Ontogeny of the stomach in yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco): detection and quantifictation of pepsinogen and H+/K+‐ATPase gene expression

Yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco) is an important commercial species with high aquaculture potential in China. To better understand the process of digestive functioning of gastric gland development during the larval from 1 dph (day post‐hatching) to 30 dph, real‐time PCR was used to detect and quantify the pepsinogen and H⁺/K⁺‐ATPase gene expression in P. fulvidraco. These data were also compared with the adult situation. The results showed that the expression of pepsinogen and H⁺/K⁺‐ATPase genes in P. fulvidraco larvae both started at 1 dph, though the expression level was very low until 3 dph. The quantification of pepsinogen gene expression increased significantly from 4 to 8 dph, increased fluctuantly from 8 to 23 dph and rose sharply from 23 to 30 dph. In comparison with adult fish, there were no significant differences with larvae at 5 and 23 dph. However, data of 10 and 30 dph larvae were obviously higher than those of adult group. H⁺/K⁺‐ATPase gene expression increased linearly from 1 to 30 dph. However, it was significantly lower than that of adult. The results show that P. fulvidraco larvae have an earlier functional stomach, though the function of the stomach is still not perfect. There is a gradual acidification environment within the stomach during the P. fulvidraco larvae development. Based on these results, we suggest that the weaning time for P. fulvidraco larvae would be much better after 23 dph.     

猪蛔虫感染期幼虫抑制消减cDNA文库的构建

为筛选与线虫感染性相关的基因,本研究以猪蛔虫为对象,构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库,为研究线虫期特异性发育的分子机制奠定基础。分别提取感染期幼虫和其它各期幼虫及成虫的总RNA,纯化mRNA后,采用Clontech公司PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库,并采用Southern斑点杂交进行消减效率的检测。随机从文库中抽取45个克隆进行测序及在线BLAST分析。试验结果表明,感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库具有较强的特异性;在得到的41个表达序列标签(ESTs)中,有40个ESTs与已报道的基因有较高的相似性,主要代表猪蛔虫第三期幼虫基因和成虫头部基因,有1个cDNA片段可能代表新基因。猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究幼虫发育差异表达基因的功能奠定了基础。     

基于DNA条形码技术的泰国番石榴中实蝇幼虫分子鉴定研究

实蝇是世界重要的检疫性害虫之一,对果蔬生产及其国际贸易具有很大的影响。而以线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚单位I(mtDNACOI)基因的部分序列作为实蝇的DNA条形码能减少对实蝇成虫形态特征的依赖,可检测其任何虫态的样品,有助于实蝇样品的快速鉴定。本研究采用DNA条形码技术,针对采自泰国四色菊市番石榴烂果中的5头实蝇幼虫进行COI扩增测序,与生命条形码数据库(BOLD)中的序列进行比对并利用PAUP4.0软件构建了其系统进化树。根据序列分析和系统进化关系分析的结果,将5头实蝇幼虫样品鉴定为番石榴实蝇(Bactrocera correctaBezzi),并将本研究获得的2条COI序列在GenBank中注册,GenBank的登录号为HM590450和HM590451。     

黑腹胃蝇三龄幼虫形态学和成虫行为方式研究

2008―2010年,对寄生于新疆卡拉麦里与普氏野马同域生活的家马体内的黑腹胃蝇(Gasterophilus pecorum)进行了实验室培养和野外行为观察。将收集到的920只3龄幼虫进行室内培养,结果成功化蛹35个(3.80%),化蛹期为13～27 d,巅峰期为18～20 d(42.86%);17个(48.57%)个体羽化,羽化期为15～27 d,巅峰期为21～22 d(22.86%)。在这些羽化的成蝇当中雄性占11.76%,雌性占88.24%,雄雌比为0.13;其存活期为2～8 d,较大存活率发生在第4-6天(58.82%)。3龄幼虫体长（13.2±7.0） mm,体宽（5.1±4.0） mm,体质量（241±30） mg。相关性分析表明,幼虫的体长、体宽和体质量与成蝇的性别无相关性。交尾行为没有在野外或者靠近的马体的周围环境中发现,羽化初期有梳理和寻求寄主行为。黑腹胃蝇的卵在马的体表和植物茎叶上也均未发现。     

不同因素对乳突类圆线虫离体培养的影响

采用生物统计的正交试验设计方法，研究了Ｍ１９９、犊血清（ＣＢＳ）、鸡胚提取物（ＣＥＥ５０）、兔肝提取物（ＲＬＥ５０）、丙酮酸钠（ＳＰ）、水解酪蛋白（ＣＨ）和酵母提取物（ＹＥ）在离体培养中对乳突类圆线虫第三期幼虫存活和生长发育的影响。结果表明，只有ＣＢＳ和ＲＬＥ５０。对第三期幼虫的存活和生长发育起着显著的促进作用、在试验得出的最适含量组合的培养基内，幼虫生长发育最好，存活时间最长为３７ｄ。对Ｍ１９９、ＥＭＥＭ、Ｆ１２和ＲＰＭＩ１６４０这４种商品组织培养基进行了筛选试验；结果显示Ｍ１９９最佳，表明脂溶性维生素可能是乳突类圆线虫的离体培养所需营养之一。     

美国白蛾各虫态发育历期试验观察

在恒温25℃、相对湿度75%,光照周期L∶D=16∶8条件下,观察美国白蛾各生态发育历期,结果显示,饲喂杨树叶片处理的各虫态平均历期为:幼虫期24.6～25.3d;蛹期12.3～19.0d;羽化-交尾1.8～2.5d;交尾-产卵期1.8～3.3d;产卵-孵化期8.0～8.5d。饲喂杨树叶片较饲喂家蚕饲料和924-1利于缩短美国白蛾发育周期和增加产卵量。     

意大利蜜蜂工蜂幼虫饲粮的适宜亚硒酸钠添加水平

【目的】探索意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂幼虫日粮的适宜亚硒酸钠水平,为意大利蜜蜂工蜂幼虫发育阶段硒的营养需要提供依据。【方法】共取1 440只1日龄意大利蜜蜂工蜂幼虫并平均分为两批,每批720只,一批用于化蛹率、羽化率的测定,一批用于理化指标和分子指标的测定。两批幼虫均按单因素完全随机设计分成6组,对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂亚硒酸钠添加量为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg·kg~(-1)的日粮,每组5个重复,每个重复24只幼虫。取3、5、7日龄幼虫测定体重、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、酚氧化酶(phenoloxidase,PO)活性,取5日龄幼虫测定硒磷酸合成酶(selenide water dikinase,Sel D)、丝氨酰-t RNA合成酶(seryl-t RNA synthetase,Ser Rs)、SECIS-结合蛋白1(SECIS-binding protein 1,Sbp1)、SECIS-结合蛋白2(SECIS-binding protein 2,Sbp2)基因表达量;7日龄时统计化蛹率。【结果】与对照组相比,日粮添加亚硒酸钠水平为0.2—0.6 mg·kg~(-1)时显著提高了幼虫的T-AOC(P0.05),日粮添加亚硒酸钠水平为0.2—0.8 mg·kg~(-1)时显著提高了幼虫的T-SOD活性(P0.05),各试验组均显著降低了幼虫的MDA含量(P0.05)。日粮添加亚硒酸钠水平为0.4 mg·kg~(-1)时幼虫的PO活性显著高于对照(P0.05)。日粮添加亚硒酸钠水平为0.6 mg·kg~(-1)时5日龄幼虫的Sel D、Ser Rs、Sbp1、Sbp2基因表达水平显著高于对照(P0.05)。日粮添加亚硒酸钠水平为0.4 mg·kg~(-1)时幼虫化蛹前体重显著高于对照(P0.05)。与对照组相比,日粮添加亚硒酸钠水平为0.2 mg·kg~(-1)时,幼虫化蛹率显著提高(P0.05)。【结论】人工饲养条件下基础日粮硒水平为0.21 mg·kg~(-1)时,根据幼虫化蛹前体重、化蛹率做拟合曲线得出意大利蜜蜂工蜂幼虫日粮适宜亚硒酸钠添加水平为0.24—0.33 mg·kg~(-1),即意大利蜜蜂工蜂幼虫的适宜硒水平为0.32—0.36 mg·kg~(-1)。     

旋毛虫肌幼虫总RNA提取方法研究初报

【研究目的】探索高质量的旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫总RNA提取方法;【方法】利用Trizol试剂采用三种方法提取旋毛虫肌幼虫总RNA。(1)液氮预冷的研钵中研磨新鲜虫体至样品快融化时,加入适量的Trizol,继续研磨至液状后转移到离心管中;(2)A将新分离的虫体放到-20℃预冷的研钵中,在研磨过程中不断地添加液氮以保持虫体冷冻,之后对冷冻状的样品粉末继续操作;B把液氮冻存的新鲜旋毛虫肌幼虫取出,放到-20℃预冷的研钵中重复A的操作;(3)新鲜虫体放入匀浆器中,加适量Trizol,在冰水混合物中研磨20分钟。虫体破碎后按Trizol说明书继续抽提。最后通过凝胶电泳和紫外吸收光度值检测。【结果】用液氮和Trizol结合的方法,使用新鲜样品提取旋毛虫肌幼虫总RNA,在纯度和得率上都较为理想;【结论】使用新鲜的样品,且液氮与裂解液结合,是获得高质量RNA的可行方法。     

桉树尺蠖幼虫不同危害时期施药防治效果比较

桉树尺蠖是闽南地区桉树林中发生最严重的食叶害虫,为控制其危害,确定最佳防治适期,通过采用林间喷洒2％阿维菌素+苏云金杆菌粉剂的方法,比较第1代幼虫危害早期(5月2日)、危害中期(5月13日)和危害后期(5月30日)分别进行防治的效果,结果表明:在第1代尺蠖幼虫危害早期,每667m2使用500 g药剂进行防治,5 d后虫...     

关于桑蚕(Bombyx mori L.)对人工饮料摄食性的研究──Ⅰ.不同收蚁时间和饲料含水率对小蚕发育的影响

为解决发育不齐的问题,就家蚕不同收蚁时间、不同饲料含水率对家蚕幼虫发育的影响进行了研究。结果发现：①发育整齐度,孵化当天收蚁＞二夜包＞三夜包＞四夜包;②饲料含水率以73％左右为适当．过高或过低都会延缓蚕的发育,影响发育整齐度。