湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达谱分析

卵泡颗粒细胞对卵母细胞的营养支持、保护以及卵泡生长发育、成熟、闭锁、维持黄体功能等起着至关重要的作用。为研究湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达及其信号网络,提取湖羊黄体期卵泡颗粒细胞RNA,采用Illumina测序技术进行测序,并结合GO分析和KEGG通路分析对基因功能分类、参与的生物过程及信号网络进行了研究。试验共获得了17 627个可匹配基因的表达情况,发现了多个与繁殖、消化吸收及代谢相关基因的高表达,如CYP19A1、IL1A、IL1B、UCP2、STAR等基因。经过GO分析和KEGG通路分析,15 278个基因分别注释到三大类60个功能组,在biological process这一大类中发现了与繁殖、发育、代谢、调节和免疫等相关的功能组,有6 361个基因注释到了312个KEGG通路,发现了与生殖生物学、消化吸收、代谢等过程相关的信号通路,并对相关功能组和通路进行了分析。本试验揭示了湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达特点及其参与的信号通路,为深入研究绵羊卵泡发育的调控机制及湖羊高繁性状关键基因的挖掘提供了参考。     

VEGF对绵羊卵泡颗粒细胞FSHR、E2R表达的影响

血管内皮生长因子(VEGF)可以促进颗粒细胞的增殖,但是否影响同样分布于颗粒细胞上的FSHR、E2R表达效果尚属未知.因此,通过Western blotting和荧光定量PCR分别对添加0、5、10、15、20、25 μg/L VEGF卵泡颗粒细胞中FSHR、E2R表达量及FSHR mRNA、E2R mRNA表达量进行检测.Western blotting蛋白检测结果表明,空白对照组和各个不同质量浓度VEGF处理组的颗粒细胞上均有FSHR和E2R蛋白表达,FSHR相对分子质量为75 000,E2R相对分子质量为56 000；荧光定量PCR检测结果表明,添加VEGF的各个处理组中FSHR mR-NA、E2R mRNA表达量均显著高于对照组(P＜0.05),各处理组间的FSHR mRNA之间差异不显著(P＞0.05),而VEGF添加量20、25 μg/L组的E2R mRNA表达量显著高于其他3个处理组(P＜0.05),并且这2个组间则差异不显著(P＞0.05),其余3个处理组间亦差异不显著(P＞0.05).     

CDK5在蛋鸡卵巢中的表达研究

本实验旨在研究细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)基因在蛋鸡卵巢中的作用。以80、180日龄和380日龄的海兰褐商品蛋鸡为实验材料,采用qRT-PCR、免疫组织化学和Western Blotting法研究CDK5在蛋鸡卵巢中mRNA和蛋白质的表达。结果表明:80日龄鸡卵巢中CDK5 mRNA相对基因表达量高于180日龄1.93倍;180日龄鸡卵巢中CDK5 mRNA相对基因表达量高于380日龄2.58倍。CDK5在鸡卵巢各发育阶段卵泡颗粒细胞和基质中呈阳性着色。光密度值分析显示,CDK5蛋白在80日龄鸡卵巢的卵泡及基质中的平均光密度值较180日龄高,且表达差异显著(P<0.05);在180日龄鸡卵巢的卵泡及基质中的平均光密度值较380日龄高,且表达差异显著(P<0.05)。在各发育阶段的鸡卵巢中均有CDK5的表达,可能参与蛋鸡卵巢发育及其生理活动。     

镉诱导小鼠卵巢颗粒细胞凋亡时MDA含量及SOD活性变化

镉（Cadium，Cd）是一种有色重金属元素，是一种半衰期很长（20年以上）的多器官、多系统毒物，于1817年被Stromeyer发现。镉对雌性生殖系统也具有明显的毒性作用，镉可直接作用于卵巢，引起卵巢积液、出血、萎缩等病理改变，使卵母细胞损害，成熟卵泡减少或空泡变、闭锁卵泡增多，干扰排卵和受精过程，引起暂时性不育；还可以抑制卵巢颗粒和／或黄体细胞类固醇生物合成，还可能对雌激素受体、孕酮受体及基因表达产生影响。镉还可以激活应激蛋白酶，使细胞内Ca^2＋增加，原癌基因c-myc、c—fos、C—jun表达增强；镉还可以引起DNA单链断裂，并损害DNA修复酶系统，诱导多种细胞凋亡。因此，WHO确定镉为优先研究的食品污染物，联合国环境规划署提出12种具有全球性意义的危险化学物质，镉被列为首位。但镉对卵巢颗粒细胞（GC）的体内毒性研究国内外罕见报道，本研究探讨了氧自由基在镉诱导卵巢颗粒细胞凋亡过程中所起到的作用。     

玉米赤霉烯酮对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Fas及FasL表达的影响

为了研究玉米赤霉烯酮(ZEA)对大鼠卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白表达的影响。将36只8周龄雌性SD大鼠随机分为试验组和对照组,处理组腹腔注射5mg/kg ZEA玉米油溶液,对照组注射等剂量玉米油溶液。2组在注射后6、12、18、24、36、48h各处死3只,取出卵巢组织,4%多聚甲醛固定,免疫组化方法检测不同时间卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白的表达情况。结果显示:试验组卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),且随着时间的推进呈现动态变化。试验组Fas在各时间点表达量均显著高于对照组,且在18h时表达量最高,之后逐渐下降;试验组FasL表达量显著升高,在18和24h表达量显著上调。ZEA诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡过程中,可能激活Fas和FasL相关的死亡受体信号通路。     

鸡卵泡选择及分子调控作用机制研究进展

鸡卵泡选择能否有序进行是直接影响等级卵泡数量以及产蛋持续性的重要因素。本文主要综述了家禽卵泡选择发育过程及其影响因素，并提炼阐述卵泡选择过程中颗粒细胞的作用，以及各信号通路之间的串扰调控功能，丰富禽类繁殖调控基础理论，为鸡的繁殖调控研究提供参考价值。     

TGFβ2和PPP3CA基因在黔北麻羊性腺轴组织表达及对卵巢颗粒细胞的调控研究

旨在对转录组测序中单羔组对多羔组TGFβ2和PPP3CA基因的上、下调结果进行验证，并探究黔北麻羊TGFβ2和PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞的调控机制。本研究以单、多羔黔北麻羊母羊为试验对象。通过RT-qPCR技术检测TGFβ2与PPP3CA基因在单、多羔黔北麻羊性腺轴中的表达水平；构建目的基因真核表达载体。培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞，并利用脂质体转染法将pEGFP-N3-TGFβ2、pEGFP-N3-PPP3CA重组质粒导入卵巢颗粒细胞，检测培养基中雌二醇（E2）、孕酮（P4）的浓度。利用CCK-8和Annexin V-FITC法检测TGFβ2、PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。随后，利用RT-qPCR从细胞水平检测超表达TGFβ2、PPP3CA基因对TGFβ2、PPP3CA、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因表达的影响。RT-qPCR结果表明，TGFβ2与PPP3CA基因在被检测的组织中均有表达，且在单羔组中的表达量普遍高于多羔组；免疫荧光法证实，所培养的细胞为黔北麻羊卵巢颗粒细胞；TGFβ2与PPP3CA基因真核表达质粒导入细胞后，在极显著提高TGFβ2与PPP3CA基因表达的同时，能够极显著地抑制卵巢颗粒细胞中FSHR、GnRHR、BMP4、TIMP3基因的表达（P<0.01）。细胞增殖与凋亡结果显示，TGFβ2与PPP3CA基因能够促进颗粒细胞凋亡，抑制其增殖。酶联免疫吸附试验结果表明，TGFβ2与PPP3CA基因能够显著促进E2的分泌，但对P4的分泌无显著影响。本研究成功构建了TGFβ2、PPP3CA基因真核表达载体，荧光定量结果表明，超表达TGFβ2、PPP3CA基因抑制了繁殖相关基因的表达，提示TGFβ2、PPP3CA基因对山羊繁殖相关基因表达有一定的影响。为进一步研究TGFβ2、PPP3CA基因对黔北麻羊繁殖力的影响提供基础数据。     

Sirt1基因在卵巢颗粒细胞应激反应中的研究进展

卵泡颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)是卵巢的主要功能细胞,是卵泡内主要的体细胞成分,其增殖与分化直接影响着卵泡的发育、排卵、黄体形成等卵巢功能。Sirt1(Sirtuin 1,silent mating type information regulation 2 homolog 1)基因在颗粒细胞中有很高的表达水平。研究证实,在细胞中Sirt1通过调节不同的信号通路来帮助细胞应对外界的不良刺激,比如炎症、氧化应激和热应激等。本文介绍了Sirt1基因在卵巢颗粒细胞应激反应中的研究进展。     

SMAD7对山羊卵泡颗粒细胞增殖、凋亡的影响

旨在探究SMAD7对山羊卵泡颗粒细胞增殖和凋亡的影响。本试验收集3~4月龄大足黑山羊母羊的卵泡颗粒细胞,通过过表达或siRNA干扰、ELISA、qRT-PCR、Western blot及流式细胞术等技术与方法探究SMAD7对颗粒细胞增殖、凋亡及类固醇激素分泌的影响。结果发现,SMAD7过表达显著下调颗粒细胞增殖活力并促进细胞凋亡,抑制PCNA表达（P<0.05）,下调BCL2/BAX的比值（P<0.01）;同时,SMAD7干扰显著上调颗粒细胞增殖活力,显著上调PCNA表达（P<0.05）与BCL2/BAX表达量比值（P<0.05）。SMAD7过表达极显著上调颗粒细胞的孕酮分泌,下调雌二醇表达水平（P<0.01）;同时SMAD7干扰极显著下调孕酮分泌,上调雌二醇分泌（P<0.01）。进一步研究发现,SMAD7过表达显著抑制SMAD2、SMAD3的mRNA和蛋白表达（P<0.05）;SMAD7干扰则显著促进SMAD2、SMAD3的mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结果表明,SMAD7抑制山羊卵泡颗粒细胞的增殖和雌二醇分泌,促进凋亡和孕酮的合成,并且抑制SMAD2、SMAD3的表达,进而调节卵泡的发育与闭锁。     

高温诱导蛋鸡氧化损伤及对卵泡发育的影响

【目的】研究高温诱导蛋鸡氧化损伤及对卵泡发育的影响,探讨环境高温抑制蛋鸡卵泡发育、降低产蛋量的机制。【方法】试验分两部分进行：试验一,将180只27周龄的海兰褐蛋鸡随机分为3个处理组,分别饲养于人工环境控制舱内,3个处理组分别为常温组（23℃,饲喂基础日粮）、日循环高温组（28—35—28℃,饲喂基础日粮）和高温补充VE组（28—35—28℃,饲喂基础日粮+250 IU•kg-1 VE）,试验期14 d;试验二,分离蛋鸡F1和F2卵泡颗粒层并制备颗粒细胞悬浮液,将颗粒细胞分别在39或44℃下培养。【结果】试验一结果显示,日循环高温显著抑制蛋鸡卵泡发育,表现为产蛋数量下降（P＜0.05）、卵巢重量降低（P＜0.05）、大卵泡数量减少（P＜0.05）,同时颗粒细胞层细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（P450scc）mRNA的表达量以及孕酮（P4）分泌量均显著（P＜0.05）减少;日循环高温还诱导蛋鸡氧化损伤,表现为蛋鸡血浆、肝脏和卵黄中丙二醛（MDA）水平上升（P＜0.05）;高温环境下补充250 IU•kg-1 VE,显著降低蛋鸡血浆、肝脏和卵黄中MDA水平（P＜0.05）,同时显著缓解高温对卵泡发育的抑制（P＜0.05）。试验二结果显示,提高培养温度可显著增加颗粒细胞中活性氧（ROS）的产生量（P＜0.05）,同时抑制颗粒细胞的增殖活性（P＜0.05）;培养液中添加VE预处理24 h可显著缓解高温的影响,表现为细胞ROS降低（P＜0.05）,细胞增殖活性增加（P＜0.05）。【结论】高温增加蛋鸡颗粒细胞ROS的产生量,诱导蛋鸡机体（肝脏,血浆和卵黄）氧化损伤,同时影响颗粒细胞增殖及分泌孕酮的能力,抑制蛋鸡卵泡发育;补充VE可以缓解高温诱导的蛋鸡氧化损伤,并缓解高温对卵泡发育的抑制。表明高温抑制蛋鸡卵泡发育与诱导蛋鸡氧化损伤有关。