淡水小龙虾下脚料酶解制备抗氧化肽的工艺研究

[目的]研究以淡水小龙虾下脚料为原料酶解制备龙虾抗氧化肽的工艺。[方法]以酶水解产物清除羟自由基能力为指标,采用单因素和响应面试验考察了制备淡水小龙虾抗氧化肽的最佳蛋白酶种类及其酶解工艺。[结果]碱性蛋白酶是制备淡水小龙虾抗氧化肽的优选蛋白酶;最佳酶解工艺条件为：料液比1.0∶1.0（g∶ml）、酶解温度59℃、pH 8.9、加酶量2 000 U/g,水解时间3 h。[结论]此工艺所得酶解液对羟自由基的清除效果最好,清除率为74.66%。     

克氏原螯虾卵粒大小与孵化率相关性研究

对克氏原螯虾卵粒大小与孵化率之间的相关性进行了研究。结果表明:当百粒重为0.422 g时,其孵化率最高,为95.1%;当卵径为1.45 mm时,孵化率最高,为94.5%;卵径与卵粒重之间具有很好的相关性。     

冬季温度刺激对克氏原螯虾繁育的影响

通过加温刺激克氏原螯虾(Procambarus clarkii)雌虾在冬季抱卵,并对卵及幼体在不同水温下的发育过程进行观察。结果显示:经过38 d的加温刺激,在26℃下陆续观察到有虾抱卵,18℃以下未观察到抱卵虾,但该水温能促进雌虾性腺发育。雌虾经加温刺激后所抱卵在18℃,21℃和26℃下均能正常孵化出幼虾。18℃,21℃和26℃下孵化时间分别为(39.67±3.06)d,(28.33±2.52)d和(15.00±2.00)d,孵化所需时间随着温度的提升而减少(P<0.05)。孵化的幼虾经45 d养殖后,在18℃,21℃和26℃下体长分别为(1.90±0.25)cm,(2.73±0.38)cm和(3.78±0.70)cm,体重分别为(0.223±0.100)g,(0.688±0.331)g和(2.145±1.272)g。18℃,21℃水温下的幼虾在此生长阶段为非异速生长(b=3),26℃水温下的幼虾为异速生长(b>3)。在3种温度下,幼体生长速度随温度的升高明显加快(P<0.05)。     

白斑综合征病毒感染克氏原螯虾后的PCR检测及组织病理学研究

采用投喂感染白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)对虾肌肉的方式,对养殖克氏原螯虾(Procambarus clarkii)进行人工感染,以确定WSSV对养殖克氏原螯虾的易感性。结果发现,投喂病虾感染组螯虾的死亡率达到90%,而对照组未出现死亡。采用PCR对试验组螯虾的肌肉进行WSSV检测,发现投喂感染组的阳性检出率为100%,对照组的阳性检出率均为0。PCR检测结果发现,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心脏六种组织的PCR结果均为WSSV阳性,而对照组的各组织检测结果均为阴性。组织切片的光镜观察也证实,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心脏及血淋巴等组织均发生了不同程度的病变。     

克氏原螯虾细菌性病原的分离与鉴定

2010年浙江安吉克氏原螯虾养殖发生严重病害,从患病的虾肠道内分离到菌株N201007,人工感染健康克氏原螯虾在8天内其半数致死量LD50为5.3×105,感染发病虾表现出与自然发病虾相似症状。通过革兰氏染色,梅里埃细菌测定试剂条ID32 E鉴定为嗜水气单胞菌。为进一步确定病原菌分类地位,对其16S rRNA序列扩增并测序,在NCBI基因库上进行序列比对,与菌株ATCC7699同源性达到99%,通过以上实验确定导致此次养殖克氏原螯虾大规模死亡的病原为嗜水气单胞菌。药敏试验结果表明该菌对强力霉素、氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星、菌必治敏感。     

克氏原螯虾繁殖行为生态学的实验研究

针对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)初次性成熟、生殖季节、交配体制、交配行为、掘洞行为、护幼抚育行为等独特的生殖对策和行为特性展开研究。在克氏原螯虾主要繁殖季节进行野外自然采集成虾样本进行交配产卵等实验观察统计, 每批次采集成虾样本为30尾以上, 体质量在15~40 g。结果表明: 1) 克氏原鳌虾生长快速且性成熟早, 当年个体经6~12个月即可达到性成熟。2) 该虾属秋冬季产卵类型, 但交配季节宽泛, 繁殖期长, 一年中大部分时间均有交配现象。7月份(1龄、2龄, 体质量22.4 g±2.56 g)交配率为20%, 产卵率为0; 8月份(1龄、2龄, 体质量26.7 g±2.98 g)交配率为45%, 产卵率为5%; 9月份(1龄、2龄, 体质量29.3 g±3.11 g)交配率达到60%以上, 产卵率为10%; 10月份(1龄、2龄, 体质量30.9 g±3.39 g)交配率为75%以上, 产卵率为35%, 表明在自然条件下克氏原螯虾交配季节主要集中在8-10月, 产卵高峰期主要集中在10-12月。3) 交配体制属于繁殖行为学中的乱交制, 雌雄性比较为松散, 存在普遍的重复交配现象。4) 具有明显的穴居性, 掘洞行为是克氏原螯虾一个显著突出的生态习性, 繁殖季节掘洞强度显著增强, 掘洞目的主要为雌虾产卵孵幼, 其他季节的掘洞目的则是为躲避不良的生态环境, 冬春季则几乎没有掘洞行为, 即不同季节克氏原螯虾的掘洞有着不同的生态功能。克氏原螯虾繁殖行为生态学的研究可为其开展人工繁殖和生产养殖提供理论依据。

     

克氏原螯虾的适宜蛋氨酸需求量

以酪蛋白、明胶、鱼粉、小麦面筋粉和晶体氨基酸为蛋白源配制了6组蛋白质水平为28.25%、能量为16.07 kJ/g的等氮等能的半纯合饲料, 各组蛋氨酸实际含量分别为0.39%、0.53%、0.71%、0.86%、0.98%和1.13%。以初始体质量为(9.80±0.15) g的克氏原螯虾(Proambarus clakii)为试验对象, 每组设4个重复, 每个重复12尾虾。养殖试验于室外网箱(规格为60 cm×60 cm×60 cm)中进行, 饲养周期为56 d。结果表明, 当饲料中蛋氨酸水平由0.39%升高至1.13%时, 克氏原鳌虾的增重率、特定生长率和饲料效率均显著升高(P<0.05)。当蛋氨酸水平为0.86%时, 三者均达到最大值。当蛋氨酸水平进一步升高时, 三者均呈下降趋势。试验各组的成活率为83.33%~91.67%, 但无显著差异(P>0.05)。当蛋氨酸水平为0.86%时, 全虾粗蛋白含量最高, 其显著高于0.39%组(P<0.05)。日粮蛋氨酸水平对全虾的水分、灰分和脂肪含量以及肝胰脏组成和肌肉氨基酸组成均无显著影响(P>0.05)。肌肉粗脂肪含量以蛋氨酸水平0.98%组最低, 其显著低于0.39%组(P<0.05)。饲料中蛋氨酸水平显著影响肠道蛋白酶的活性(P<0.05), 但对脂肪酶和淀粉酶活性均无显著影响(P>0.05)。以增重率为评价指标进行一元二次回归分析, 得出克氏原螯虾的适宜蛋氨酸需求量为0.94%, 占饲料蛋白质的3.36%。本研究通过分析饲料中不同蛋氨酸水平对克氏原螯虾生长、饲料利用、虾体组成、肌肉氨基酸组成和消化酶活性的影响, 确定克氏原螯虾的适宜蛋氨酸需求量, 以期为其人工配合饲料的研制提供基础数据和理论依据。

     

Effects of Pond Renovation on White River Crayfish,Procambarus acutus acutus Production

Abstract

The effects of renovation on the production of white river crayfish, Procambarus acutus acutus were evaluated in ten 0.1-ha earthen ponds. The bottoms and levees of five ponds were reshaped with heavy equipment prior to planting sorghum-Sudan grass forage during the de-watered phase of the culture cycle. Five non-renovated ponds served as a control. The mean total length (TL) of the crayfish harvested from renovated ponds was significantly larger than those crayfish harvested from non-renovated ponds. The renovated pond harvest contained an estimated 43.2% carryover crayfish (>95 mm TL) in comparison to 7.6% in the harvest from non-renovated ponds. By weight, carryover crayfish constituted an estimated 69.3% of the harvest from renovated ponds, compared to 21.0% from non-renovated ponds. No difference was observed in the harvest between treatments; however, the low proportion of young-of-the-year crayfish in the renovated pond harvest may adversely impact future production.     

饲料中赖氨酸水平对克氏原螯虾生长、体组成与消化酶活性的影响

克氏原螯虾(Procambarus clarkii)购自盱眙某龙虾养殖场,初始体质量为(7.60±0.01)g。以酪蛋白、明胶、小麦面筋粉和晶体氨基酸为蛋白源配制7组蛋白质水平为28.26%、能量为17.15 kJ.g 1的等氮等能半纯和饲料,各组赖氨酸质量分数分别为0.76%、1.00%、1.22%、1.47%、1.69%、1.89%和2.18%。实验虾分为7组,每组设4个重复,每个重复12尾虾,分别投喂以上7种饲料。养殖实验于室外网箱(规格为60 cm×60 cm×60 cm)中进行,饲养周期为60 d。结果表明,随着饲料中赖氨酸水平的升高,增重率、特定生长率和饲料效率均显著升高(P<0.05),分别在赖氨酸水平1.69%、1.69%和1.22%组时,三者达到最大值;当赖氨酸水平进一步升高,三者均呈下降趋势。各组的成活率为89.58%~97.92%,组间无显著差异(P>0.05)。全虾水分含量以赖氨酸水平1.22%组最低,显著低于0.76%组(P<0.05)。全虾粗蛋白和粗脂肪含量分别以赖氨酸水平1.89%组和1.69%组最高,均显著高于0.76%组(P<0.05)。各组之间的全虾灰分含量、肌肉组成、肌肉氨基酸组成和消化酶活性均无显著差异(P>0.05)。以增重率为评价指标进行一元二次回归分析,得出克氏原螯虾的适宜赖氨酸需求量为1.66%,占饲料蛋白的5.87%。本研究旨在通过确定克氏原螯虾对饲料中赖氨酸的适宜需求量,为其人工配合饲料的研制提供基础数据和理论依据。     

Effects of different feed stimulants on freshwater crayfish (Procambarus clarkii), fed diets with or without partial replacement of fish meal by biofeed

The feeding trials were carried out with freshwater crayfish (Procambarus clarkii) to evaluate the three feed stimulants betaine (Bet), squid extract (SE) and squid meal (SM) upon fish meal (FM) diets or biofeed (BF) diets in which FM were partially replaced by BF. Results showed the three feed stimulants had no significant effect on growth. By the relative concentration of markers in the faeces and diets, the preference for each diet was estimated, and the best stimulant was the mixture of Bet, SE and SM. As FM replaced by BF increased, added with the mixture, the relative weight gain showed an increasing trend, but decreased significantly by 30% replacement. With the substitution increasing, trypsin activities increased, whereas decreased too upon 30% substitution. Less than 30% replacement, there was no significant effect on muscle proximate composition, intestine amylase activities and serum haemocyanin contents, except the drop of lipid. The results indicated that the mixture of Bet, SE and SM could perform well as a feed stimulant. And with the addition of the mixture, FM in the diet could make about no more than 20% saving without any adverse effects.