甘肃定西地区甘蓝枯萎病病原菌的分离与鉴定

自2009年起,甘肃定西地区出现了甘蓝植株矮化、叶片黄化、枯萎甚至死亡的现象。2015年8月,我们采集了田间病株样本,使用常规组织分离法对病原菌进行了分离和纯化,依据柯赫氏法则进行了病原菌确认,并通过形态学和分子生物学方法对病原菌进行了鉴定。结果表明病原菌的形态学特征与尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum一致,其rDNA-ITS、rDNA-IGS以及EF-1α序列与尖孢镰刀菌F.oxysporum相似性达99%,基于病原菌及尖孢镰刀菌各代表专化型EF-1α序列构建的系统发育树将该菌与尖孢镰刀菌黏团专化型F.oxysporum f.sp.conglutinans聚为一类,故引致甘肃定西地区甘蓝枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌黏团专化型F.oxysporum f.sp.conglutinans。     

CRISPR/Cas9编辑芥菜型多心皮油菜BjROP10基因的研究

油菜多心皮性状可显著增加油菜的每角果粒数，在油菜高产育种中有潜在的应用价值。前期研究发现，芥菜型多心皮油菜J163-4可形成稳定的四心皮性状，且小G蛋白基因BjROP10可能参与调控其多心皮的形成，但其分子机制尚不明确。本研究利用CRISPR/Cas9技术，构建了BjROP10的双靶点载体，并遗传转化芥菜型多心皮油菜J163-4。在T₀代，通过筛选鉴定获得了20株阳性苗，其中13株心皮数目发生改变。通过测序分析了7株心皮数发生变化的转基因阳性植株的BjROP10序列突变情况，结果显示其目标基因序列发生变异，导致无法编码形成正常的BjROP10蛋白。本研究对进一步解析BjROP10基因响应CLV信号调控油菜心皮数发育的功能提供了材料基础，也为研究油菜多心皮性状发育的分子机制奠定理论基础。     

利用CRISPR/Cas9技术编辑甘蓝型油菜富甘氨酸蛋白基因BnGRP1的初步研究

富甘氨酸蛋白(glycine rich proteins,GRPs)在植物逆境响应中发挥重要作用。前期通过全基因组关联分析获得油菜响应低磷胁迫的候选基因BnGRP1，但是其响应低磷胁迫的分子机制尚不明确。序列分析发现，BnGRP1的CDS全长为399 bp，编码132个氨基酸，其中62个为甘氨酸，占该蛋白氨基酸总量的47.0%。为进一步研究BnGRP1的生物学功能，本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了目标基因的双靶点载体G2-TD1TD2，并遗传转化甘蓝型油菜，通过筛选鉴定获得了13株T₀代转基因阳性植株。通过TA克隆和测序技术分析了5株转基因植株中Bngrp1的突变位点，其中3株的目标基因序列发生突变，导致无法编码形成正常的富甘氨酸蛋白。本研究为研究BnGRP1的生物学功能提供了实验材料，也为进一步研究BnGRP1响应低磷胁迫的分子机制提供理论和实验基础。     

苜蓿和甜高粱混合青贮饲料对关中奶山羊生产性能、产奶量和经济效益的影响

为了研究苜蓿和甜高粱混合青贮饲料对关中奶山羊生产性能、产奶量和经济效益的影响，本研究选取体况良好、胎次相同（2胎次）、泌乳天数和产奶量接近的关中奶山羊36只，随机分成4组，其中A组为对照组，饲喂基础TMR日粮，B、C、D组为试验组，依据等蛋白和等能量原则，在日粮配方中分别添加10%、20%和30%的苜蓿和甜高粱混合青贮饲料，进行为期42d的试验。结果表明，与对照组相比，3个试验组关中奶山羊生产性能差异不显著（P>0.05），但产奶量和经济效益显著提高（P<0.05），其中C组经济效益最高，为8.58元/d。因此，在本试验条件下，添加20%的苜蓿与甜高粱混合青贮饲料效益最好，可在生产实践中进行推广。