脱氨再生几丁质凝胶亲和柱层析法纯化溶菌酶

首次采用脱氨再生几丁质凝胶亲和柱层析法直接从鸡蛋清及菜心的茎叶粗提液中纯化了溶菌酶．纯化倍数分别为４２．４倍和３１０．９倍；回收率为７０．２％与６１．０％；每克酶蛋白的活性分别为９９１５３Ｕ和７１１００Ｕ．每克吸附剂对鸡蛋清溶菌酶的活性吸附量为３１２．７Ｕ；蛋白吸附量为１６．１ｍｇ．两种纯化的溶菌酶经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳结果均显示单一条蛋白带．     

“东一号”剑麻蛋白酶分离纯化及特性研究

比较了用乙醇沉淀法和硫酸铵盐析法从“东一号”剑麻中提取蛋白酶的效果.用前者制得的粗酶经Sephadex G-25柱层析得两个蛋白峰,其中峰Ⅰ与酶活性重叠。峰Ⅰ再经SP—Sephadex C—50离子交换柱层析,pH.离子强度线性梯度洗脱得4个蛋白峰.其中峰4与酶活性重叠。此酶液经聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳.在每条胶柱上呈单一蛋白带;量4℃下2d后出现六角形结晶.结晶酶液在pH5.5-10.0.60℃范围内稳定性较好;其最适pH为7.5;最适温度为40℃;Km(酪蛋白)值为0.114％(w/v)用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测得其分子量66KD;用Sephadex G—100柱层析测得的分子量为69.9KD.用Ellman's试剂测得其游离巯基含量为4.3 mol—SH/10~5g蛋白质。     

几种有机酸和氨基酸对乙醇酸氧化酶活性的影响

本文研究苹果酸、甘油酸、丝氨酸、谷氨酸对菜心(Brassica parachinensis Bailey)叶片乙醇酸氧化酶活性的影响。结果表明,苹果酸、丝氨酸和谷氨酸均对乙醇酸氧化酶起竞争性抑制作用,其中以苹果酸和丝氨酸的抑制作用较强而谷氨酸的抑制作用较弱;测定菜心乙醇酸氧化酶对乙醇酸的Km值为0.36m mol/L,丝氨酸、苹果酸、谷氨酸对乙醇酸氧化酶的Ki值分别为5.5,7.0,13.5m mol/L,甘油酸对乙醇酸氧化酶活性没有明显的影响,讨论了上述几种有机酸和氨基酸在乙醇酸途径代谢调节中的作用。     

壳聚糖微球的制备及其固定化木瓜蛋白酶的研究

用来源丰富且廉价,并具有许多优良生物特性的壳聚糖为原料,以简单易行的服交联法制备壳聚糖微球,并对其性状进行和分析。结果表明：它复合了壳聚糖与高分子微球的功能,然后,以壳聚糖微球为载体,用吸附－交联的联合固定化方法制备固定化木瓜蛋白酶,并研究了木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果显示：木瓜蛋白酶的最佳固定化条件是给酶量为１．９２ｍｇ／ｇ、４～８℃吸附１２ｈ,再用体积分数为０．５％的戊二醛溶于４～８℃交联     

普通玉米和超甜玉米苗期蔗糖合成酶与磷酸蔗糖合成酶的活力比较

以普通玉米和超甜玉米为试材，比较两玉米中在苗期的蔗糖合成酶与磷本蔗糖合成酶的酶活力变化，结果表明，从胚芽期到五叶期，超甜玉米和普通玉米的蔗糖合成酶，磷酸蔗糖合成酶的活力逐渐升高，并且超甜玉米中这两种酶的酶活力都高于普通玉米。     

萝卜CBPs溶菌酶活性的稳定性研究

植物溶茵酶是植物防御体系中的一部分,在植物防卫体系中具有重要作用.萝卜中有2个具溶菌酶活性的几丁质结合蛋白(Chitin-binding proteins,CBPs),分别是CBP1、CBP2组分.为了解CBPs的作用机制以及在萝卜中的生理功能,试验研究了CBP1、CBP2溶茵酶组分酶活性的稳定性.结果显示,CBP1、CBP2在pH 5.4、65℃条件下迅速失活,在pH 3.4～10.6、25℃条件下较稳定;CBP1较CBP2对氧化剂H2O2、NaC1O敏感;CBP2较CBP1对木瓜蛋白酶敏感;2个组分对胰蛋白酶均敏感.     

丝素-壳聚糖合金膜固定化超氧化物歧化酶的研究

采用富含自由氨基的丝素-壳聚糖合金膜为载体，吸附固定从柞蚕蛹提取分离的超氧化物歧化酶(SOD)，研究并确定了固定化的最佳条件，分别为酶浓度38U／mL、pH6．3、温度4-8℃、时间15h．制得的固定化酶活力为89．1U／g载体，酶的活力回收达到35．9％．     

甘蔗渣纤维素固定化木瓜蛋白酶及其应用研究

匀浆状甘蔗渣纤维素用NaOH活化后，顺次经过高碘酸钠、尿素、甲醛处理，成为高反应性固定化酶载体，可用于木瓜黄蛋白酶的固定化，其酶蛋白的结合量与甲醛处理时间、酶固定时间、溶液酶浓度等有关，甲醛处理最适时间为14h，酶固定8h后，载体结合酶量趋向稳定；溶液酶最佳浓度范围为1－2．0mg/ml粗酶，固定化酶活力回收达34．5％，半衰期35天，固定化酶和溶液酶的Km值（底物酪蛋白，w/v,%)分别为0．12％和0．26％；固定化酶和溶液酶的最适PH分别为PH8．0和PH8．5，二者的最适温度均为60－70℃。固定化酶和溶液酶一样有底物抑制现象，固定化酶在6mol/L脲中处理6h活力趋向稳定，其活力为原有活力的46．75，用固定化酶处理啤酒，啤酒浊度下降了2－9．25倍，蛋白质含量下降了78．8％，冷藏120天，处理啤酒无冷混浊现象发生，同时啤酒原有风味和其它理化指标保持不变。     

3种化合物对萝卜CBPs溶菌酶活性的影响

溶菌酶是植物防御体系中的一部分,在植物防卫反应中有重要作用.分析了化合物对萝卜CBPs溶菌酶活性的影响,以期为研究其作用机制和在萝卜中的生理功能提供资料.本研究采用亲和层析法及CM-纤维素离子交换柱层析从萝卜中分离纯化得2个具溶菌酶活性的CBPs,并分析了GlcNAc等3种化合物对萝卜CBPs溶菌酶活性的影响.结果表明:GlcNAc和组氨酸在低浓度时对萝卜CBPs溶菌酶活性具有激活作用,在高浓度时具有抑制作用;组胺则显示为抑制作用.上述3种化合物均是萝卜CBPs溶菌酶活性的竞争性抑制剂.     

丝素—壳聚糖合金膜固定化SOD酶学性质研究

超氧化物歧化酶(SOD)是一种在生物体内广泛存在的金属酶,它以自由基O2-为底物催化与H+的反应生成H2O2和O2,H2O2再在过氧化氢酶、过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物酶等的作用下转变为H2O,从而对机体起保护作用,具有抗辐射、抗炎和抗衰老等功能;壳聚糖和丝素这两种高分子物质都可以作为固定化酶的载体,但单独使用效果不很理想.单纯丝素膜机械性能差,且当溶液pH大于其等电点时带负电,不利于与荷电负性酶结合.而壳聚糖膜中分子链间由于氢键作用强,游离氨基并不多.