活体采卵时间间隔对牛克隆胚胎发育的影响

采用活体穿刺技术（ovum pick up,OPU）,分别间隔3／4（1周2次）、5、7、10、14d对同一批荷斯坦奶牛进行穿刺采卵,根据优势卵泡直径和所有卵丘细胞-卵母细胞复合体的状态确定采卵时卵泡所处的发育阶段,从而确定卵泡波的发育动态变化。并以间隔不同时间采卵获得的卵母细胞成熟后进行体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）制备克隆牛胚胎。重构胚体内培养7d后,通过比较克隆囊胚的发育率判定卵母细胞质量的差异,从而确定最佳的采卵时间间隔。结果显示：①穿刺采集所有直径超过3min的卵泡后,可起始1个新卵泡波,大约5d后从属卵泡开始进入凋亡阶段,7d后进入晚期凋亡阶段,第7～10d又起始1个新的卵泡波,第14d时第2个卵泡波中的从属卵泡起始凋亡。②间隔不同时间组克隆囊胚发育率存在差异,间隔3／4d（1周2次）为23．1％,间隔5d组为15．0％,间隔7d组为10．9％,间隔10d组为4．9％,间隔14d组为29．0％。结果显示：间隔不同的时间采卵,卵泡所处的发育状态存在差异。并对卵母细胞质量具有显著的影响。     

波尔山羊胚胎移植成功与否的早期诊断

随着生物工程技术在畜牧业中的运用,布尔山羊的胚胎移植已经走上了产业化的道路.目前,主要是运用超数排卵技术和外科手术移卵来实现,为了便于判断手术后的受体羊是否怀孕.提高羊只的再利用率以及及时对妊娠羊只进行合理饲养管理,我们根据国内外一些报到和自身生产实践引入了B型超声妊娠诊断技术,它是一种无痛苦、无损伤、比较安全的活体诊断方法.虽然这种诊断技术目前最广泛地用于医学疾病的诊断,尤其是在人医上有着普遍的使用,而且在兽医领域也开始应用.随着生物工程研究的深入开展,各学科之间相互渗透愈加明显.在国外,超声诊断技术已较多地应用于哺乳动物胚胎工程和基因工程研究中的妊娠检查、孕期监测、超数排卵等方面.由于超声诊断有实时、直观和可靠性高的特点,以图像记录某些资料更便于以后论证和分析.在转基因动物和胚胎工程研究尤其是目前布尔山羊胚胎移植产业化过程中常常遇到早期妊娠诊断的问题.以往判断动物怀孕与否,常采用徒手触诊或情期观察的方法,不仅其检查者需要娴熟的操作技术和丰富的实践经验,而且诊断的准确性差,常常容易引起流产,必须在妊娠后期胎儿较大时进行,这样就导致了未受孕羊只的再利用率降低,增加生产成本,也不利于妊娠母羊的合理饲管,在产业化过程中有着较多的弊端.为了解决这一问题,我们结合生产实践,采用B型超声诊断仪进行了这方面的研究试验.B超早期妊娠诊断的应用,提供了我们早期对怀孕与空怀羊只的分群饲养的依据,从而做到重点保护,提高繁殖效率以及空怀羊只的重复利用等,提供了饲养空间,减少饲养成本并取得了初步的成效.现将结果报道如下:     

一例羊肝片吸虫死亡病例报道及预防

片形吸虫病是牛羊最主要的寄生虫病之一。其寄生于黄牛、水牛、绵羊、山羊等各种反刍动物的肝脏胆管中,引起急性或慢性肝炎和胆管炎,并发全身性中毒和营养障碍,危害相当严重、可引起大批死亡或生产性能下降,给畜牧业经济带来较大的损失。下面就本中心隔离场一例肝片吸虫病报道如下:     

B型超声妊娠诊断技术在波尔山羊胚胎移植产业化中的应用

应用B型超声断层扫描仪对279只波尔山羊胚胎移植受体白山羊和87只自然交配波尔山羊进行早期妊娠检查。在胚胎移植后20-100d试验羊妊娠断阴性(B超判断未怀孕)的准确率为100％，正常交配羊妊娠诊断阳性(B超判断怀孕)的准确率为100％；部分胚胎移植后20d左右的受体羊出现假阳性，这可能与胚胎移植后胎儿发育停止或出现流产或手术造成的粘连有关。试验证明，在胚胎移植(2～8细胞胚胎)30d以后进行B超妊娠检查不仅可准确判断妊娠情况，而且能得到胚胎移植羊流产或妊娠中止的数据，试验说明，B超妊娠诊断是目前波尔山羊胚胎移植产业化过程中的一个重要环节。     

超排处理山羊获可注射受精卵技术应用中的八个问题

据多年的实验研究和生产应用表明：超排处理山羊是获得可注射和胚胎分割的受精卵最为有效技术途径；如在单个羊只上获得胚胎的数量质量、在大批量胚胎的发育同期性、在获得胚胎的自由性、技术超作可行性等方面，该技术途径比期它技术途径（自然发情配种、人工诱导取卵、分离卵泡体外培养等）都有明显的优越性。     

激素短处理技术在青年转基因山羊人工诱导泌乳上的应用

利用外源激素短处理技术,对青年期转基因山羊(10～12月龄)进行人工诱导泌乳,并分析外源激素的处理对转基因山羊乳房发育、泌乳规律、乳汁成分、身体健康的影响,评估此技术对青年转基因山羊进行人工诱导泌乳的可行性.试验组A:8只转基因母羊联合注射雌激素和孕酮(E2∶P4按1∶8)配以利血平进行人工诱导泌乳;试验组B:另7只转基因母羊采用E2∶P4按1∶3进行人工诱导泌乳;并且选择同龄的10只普通母山羊作为对照组C,人工诱导泌乳方案同试验组A;选择同龄的10只普通母山羊作为对照组D,人工诱导泌乳方案同试验组B.结果表明:①转基因山羊经高比例的雌激素水平(E2∶P4=1∶3)的诱导作用,乳腺发育充分,乳房饱满且内部充盈乳汁,乳房容积率是低雌激素水平组羊(E2∶P4=1∶8)的2倍;②最初1周,经高比例的雌激素水平诱导的转基因山羊产奶量是低比例的雌激素水平组的2倍,差异极显著(182 mL/d±25 mL/d vs 93 mL/d±12 mL/d,P<0.01);③转基因山羊经激素诱导泌乳,在最初1周内乳汁分泌量呈先下降后逐步上升的变化规律;④通过人工激素诱导转基因山羊产生的乳汁,乳糖含量为4.35%～4.66 %,乳脂含量3.71%～4.16%,蛋白质含量4.06%～4.11%,均与对照组乳汁无显著差异;⑤诱导泌乳,对山羊自身的健康无显著影响,试验后,能够恢复情期并产羔.可见外源激素人工诱导泌乳短处理技术在青年转基因山羊上应用是可行的.     

hLF转基因羊繁殖、遗传与表达稳定性

【目的】分析转基因对人乳铁蛋白（human Lactoferrin,hLF）转基因羊繁殖性能的影响,及转基因在不同世代中的遗传与表达稳定性。【方法】应用自主研发的原代hLF转基因山羊（G0代公羊）建系,与普通奶山羊常规交配获得F1代;F1代公羊与F1、F2代母羊或普通奶山羊（N）交配获得F2代;F2代公羊与F2代母羊交配获得F3代。分别采用PCR和ELISA方法对其后代个体进行整合与表达鉴定;统计各世代不同配种方式所获得的后代数量、转基因整合率、母羊受胎率、羔羊异常率等繁殖性能数据。【结果】经过多个繁殖周期,各世代转基因羊受胎率、产羔率等繁殖性状均正常。获得F1代hLF羊19只,转基因整合率为24.7%（19/77）;F2代hLF羊86只,其中通过（F1♂×N♀）交配方式获得的是62只,转基因整合率为33.2%（62/187）;通过（F1♂×F1♀）交配方式获得hLF羊16只,转基因整合率为76.2%（16/21）;通过（F1♂×F2♀）交配方式获得hLF羊8只,转基因整合率为34.8%（8/23）;获得F3代hLF羊9只,转基因整合率为52.9%（9/17）。ELISA方法测定F1、F2、F3代羊泌乳20周乳汁中hLF的表达发现,hLF在转基因羊乳汁中稳定表达,3个世代hLF羊乳中的平均表达量分别为351.75、340.00和326.25 μg•mL-1。【结论】hLF基因的转入未对转基因羊群的繁殖性能产生显著影响,hLF基因能在山羊群体世代间稳定遗传和表达。