广东部分地区中小型猪场猪伪狂犬病野毒感染的血清学调查

采用阻断ELISA法,对广东省9个地区经猪伪狂犬基因缺失苗免疫的中小型猪场2005年-2006上半年送检的375份血清进行猪伪狂犬病野毒感染的血清学检测。结果表明,有9个地区猪场血清呈阳性,其中阳性血清174份,平均阳性率为46.4%,最高阳性率达65.0%,提示该地区中小型猪场有猪伪狂犬病野毒感染。     

赤羽病病毒核衣壳蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原，建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法，初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化，确定最佳抗原包被量为每孔1μg（100μL），样品稀释度为1：100，兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1：8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测，以中和试验为参照，经统计学处理，得出检测临界值分别为0．411和0．303，2种方法的符合率分别为72．7％（56／77）和91．4％（85／93）。试剂盒在37℃保存3d，对敏感性无明显影响。     

禽呼肠孤病毒P17蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其ELISA检测方法的建立

用设计合成的1对跨越禽呼肠孤病毒（ARV）P17非结构蛋白基因完整开放阅读框（ORF）的特异性引物，对ARVS1133株进行了RT-PCR扩增。扩增产物与pGEX-4T-1原核表达载体连接后，转化大肠杆菌BL21感受态细胞。经0．2mmol／LIPTG诱导，表达的融合蛋白分子质量为42.4ku，占茵体总蛋白的34％。表达产物P17蛋白经不同浓度尿素纯化后，纯度达到85％。Western-blotting显示，纯化的P17蛋白能与感染ARV的阳性血清反应，说明其具有抗原性。以此重组蛋白为包被抗原初步建立了用于鉴别检测ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的SPF鸡血清的ELISA。     

O型口蹄疫疫苗免疫牛抗体消长动态的LPB-ELISA检测

分别按一次免疫、首免后第15d加强免疫和首免后第60d加强免疫程序，对3组试验牛（每组牛20头）用O型口蹄疫疫苗进行了免疫。免疫后不同时间点用液相阻断ELISA（LPB-ELISA）测定了免疫牛O型口蹄疫抗体效价。结果，首免后第15d加强免疫牛和第60d加强免疫牛抗体水平较高，50％保护牛所占比例分别为56．3％和63．1％，完全受保护的牛所占比例分别为34．3％和29．5％。第60d加强免疫牛的保护率要高于第15d加强免疫牛和一次免疫牛的保护率。结果表明，首免后第60d加强免疫是最理想的免疫程序。     

磺胺二甲基嘧啶残留检测ELISA方法的研究

本实验对磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA反应的各种条件进行了筛选优化,建立了直接竞争ELISA检测方法,该法最小检出量为1.97ng/mL,检测范围5ng/mL～200ng/mL,样品添加回收率为73.20%～91.16%,批内变异系数<5.5%,批间变异系数<9%。与美国进口Max Signal试剂盒相比较,灵敏度为100%,特异性为96.0%,两者的符合率为98.3%。     

不同方法对牛舍气载魏氏梭菌型别的研究

分别采用ELISA、多重PCR方法对从一个犊牛舍分离到的魏氏梭菌进行型别研究，结果显示：ELISA检测结果为88％的菌种属于A型，3．4％为C型，8．6％是D型；而多重PCR结果均为A型。     

Effects of pyriproxyfen, a juvenile hormone analog, on development of the mealworm, Tenebrio molitor

Pyriproxyfen, an analog of the juvenile hormone (JH) in insects, has been evaluated in vivo and in vitro on an important stored product pest, the mealworm Tenebrio molitor. On newly ecdysed pupae, this insect growth regulator (IGR) was applied topically (at 0.10 and 0.20 μg/insect). Enzyme immunoassay measurements showed a decrease of the ecdysteroid titer in the hemolymph of treated specimens. In addition, the treatment induced an increase of the protein concentration in the hemolymph, however, there was no significant effect on the protein band pattern. Using in vitro pupal integument explant cultures, pyriproxyfen (at 1 and 10 μM in the medium) caused a significant inhibition of ecdysteroid amounts and of the thickness of new cuticle secreted. These new results are discussed in relation to the physiology of this IGR with a JH action.     

抗猪瘟免疫球蛋白在猪初乳中变化规律研究

以猪瘟弱毒疫苗免疫空怀母猪,待母猪分娩后,分别收集10d内的乳汁,以建立的间接ELISA法检测猪瘟IgA、IgG、IgM水平,并观察各种抗体动态变化规律。试验结果表明,猪初乳中的IgA、IgG、IgM抗体效价均在分娩当天达到最高值,随后迅速下降,7d后抗体水平与常乳基本一致(>0.05)。对照组母猪仅在分娩当天检测到较低的抗体水平。     

禽Ⅰ型副粘病毒各种禽源分离株的免疫原性

分别制备了源于鸡、鹅、鸽、鹌鹑、孔雀、画眉鸟、珍珠鸡的禽型副粘病毒(APMV-1)7个强毒分离毒株和商品弱毒疫苗株克隆30(C30)的灭活油乳剂苗,并用这8种灭活油乳剂苗和C30株的活疫苗分别在鸡、鹌鹑、鹅和鸽进行了免疫及交叉攻毒保护试验。免疫后(PI)分别测定试验禽血清的新城疫病毒(NDV)血凝抑制(HI)抗体的滴度,并于PI 5周用强毒株进行攻毒。结果表明,鸽的HI抗体几何平均滴度(MAT)为9.00~10.0 log2,鸡的为7.13~7.63 log2,鹌鹑的为5.00~5.13 log2,鹅对灭活油乳剂苗的为5.63~6.38 log2、而对C30株活疫苗的仅为3.38log2;除了C30株活疫苗免疫鹅提供的保护率比较低(20%)外,8种油乳剂苗都能对同源或者异源强毒株的攻毒提供比较高的保护率(66.75%~100%)。研究结果表明,经典疫苗株C30与近年来从各种不同禽类分离的致病性APMV-1野毒株之间、不同禽源分离株之间的抗原性,以及各种不同禽源分离株的之间的免疫原性差异均不大。     

抗猪传染性胃肠炎M蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定

以纯化的猪传染性胃肠炎病毒重组M蛋白免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行融合、筛选,最终获得3株抗TGEVM蛋白的杂交瘤细胞系1B3、3C2、4A5,染色体平均记数为89对、92对、90对,间接ELISA检测1B3、3C2、4A5细胞培养上清的效价分别为1/4000、1/1000、1/4000,腹水效价分别为2×10~4、2×10~5、2×10~5。通过间接ELISA做病原检测,这3株单抗不与猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和猪轮状病毒发生交叉反应,而与传染性胃肠炎病毒显示良好的特异性。用制备的单抗通过间接免疫荧光做病原检测,发现染色后TGEV感染的细胞培养物在胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光,结果表明,所制备的抗重组TGEVM蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为TGEV准确快速的病原诊断和TGEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。