适于杨树功能基因组研究的T－DNA激活标签构建

杨树(Populus spp.)分布遍及北半球,具有广泛的经济价值和生态价值.由于杨树具有相对较小的基因组(约500 Mb)、紧凑的基因组结构(n=19)及较为成熟的遗传转化方法,使其成为木本植物研究的模式树种种[1～4].     

细枝木麻黄组织培养和转基因研究(英文)

[目的]对细枝木麻黄进行组织培养和转基因研究。[方法]以耐寒性细枝木麻黄为试验材料,探讨了愈伤组织诱导、不定芽分化、农杆菌介导转化3种条件对转化效率的影响。[结果]对细枝木麻黄不定芽诱导分化适宜的激素组合为DCR+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L;转基因抗生素选择压力为潮霉素,共培养时间3d;以初步建立的转基因体系利用农杆菌介导法获得94株转基因木麻黄,通过PCR检测,其中61株为PCR阳性植株。[结论]该研究为细枝木麻黄的组织培养和转基因研究奠定了基础。     

ptc-miR213的人工microRNA植物表达载体的 构建及遗传转化

ptc-miR213是在构建盐胁迫条件下青杨microRNA文库中发现的,预测其靶基因为MYB4、PP2C、蛋白激酶等,其中MYB家族与植物的耐盐性密切相关。为了探索ptc-miR213在植物盐碱胁迫应答方面的作用,实验构建了植物表达载体pCAM2300-ami213,经根癌农杆菌EHA105介导转化拟南芥,成功获得转基因植株。RT-PCR分析表明amiR213在转基因拟南芥中能够超量表达。本研究为分析ptc-miR213及其靶基因参与植物盐碱胁迫应答奠定了基础。     

麻竹叶片蛋白质双向电泳体系的建立

以麻竹花药培养再生植株叶片为材料,比较了改良酚抽法、三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和裂解液法3种不同方法对麻竹蛋白质双向电泳的影响,并对上样量、等电聚焦程序、平衡时间等进行了探索与优化.结果表明,用改良酚抽法分离麻竹叶片蛋白质、确定上样量为1 mg· IPG胶条-1、等电聚焦总聚焦功率为100 000 W、胶条两步平衡时间均设置为15 min、考马斯亮进行凝胶染色的实验体系可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,凝胶的蛋白斑点匹配率平均为85.57％,总蛋白斑点数的相对标准差为4.86％.本研究建立了一套适合麻竹叶片蛋白质组学分析的双向电泳实验体系,为进一步研究麻竹生长发育分子调控机制及其遗传改良奠定基础.     

林木功能基因组学及其研究策略

随着杨树等树木基因组测序的完成,林木育种进入了功能基因组学时代,林木功能基因组学研究面临的挑战是系统地对基因组中的所有预测基因进行注释和功能验证。林木功能基因组分析已经进入了高通量阶段,但要识别未知基因的确切功能,有必要了解每个基因在植物细胞所有基因活动网络中发挥的作用。因此,就必须了解各个基因在时间和空间上的表达模式。功能基因组学研究策略已经发展到能对这些成分细胞中基因的活性和浓度同时进行快速的测量。林木功能基因组学技术的最新研究进展能从全基因组进行功能分析,从而打开了林木未知基因功能研究的新途径。目前,广泛应用的林木功能基因组学研究策略有插入突变、FOX系统、蛋白质组学等。     

青杨双向电泳实验体系的建立

用改良丙酮沉淀法、三氯乙酸（TCA）-丙酮沉淀法和酚抽法抽提青杨Populuscathayana的蛋白质,分别获得了437,603和721个蛋白斑点,以酚抽法提取的分离纯化方法效果最佳,不仅能很好地提取蛋白,而且能有效去除样品中的盐分。通过比较,分析了双向电泳不同条件对电泳结果的影响,确立了300μg·IPG胶条^-1的最佳上样量、90000V·h的聚焦时间以及20min平衡时间的双向电泳条件。研究还比较了氯化钠胁迫前后双向电泳图谱差异,发现有46个蛋白点存在差异,其中10个下调,36个上调（4个新诱导表达）。     

麻竹花粉发育过程观察及其分期

以麻竹为材料,采用醋酸洋红、碘-碘化钾压片以及石蜡切片的观察方法对麻竹花粉发育全过程进行了研究,初步将这一过程划分为8个时期,即小孢子母细胞形成期、小孢子母细胞减数分裂期、小孢子早期、小孢子中期、小孢子晚期、二胞花粉早期、二胞花粉晚期和成熟花粉期,并描述了各个时期的基本特征。麻竹花粉发育过程基本正常,小孢子母细胞减数分裂为连续型,四分体主要为左右对称型,也有四面体形的,成熟的花粉为3-细胞型,具单一萌发孔。