RNA干扰技术及其应用

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默的现象。作为一种简单有效的影响基因表达的工具,RNA干扰已经被广泛应用于许多领域,同时也为基因功能的研究开辟了一条新途径。文章综述了RNA干扰的机制及其应用方面的最新进展。     

siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达

用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍.     

提取高质量茶树总RNA的方法研究

由于茶树富含多糖、多酚,从茶苗组织中尤其是从茶苗的根中提取高质量的RNA较为困难,试用了多种方法都未能获得高质量的RNA.为此,作者借鉴多年生的草本植物RNA提取方法-CTAB法,并在此基础上进行了改进,首次提取茶苗嫩根中的总RNA.电泳检测显示,该方法提取的总RNA 28S和18S条带清晰且28S较18S条带亮,紫外光谱分析显示A260/A280的比值为1.93.用于RT-PCR反应,成功克隆了492 bp的谷氨酰胺合成酶基因片段.说明用该方法提取的RNA纯度和完整性好.试用该方法从营养成分丰富的茶籽胚中提取总RNA,效果同样很好.     

改进的CTAB法提取中华芦荟叶总RNA

[目的]为分离中华芦荟次生代谢相关基因,构建成熟叶cDNA文库,探索从适合富含多糖和凝胶植物组织中提取高质量RNA的方法。[方法]以中华芦荟成熟叶为材料,采用改进的CTAB方法提取纯化芦荟叶总RNA。[结果]所提取的叶总RNAOD260/OD280值为1.88,电泳显示28 S1、8 S条带完整清晰,以此RNA为模板的RT-PCR结果显示目标特异条带。[结论]用该方法提取的RNA可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学实验。     

甘蓝型油菜籽粒RNA提取方法的探讨

用CTAB法、SDS法、上海华瞬植物叶RNA抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜花后40 d的籽粒RNA.用电泳法和A260/A280与A260/A280的比值比较提取RNA的质量.结果发现:用SDS法、上海华瞬植物叶RNA抽提试剂盒都没有成功提取RNA,只有CTAB法成功地提取出了完整的甘蓝型油菜籽粒RNA.用CTAB法提取的总RNA的A260/A230与A260/A280的值分别为2.06和1.94,说明采用该方法提取的RNA污染小,纯度较高,获得的RNA产量也较高.通过逆转录实验和基因片段的克隆也证明获得的RNA质量比较高,可以直接满足一般的分子实验.     

一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法

在药用植物中开展分子生物学研究时的常见困难是RNA提取困难,提取的RNA质量不能满足下一步试验要求。探索了一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法并对提取的RNA质量在随后的分子生物学中进行了检验。结果证实通过该方法提取的RNA纯度和完整性较好,完全可以满足后续的分子生物学实验要求,也可以作为其它药用植物RNA提取的参考方法。     

适宜西瓜mRNA差异显示分析的几种总RNA提取方法的比较

以西瓜花蕾为材料,初步建立了mRNA差异显示技术体系。利用改进的SDS/酚法、改进的异硫氰酸胍法和BIOZOL试剂提取法提取西瓜花蕾总RNA,比较RNA产率、纯度和电泳图谱等分析来确立适于西瓜花蕾RNA分离的方法。研究结果表明,改进的异硫氰酸胍法提取的RNA呈现28S rRNA,18S rRNA和5S rRNA 3条较清晰的条带,其A260/A280值可达1.944,具有很高的纯度。用异硫氰酸胍法提取的总RNA进行差异显示分析表明,可得到理想的扩增片段。     

丹尼斯凤梨叶片总RNA提取方法的比较

以丹尼斯凤梨(Guzmania‘Denise’)叶片为材料,利用Trizol试剂快速提取法、异硫氰酸胍法、苯酚法和CTAB法提取丹尼斯凤梨总RNA,通过RNA的产率、纯度、电泳图等分析来确立适用于丹尼斯凤梨总RNA分离的方法。结果表明,Trizol法提取的RNA具有28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA3条较清晰的条带,很少有降解,具有较高的纯度,其他3种方法获得的RNA纯度较低、降解严重,有较多小分子和盐存在,RNA无明显条带出现,而是以小分子RNA弥散状分布。     

百脉根总RNA提取方法的优化

[目的]为百脉根的分子生物学研究提供基础资料。[方法]以百脉根叶片为材料,比较异硫氰酸胍法、SDS-LiCl法及SDS-LiCl改进法提取总RNA的效果并探讨活性炭、抗坏血酸对RNA提取质量的影响。[结果]异硫氰酸胍法所提取的百脉根总RNA降解严重,盐类去除不充分,该方法不适合百脉根总RNA的提取;SDS-LiCl法提取的总RNA有一定程度降解,加入液体抗坏血酸会降低百脉根RNA的提取质量;SDS-LiCl改进法提取的总RNA较为完整,有较高的纯度,在研磨过程中加入固体抗坏血酸能够提高百脉根总RNA的提取质量。活性炭对百脉根总RNA的提取无影响。[结论]研磨时加入固体抗坏血酸的SDS-LiCl改进法能提取出高质量的百脉根总RNA。     

一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法

多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素.我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA.这种方法可以克服产率低和质量低的问题.RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520 μg到800 μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9.提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析（serial analysis of gene expression,SAGE）库的构建.