添加卫星RNA对黄瓜花叶病毒寄主反应及其在系统寄主中含量的影响

为了解卫星RNA(satRNA)对辅助病毒在系统寄主中的直接影响,将1株黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic virus,CMV)的卫星RNA(satRNA)sat-Yi与本身不携带卫星RNA的CMV分离物CNa在体外进行假重组,获得了人工构建的假重组毒株CMV-NY。通过寄主反应测定、双链RNA分析和全序列分析,显示satYi与CMV-CNa基因组RNA能够稳定共存,经过反复转接也没有发现卫星RNA的序列突变。通过测定CMV-CNa和NY这2个病毒株的寄主反应,发现satRNA-Yi的存在明显延迟了CNa在所有供试寄主中的发病时间,而且明显减弱了其在多数供试寄主上的症状表现,其中在葫芦科植物上表现出减轻症状的效果最明显;用一种新建的核酸玻片杂交方法,定量测定寄主植物中CMV基因组CP基因及卫星RNA的相对含量变化,结果显示:26℃条件下,在接种5、10、15、20、25和30d的心叶烟中,2个毒株的CP基因含量都呈下降趋势,在相应的时间内,NY-CP基因在同一寄主中的含量均低于CNa-CP基因的含量;接种10d,NY与CNa的寄主适应性没有显著差异,二者基因组CP基因在6种寄主植物中的相对含量均为番茄>假酸浆>心叶烟>西葫芦>南瓜>曼陀罗。由此得出以下结论:sat-Yi降低了CMV CP基因在寄主中的含量,且随着接种时间的增加,卫星RNA的影响作用越明显;sat-Yi不改变CMV基因组RNA的寄主适应性,但是通过降低CP基因含量改变其症状特征。     

荔枝果皮总RNA提取方法的筛选

以三月红荔枝果皮为试验材料,通过采用改良CTAB法、SDS法、改良SDS法、改良Bugos法和RNAplant plus Reagent试剂盒（TIANGEN公司）提取总RNA,采用浓度检测、纯度检测、RT-PCR等方法进行提取结果检测,进而筛选出最佳的提取方法。结果表明,这五种方法都能从三月红荔枝果皮中提取出总RNA,但总RNA浓度和纯度有明显的差异。其中采用改良Bugos法、改良SDS法和RNAplant plus Reagen试剂盒提取RNA的浓度较高;采用改良CTAB法和RNAplant plus Reagen试剂盒提取的总RNA纯度较高,完整性较好。采用SDS法、改良SDS法和改良Bugos法所提取的荔枝果皮总RNA纯度低,降解严重。经RT-PCR验证,采用改良CTAB法和RNAplant plus Reagen试剂盒均能扩增得到200bp的18sRNA编码基因片段。综合以上各项检测的结果,改良CTAB法为提取荔枝果皮总RNA的最佳方法,总RNA质量和得率满足后续分子生物学实验的需要。     

猪CA5B基因的序列特征和表达分析

旨在通过分析猪CA5B(线粒体碳酸酐酶 VB,carbonic anhydrase 5b,mitochondria;CA5B/CA VB/Car5b)基因的序列特征和时空表达,解析CA5B对猪组织器官发育和代谢的影响.本研究采集6头240日龄贵州猪(公、母各3头)的心、肝、脾、肺、肾、皮下脂肪、背最长肌、睾丸、卵巢,采...     

油菜种子高质量总RNA提取的一种有效方法

设计了1种从油菜种子中分离高质量总RNA的方法,有效的排除了种子中富含的多酚、多糖和蛋白质等杂质的污染。分离的总RNA经甲醛变性凝胶电泳和紫外光检测,可见28S和18S rRNA的2条清晰的带型,完整无降解,其A260/A280在1.8~2.0之间。研究结果证明,利用本方法提取的油菜种子总RNA具有很高的质量和纯度,且得率高,完全能满足后续的RT-PCR、全长基因的克隆和Northern blotting分析等分子生物学研究。     

Halloween genes AhCYP307A2 and AhCYP314A1 modulate last instar larva–pupa–adult transition,ovarian development and oogenesis in Agasicles hygrophila(Coleoptera: Chrysomelidae)

Ininsects,ecdysteroidsaresynthesizedbygenesoftheHalloweenfamilyandplayimportantrolesinseveralkey developmentalevents,includingmoltingandmetamorphosis.However,therolesofthesegenesinAgasicles hygrophila are still largely unknown.In this study, the expression patterns of the two Halloween genesAhCYP307A2andAhCYP314A1weredeterminedbyquantitativePCR(qPCR)atdifferentdevelopmentalstages.Moreover,the functions of these two genes were explored using RNA interference (RNAi), and ovarian development was ob...     

多点源滴灌条件下红壤水分溶质运移试验与数值模拟

为了掌握红壤多点源滴灌条件下水分溶质运移规律,为红壤丘陵地区脐橙滴灌灌溉设计和管理提供参考,建立了5个不同红壤容重下滴灌水分和硝态氮运移的数学模型。借助Hydrus-3D模型模拟了不同红壤容重、同一滴头流量和施氮量时土壤水分溶质分布特征和湿润锋推移和交汇过程。模拟结果与试验对比表明:模拟的湿润锋运移交汇过程、湿润体内土壤含水率以及NO_3~--N含量与实测值之间的偏差均在9.5%以内;模拟值和实测值具有很好的一致性,并显示在湿润锋交汇处土壤含水率和NO_3~--N含量低于同一深度滴头下方的土壤,另外高容重红壤阻碍湿润锋的推进速度。总体而言,Hydrus-3D可以用于红壤滴灌施肥灌溉条件下湿润体范围以及水分和氮素运移和分布的模拟。     

双平板叶栅绕流的流动结构及其激励特性研究

绕流叶片的非稳态流动及其尾迹涡结构是诱发水力机械振动的主导因素。以横向布置的一对平板叶栅为研究对象,基于LES计算雷诺数在4.8×104下的三维绕流流场,分析绕流流场涡演化结构、升阻力及压力脉动等特性,以揭示尾迹干涉下平板绕流的流场结构及其激励机制。结果表明:该雷诺数下,单平板绕流平板表面存在错列布置的发卡涡结构,绕流尾迹呈现出高度的三维特性;双平板叶栅绕流状态下,上、下游平板间的间隙流动结构有明显抑制上游平板表面涡结构演化的作用;平板受力在模式H和模式L之间不断切换,且升力波动的幅值随阻力的增大而增大,尾迹干涉下下游平板受力的模式切换频率升高,升力波动幅值也增大;平板表面压力脉动的主要激励源为平板尾涡脱落。尾迹干涉下平板绕流及受力分析,可为水力机械叶片尾迹干涉下的流动主动控制提供参考。     

The antisense block of CROC-1 gene expression makes cells grow slower

AIM:To establish FL-CROC- 1 ^- cell line in which CROC- 1 gene expression was blocked and study the role of CROC- 1 gene in cell growth. METHODS:The appropriate length cDNA fragment of the recently identified human gene CROC- 1 which encodes ubiquitin-conjugating enzyme like protein(Ubc-like protein) was cloned into the reconstructed eukaryotic expression vector pMAMneo-amp^- by antisense strategy. The recombinant plasmid which can express CROC- 1 antisense RNA was selected by restriction enzyme map analysis. The antisense expression recombinant plasmid pMAM-antiCROC- 1 was then transfected into human amnion FL cells by a modified calcium phosphate-mediated transfection procedure and selected with MEM medium containing 400 μg/mL geneticin. Finally ,the growth rate of the G418 resistant FL-CROC- 1 ^- cell line was determined.RESULTS:When the antisense inhibition of CROC-1 gene expression was induced by dexamethasone,the growth rate of the FL-CROC-1^- cel line was obviously slower as compared with that of the control FL cell and FL-MAMneo cell which was established by transfection of plasmid pMAMneo-amp^-(P<0.05).CONCLUSIONS:FL-CROC- 1 ^- cell line was successfully established in this study and the result of FL-CROC- 1 ^- cell growth suppression suggests that CROC- 1 gene encoded Ubc-like protein plays a positive regulation role in cell growth.