猪传染性胸膜肺炎放线杆菌溶血素的研究进展

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种呼吸道疾病。根据荚膜多糖和脂多糖抗原表位不同,将胸膜肺炎放线杆菌分为15个血清型,不同血清型的菌株毒力大小不同,致病性也有强弱之别。该菌的致病性与多种毒力因子密切相关,而溶血素是决定该病原菌致病性强弱的关键因素。本文主要就其溶血素的研究进展作综述。     

S100A12在胸膜肺炎放线杆菌诱导猪肺泡巨噬细胞炎性细胞因子表达及吞噬中的作用

试验旨在探究S100A12在胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）诱导猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophages，PAM）炎性细胞因子表达及吞噬中的作用。PAM细胞接种APP菌株后，用实时荧光定量PCR检测感染后不同时间点炎性细胞因子和S100A12的mRNA表达水平；构建S100A12重组蛋白表达载体并进行重组蛋白的表达纯化，用MTT法检测其对PAM的细胞毒性，实时荧光定量PCR检测不同浓度（0、5、50和500 ng/mL） S100A12重组蛋白对PAM炎性细胞因子mRNA表达水平的影响；构建S100A12干扰质粒，用Western blotting、实时荧光定量PCR及流式细胞术检测其干扰效率及其对APP感染PAM后炎性细胞因子mRNA表达水平和细胞凋亡的影响；用平板计数法检测S100A12表达对APP的黏附侵袭及其在PAM细胞内存活的影响。结果表明，APP感染促进PAM中IL-6、IL-8、IL-18、IL-1β和TNF-α等炎性细胞因子表达的同时也促进S100A12的表达，且该表达随APP感染剂量增大及时间的延长均显著或极显著增加（P<0.05；P<0.01）。5、50和500 ng/mL重组蛋白S100A12对PAM均没有毒性。5和50 ng/mL的重组蛋白S100A12均可显著促进PAM中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β、IL-21和IL-5等炎性细胞因子的表达（P<0.05），而高浓度的S100A12重组蛋白则对上述炎性细胞因子表达无影响（P>0.05）。干扰质粒可成功阻断S100A12蛋白的表达，与转染shNC的对照组相比，在APP诱导下转染shS100A12干扰质粒的PAM中细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和IL-5的转录水平显著或极显著降低，且细胞凋亡率也显著或极显著增加（P<0.05；P<0.01）。进一步研究发现，干扰PAM中S100A12蛋白的表达可显著增强APP对PAM的黏附侵袭能力及其在PAM内的存活能力（P<0.05），相反，体外添加S100A12重组蛋白则显著抑制APP对PAM细胞的黏附侵袭及其在PAM内的存活（P<0.05）。以上研究表明，S100A12具有增强APP感染后PAM炎性细胞因子的表达、抑制APP诱导的PAM凋亡和降低APP对PAM的黏附侵袭及其在PAM内存活的作用，为进一步揭示APP感染过程中S100A12对PAM调控作用及机制奠定了基础。     

IL-17介导山羊传染性胸膜肺炎小鼠模型肺部炎症反应研究

为阐明IL-17等相关炎性因子在山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumoniae,CCPP)中的作用,将20只6周龄~8周龄SPF雌性Balb/c小鼠随机分成试验组和对照组,每组10只,建立CCPP小鼠模型,按时间点处死小鼠后采集血液和肺组织,进行组织病理学分析和肺部山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)载量检测鉴定模型。应用real-time PCR检测肺部IL-17及其相关细胞因子、趋化因子及其受体的mRNA水平,应用ELISA检测血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平,应用流式细胞术检测肺组织中中性粒细胞和巨噬细胞数量变化。结果显示,试验组小鼠精神状态不佳,肺部病理损伤严重,Mccp载量为5.9×10^4 copies/μL,与对照组相比有极显著差异(P<0.001);与对照组小鼠相比,试验组小鼠肺组织IL-17相关炎性因子mRNA表达升高,血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平显著升高(P<0.001,P<0.01),肺部中性粒细胞和巨噬细胞数量极显著增加(P<0.01,P<0.001)。说明成功构建了CCPP小鼠模型,在Mccp诱导小鼠肺部炎症早期,IL-17参与肺部炎症反应。     

Emulsifier content and side effects of oil-based adjuvant vaccine in swine

Side effects caused by the excessive emulsifier in oil-based adjuvant vaccine were examined practically in swine using one oil-in-water type adjuvant vaccine against swine pleuropneumonia. The vaccine was prepared from cell-free-antigen of Actinobacillus pleuropneumoniae, liquid paraffin, and several polyoxyethylenesorbitan and sorbitan oleates. Based on findings about safety in mice and emulsion stability, 2 vaccines containing either 11.25% or 6.25% emulsifier content were injected intramuscularly twice in swine, as the highest and lowest limits, respectively, within the practical range. All pigs showed temporary fever and malaise with anorexia for several days after each injection. The fever of the higher emulsifier content group took significantly longer to recover than the lower. Malaise also showed a similar tendency. On the other hand, antibody response was sufficiently induced with no significant difference between the 2 groups. Lowering the emulsifier content is a very simple but effective solution for mitigation of side effects without the reduction of adjuvanticity. For safe and high-quality oil-based adjuvant vaccines, not only antigen and base-oil, but emulsifier content must be optimized.     

锦州地区猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定

[目的]调查锦州猪传染胸膜肺炎的流行情况。[方法]从锦州部分发病猪场采集病料5份,通过细菌的分离培养、生化试验、卫星现象观察,溶血试验、CAMP试验、药敏试验和动物接种试验对致病菌进行分离与鉴定。[结果]该病原菌为革兰氏阴性短小杆菌,无芽孢,具有多形性。分离到5株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,均有卫星现象和溶血现象。CAMP试验结果表明,金黄色葡萄球菌可增强其溶血圈。5株分离菌对头孢拉定、先锋V、氟哌酸高度敏感,而对阿莫西林、链霉素、青霉素、金霉素有耐药性。动物接种试验表明该致病菌对家兔具有较高的致病力。[结论]该研究可为猪传染性胸膜肺炎的临床治疗提供依据。     

The genetic organization of the capsular polysaccharide biosynthesis region of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 15

Nucleotide sequence determination and analysis of the cps gene involved in the capsular polysaccharide biosynthesis of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 15 revealed the presence of three open reading frames, designated as cps15ABC genes. At the protein level, Cps15A and Cps15B showed considerably high homology to CpsA (67.0 to 68.7%) and CpsB (31.7 to 36.8%), respectively, of A. pleuropneumoniae serotypes 1, 4 and 12, revealing the common genetic organization of the cps among serotypes 1, 4, 12 and 15. However, Cps15C showed no homology to any proteins of A. pleuropneumoniae serotypes, indicating that cps15C may be specific to serotype 15. This study will provide the basic molecular knowledge necessary for the development of diagnostics and a vaccine for A. pleuropneumoniae serotype 15.     

胸膜肺炎放线杆菌对四环素类抗生素的耐药分析及相关基因检测

四环素类药物是在兽医临床中常用的一类抗生素,为了解胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)对四环素类抗生素的耐药情况,本研究对从临床分离鉴定的85株APP进行了四环素类抗生素临床耐药情况和相关基因的分析和检测。应用药敏纸片法进行药敏试验,结果:APP对四环素的耐药率较高为76.5%,其次为金霉素54.1%、美他环素48.2%、多西环素45.9%、土霉素28.2%、米诺霉素25.9%、替加环素22.3%。采用PCR方法对四环素类10种耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG、tetH、tet1、tetL1和tetL2进行检测,结果:tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG、tetH、tet1、tetL2、tetL1耐药基因的扩增阳性率分别为78.8%、41.2%、15.3%、8.2%、21.2%、15.3%、43.5%、24.7%和30.6%,而tetL1扩增则全部阴性,未检出其耐药基因。本研究结果为四环素类抗生素在猪传染性胸膜肺炎临床上的应用和新药研发提供了一定的理论依据。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌江西株的分离鉴定及PCR诊断

从江西南昌地区一些猪场的疑似猪传染性胸膜肺炎放线杆菌典型病例中,采集病猪的病变组织,经细菌分离得到3个分离菌株JXAV-AIII0611、JXAV-AVII0611、JXAV-AX0611,经涂片染色镜检、培养性状观察、生化鉴定以及药敏试验证实该致病菌为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)。同时利用APP的oml基因设计引物,通过PCR成功扩增出预期的基因片段,为快速诊断该病打下了基础。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定

从江西省猪场病死猪肺脏中分离到三株胸膜肺炎放线杆菌。本试验对分离菌株的理化特性进行了测定，并用分离菌株制备了灭活疫苗，有效控制了菌株分离场的猪传染性接触性胸膜肺炎。     

猪接触传染性胸膜肺炎的诊治

采用冰冻切片,H.E染色,支气管分泌物涂片,Gram染色,对临床自然发病猪的支气管分泌物、肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结进行了细菌学和组织病理学观察。结果表明:在支气管分泌物涂片中含有大量呈革兰氏阴性的胸膜肺炎放线杆菌;肝脏淤血,肺组织坏死、出血、显著纤维化及嗜中性粒细胞和巨噬细胞浸润;脾脏呈坏死性脾炎变化,淋巴结呈出血性淋巴结炎变化。根据细菌学检查和组织病理学观察结果诊断为猪接触传染性胸膜肺炎,同时筛选出抗菌王为临床治疗该病的首选药物。