表明了将家蚕胆碱激酶应用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测的可行性。     

阿维菌素对家蚕血细胞DNA变异的影响

利用RAPD标记技术检测杀虫剂阿维菌素对家蚕血细胞DNA的损伤,作为评价其对蚕体毒性的依据。分别用1、2、4、8μg/L阿维菌素药液处理的桑叶给4龄起蚕添食,96 h后对家蚕血细胞的基因组DNA进行RAPD分析。24条RAPD引物对5个样品基因组DNA扩增产生的清晰条带数为143条,其中多态性片段19条,多态性带数比率为13.29%。用Ntsyspc 2.1软件计算出不同处理样品血细胞DNA间的遗传相似系数分布在0.867～0.993,树状聚类图显示正常样品与1、2、4μg/L阿维菌素药液处理的3个样品聚为一类,而8μg/L阿维菌素药液处理的样品单独聚为一类,说明该样品血细胞DNA的变异最大。研究结果提示,RAPD标记作为杀虫剂对家蚕的毒性检测标志技术,可准确预警蚕区农药使用对养蚕生产存在的潜在危害。     

松材线虫RNA聚合酶基因的RNA干扰研究

克隆了松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)RNA聚合酶基因片段,构建大量表达松材线虫RNA聚合酶基因片段的特异双链RNA(dsRNA)表达载体,并用表达的双链RNA(dsRNA)对松材线虫进行了RNA干扰实验。结果表明,松材线虫浸泡在20℃的RNA聚合酶基因双链RNA(dsRNA)溶液中干扰24 h后再培养12 d,其繁殖倍数为73.2;对照处理的繁殖倍数为322.8,两者的繁殖倍数相差4.4倍;松材线虫浸泡在4℃的RNA聚合酶基因双链RNA(dsRNA)溶液中干扰24 h后再培养12 d,其繁殖倍数为120.8。RNA聚合酶基因的双链RNA(dsRNA)浸泡明显的抑制了松材线虫的繁殖;并且发现利用浸泡法对线虫进行干扰试验,双链RNA(dsRNA)20℃浸泡的干扰效果要好于前人报道4℃浸泡的干扰效果。     

罗氏沼虾病毒病检测和免疫防治进展

白尾病是一种由诺达病毒(MrNV)及其卫星样病毒(XSV)引起的罗氏沼虾病害,具有蔓延速度快和致死率高的特点,是罗氏沼虾养殖中的主要病害。介绍罗氏沼虾MrNV和XSV的基因组和结构蛋白、病毒检测方法、罗氏沼虾MrNV免疫机制、疫苗研究进展、MrNV病毒样颗粒微粒特性,以及罗氏沼虾健康养殖策略,讨论疫苗在罗氏沼虾病害防治中的作用。     

NaCl胁迫对桑树叶片DNA变异的影响

利用RAPD标记技术检测桑树叶片的DNA损伤程度可以作为衡量桑树耐盐性的指标。分别用0.2%和0.4%NaCl溶液胁迫桑苗8周后对桑树叶片的基因组DNA进行RAPD分析。16条RAPD引物均为多态性片段,共扩增出59条带,平均每个引物扩增出3.69个条带。用Nysyspc2-1软件计算出不同处理组桑树叶片DNA的遗传相似系数为0.3662～0.5476。树状聚类图显示处理组桑树叶片DNA聚为一类,对照组桑树叶片DNA自成一类,说明盐胁迫浓度与桑叶DNA损伤呈正相关,DNA损伤的变异程度可以作为桑树耐盐性品种选育的一个有效参考指标。     

水产口服DNA疫苗研究进展

水产病害是阻碍水产养殖业健康可持续发展的重要因子,渔用疫苗的研发和应用是预防水产动物疾病最安全有效的措施。DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗,与传统的疫苗相比,DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、保存方便等优点,是疫苗研究的热点,而口服免疫途径具有适用性广、受体鱼应激反应低等优点,是较为理想的免疫方式。本文综述口服疫苗的免疫机制及水产DNA疫苗的研究现状,旨为研究安全、高效的新型口服疫苗提供一定的参考信息。