氯前列烯醇对鸡等级前卵泡颗粒细胞增殖的促进作用

探讨了前列腺素PGF2α类似物氯前列烯醇（Cloprostenol,CLO）对鸡等级前小黄卵泡颗粒细胞增殖的作用及其信号转导途径。颗粒细胞经16 h预培养后用CLO处理24 h,测定细胞的增殖情况。结果显示：0.1～10μg/L的CLO促进了颗粒细胞的增殖,10μg/L时刺激效果最为明显。蛋白激酶A（PKA）激活后颗粒细胞数量增加,PKA抑制剂H89抑制了CLO的促增殖作用。PKC的激活或抑制对CLO的促增殖作用无显著影响。这表明,CLO可通过PKA途径促进鸡等级前小黄卵泡颗粒细胞的增殖。     

成熟液和时间对绵羊体外孤雌胚发育的影响

颗粒细胞在卵母细胞体外成熟和体外受精进程中具有重要的作用,能显著提高卵母细胞体外成熟和体外受精率;但也有研究发现,颗粒细胞存在与否并不影响卵母细胞体外成熟和体外受精率,甚至还可显著降低其体外成熟率和体外受精率.     

miR-18a通过靶向结合CTGF调控猪颗粒细胞凋亡

为探究miR-18a对猪卵巢颗粒细胞凋亡的调控作用,利用生物信息学分析、荧光素酶活性检测和体外培养颗粒细胞试验验证miR-18a对CTGF的靶向作用及其在猪颗粒细胞中对CTGF基因表达的影响,并通过流式细胞技术检测其对猪卵巢颗粒细胞凋亡的调控作用。生物信息学分析结果表明,CTGF是miR-18a的潜在靶基因,荧光素酶活性检测进一步验证了miR-18a与CTGF的结合。在培养的颗粒细胞中转染miR-18a模拟物后,qRT-PCR和Western blot结果显示CTGF的mRNA和蛋白水平均显著降低,流式细胞技术检测表明miR-18a显著促进颗粒细胞的凋亡。而转染miR-18a抑制剂后,猪颗粒细胞的凋亡率显著降低,共转染miR-18a抑制剂和CTGF的干扰RNA后,颗粒细胞的凋亡率呈现回升。试验结果表明miR-18a通过靶向结合CTGF基因调控猪颗粒细胞的凋亡。     

遮光诱导的氧化应激对蛋鸡卵泡发育的影响

为探究遮光处理导致家禽氧化损伤及繁殖障碍的机制,并阐明遮光调节卵泡发育的机理,本研究将30只体重及产蛋率相同的产蛋鸡随机分为遮光组、正常光照组和遮光+复合维生素组,遮光组使用遮光布覆盖鸡笼,将鸡笼内光强度降至零,而不影响通风和食物摄入;正常光照组未做其他处理,其光照程序为16 h光照:8 h黑暗;遮光+复合维生素组用遮...     

鸡卵泡颗粒细胞转染Bcl-2基因对IGF-1分泌的影响

选用正在产蛋的罗曼鸡,取体积排序第一（F1）和第四（F4）的卵泡,分离颗粒细胞层细胞。采用脂质体介导方法将来源于F1和F4卵泡的颗粒细胞用PBS（对照）、空载体或Bcl-2重组质粒处理,然后在不完全无血清培养基（不添加胰岛素）中培养48和96h,用流式细胞术检测Bcl-2蛋白表达,用放射免疫测定技术检测IGF-1的含量。结果发现,转染Bcl-2重组质粒组的Bcl-2蛋白表达量和IGF-1分泌量均多于其他各组。分析来源于不同卵泡期卵泡颗粒细胞的分泌功能,发现随时间的增加F1细胞IGF-1分泌量减少,而F4的IGF-1分泌量基本不变。结果表明,在鸡卵泡颗粒细胞中转染的Bcl-2基因具有表达功能,表达的蛋白具有调节鸡卵泡颗粒细胞分泌IGF-1的作用;鸡卵泡颗粒细胞IGF-1的分泌还受鸡卵泡的大小和颗粒细胞在体外培养时间的影响。     

海兰褐壳蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞全长转录组测序分析

【目的】获取鸡小黄卵泡颗粒细胞(granulosa cells of small yellow follicle, SYFG)全长转录组数据,为深入挖掘鸡卵泡发育内在分子调控信息提供参考。【方法】采用PacBio高通量测序平台,对海兰褐壳蛋鸡SYFG进行测序、过滤、聚类和矫正原始数据,获取全长转录本序列。通过生物信息学软件对全长转录本数据进行功能注释、转录因子注释、编码区序列(coding sequence, CDS)预测、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)预测筛选、简单重复序列(simple sequence repeats, SSR)检测及可变剪接(alternative splicing, AS)和选择性多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation, APA)分析。【结果】通过测序共获得52 311条海兰褐壳蛋鸡SYFG全长转录本,长度主要分布于1～3 500 bp。通过与GO、KEGG、COG、NR、Swiss-Prot和Pfam数据库比对,对转录本序列进行注释,其中GO数据库注释了26 525条转录本,KEGG数据...     

接种密度对牛颗粒细胞形态及相关基因表达的影响

牛卵巢颗粒细胞是雌激素(Estrogen,E₂)合成的主要来源,具有E₂活性的牛颗粒细胞体外模型的建立是研究E₂合成与分泌过程中潜在调控机制的重要工具,该细胞模型的建立可为E₂合成分子调控机制及牛卵巢卵泡发育机制的研究提供理论与技术支持。细胞接种密度是颗粒细胞体外培养模型的关键因素,高密度可引起细胞生理及分子的显著变化。研究通过不同接种密度下的形态变化和基因表达筛选牛颗粒细胞体外培养最优接种密度,采用长期无血清法培养牛原代颗粒细胞,培养液中添加FSH及IGF-1以诱导E₂的合成。培养7 d后,采集6孔板中高(3.0×10⁶个细胞/孔)、中(2.0×10⁶个细胞/孔)、低(1.0×10⁶个细胞/孔)3种不同接种密度的细胞图像进行观测,并利用qRT-PCR技术检测3种不同接种密度中相关基因的表达情况。结果表明,低密度(1.0×10⁶个细胞/孔)接种细胞呈现成纤维细胞样外观,细胞无聚集倾向;中密度...     

猪卵泡颗粒细胞总RNA提取方法改进的探讨

RNA是一类非常有用的生物大分子,在分子生物学研究领域正发挥越来越重要的作用。本文介绍一种改进过的从动物组织提取总RNA的方法,实践证明,该方法重复性好,实用性强。用此方法提取的猪卵泡颗粒细胞总RNA,无DNA污染物等问题,完全满足分子克隆、基因表达等分子生物学研究的需要。     

颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响

为优化颗粒细胞单层共培养体系,研究了不同类型、不同种属的颗粒细胞单层及不同时间更换培养单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响.结果表明.就卵裂率、囊胚率和囊胚孵出率而言.壁颗粒细胞单层组与丘颗粒细胞单层组之间无显著差异(P>0.05);来自黄牛、猪和小鼠的颗粒细胞单层在支持黄牛孤雌胚胎体外发育方面无显著差异(P>0.05):就囊胚率而言,共培养的第3天和第6天两次更换单层分别与共培养的第4天更换单层和始终不更换单层的对照组之间无显著差异(P>0.05),但第4天更换单层与对照组之间有显著差异(P<0.05).所以.不同类型和不同种属的颗粒细胞单层都能很好地支持黄牛孤雌胚胎的体外发育.在胚胎的体外发育过程中更换培养单层可以明显提高胚胎的囊胚率和囊胚孵出率,并且在共培养的第4天更换培养单层可以得到较高的囊胚率.