不同浓度磷胁迫对大豆幼苗生长及根系DNA甲基化水平的影响

为明确不同浓度磷胁迫对大豆幼苗生长及基因组DNA甲基化水平的影响，采用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析大豆材料‘CP016’的幼苗在不同浓度磷胁迫下根系DNA甲基化水平和相关基因的表达量变化。结果表明:1)随着磷浓度的逐渐增加，大豆幼苗的株高、鲜重、根长和根表面积呈先升高后降低的趋势，无磷和高磷胁迫(1 000 μmol/L)均显著抑制大豆的生长，低磷胁迫(100 μmol/L)促进地上部生长，极低磷胁迫(10 μmol/L)促进根系生长；2)随着磷浓度的逐渐增加，大豆幼苗根系中的POD和CAT活性呈先降低后升高的趋势，SOD活性、淀粉和蔗糖含量呈先升高后降低的趋势；3)MSAP分析表明，随着磷浓度的增加，大豆幼苗根系DNA甲基化率和全甲基化率逐渐升高。具体来说，在无磷、正常供磷和高磷处理下，大豆幼苗根系的DNA甲基化率分别为43.04%、48.52%和51.05%；4)qRT-PCR分析结果表明，无磷胁迫下，调控大豆幼苗根系POD活性和淀粉合成相关基因以及甲基化酶基因DRM2的表达量显著升高；调控SOD活性和蔗糖合成相关基因以及去甲基化酶基因ROS1的表达量显著降低。本研究表明，无磷和高磷胁迫显著抑制大豆的生长，并使其抗氧化酶系统紊乱，淀粉和蔗糖含量降低，但适度的低磷胁迫可以促进大豆幼苗的生长。无磷和高磷胁迫分别降低和提高大豆幼苗根系的DNA甲基化水平。     

贮藏温度及时间对山豆根种子活力的影响

采用沙培法研究了山豆根种子在-80℃、-20℃、4℃及室温条件下贮藏1个月、3个月、6个月、9个月的发芽率、发芽势和发芽指数,并与随采随播种子的活力进行比较。结果表明随着贮藏时间的延长,山豆根种子的活力逐渐下降,山豆根更适宜随采随播。贮藏条件下,4℃更适合贮藏（6个月）,其次是-20℃（3个月）、-80℃（3个月）,室温贮藏最好不要超过1个月。     

罗汉果生长素响应因子SgA RF8基因的克隆及表达分析

基于转录组Unigene序列信息,结合RACE技术,克隆罗汉果生长素响应因子基因Sg ARF8的全长。采用同源克隆法获取罗汉果Sg ACTIN基因,以该基因为内参,通过实时荧光定量PCR检测Sg ARF8在罗汉果不同器官组织中的时空表达。结果表明:获得Sg ARF8基因c DNA全长序列3 266 bp,Gen Bank登录号KU949383,最长ORF为2 547 bp,编码848 aa的蛋白质,预期分子量94.42 k D,等电点5.67,该编码蛋白具有DBD、CTD和MR等转录因子ARF特征性结构域,其5'端和3'端区域比较保守;克隆得到罗汉果内参基因Actin基因部分序列,命名为Sg ACTIN,Gen Bank登录号为KU949382;实时荧光定量分析表明,罗汉果Sg ARF8在茎、叶、芽、雌蕊、雄蕊、幼果中普遍表达,并且在雌蕊和15 d幼果中表达量较高。可见Sg ARF8广泛参与罗汉果生长发育调节过程,尤其与雌蕊和幼果的器官形态建成密切相关,也暗示该基因在罗汉果性别调控和单性结实遗传改良中具有重要应用价值。     

贮藏温度及时间对山豆根种子活力的影响

采用沙培法研究了山豆根种子在-80 ℃、-20℃、4℃及室温条件下贮藏1个月、3个月、6个月、9个月的发芽率、发芽势和发芽指数,并与随采随播种子的活力进行比较.结果表明随着贮藏时时的延长,山豆根种子的活力逐渐下降,山豆根更适宜随采随播.贮藏条件下,4℃更适合聍藏(6个月),其次是-20℃(3个月)、-80℃(3个月),室温贮藏最好不要超过1个月.     

广西肿节风种质资源调查及质量评价

采用走访和实地调查相结合的方法,对广西大宗药材肿节风种质资源的地理分布及生境、生物学特性 群落特征和伴生植物等进行调查并按照叶中国药典曳2010 年版肿节风药材项下的质控标准对广西不同产地的肿节 风药材进行质量评价结果表明,广西肿节风种质资源丰富全区各地都有分布尤以海拔60~1 306 m 植被较好的 沟谷或近水的阴湿林下最为丰富,肿节风喜温暖湿润的阴湿环境对湿度要求较高耐旱性较差,适应肥沃疏松的各 种土壤,广西肿节风药材品质佳,质量好,有较好的开发利用价值。肿节风生境正不同程度地遭受人为破坏资源量 逐年减少,存在资源危机亟待保护。     

山豆根毛状根培养体系的建立与优化

为探索定向培养山豆根植物细胞及器官获取有效药用成分的新途径,为山豆根有效药用成分的大规模生产奠定基础,采用共培养法研究发根农杆菌R1601感染诱导山豆根无菌苗子叶产生毛状根,并在此基础上从不同培养液、不同蔗糖浓度和外源激素对毛状根生长的影响方面筛选山豆根毛状根生长的最佳培养液。结果表明:利用发根农杆菌R1601感染山豆根无菌苗子叶16min,在MS+AS 100μmol/L的固体培养基上培养可诱导产生毛状根,且诱导率最高,达66.67%;1/2 MS+IAA 0.5mg/L+5%蔗糖的培养液最有利于山豆根毛状根的生长。     

药用植物草珊瑚AFLP反应体系的建立

从草珊瑚(Sarcandra glabra)的幼嫩叶片中提取基因组DNA,建立草珊瑚AFLP反应体系,对AFLP反应体系中模板DNA的浓度、基因组DNA的双酶切时间、预扩增产物的稀释倍数和引物组合的筛选等关键因素进行摸索.优化的草珊瑚AFLP反应体系为模板DNA的用量20 ng/μL、酶切反应时间4h、预扩增产物稀释15倍,初步筛选出8对较为适合草珊瑚AFLP分析的引物组合.     

广西道地药材山豆根DNA提取方法的研究

[目的]寻找一种简便快速地提取高质量道地药材山豆根DNA的方法。[方法]采用改进的CTAB法。[结果]应用该法可有效地去除多糖等干扰物质;得到的DNA纯度高、完整性好,可以被限制性内切酶EcoRI和MseI完全酶切,经AFLP分析得到了清晰的多态性条带。[结论]该方法是一种适于山豆根叶片总DNA提取的较理想的快速途径,得到的DNA可以进一步用于分子生物学操作。