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71.
不同引物对植原体的检测灵敏度比较研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用常规PCR和巢式PCR对目前常用的各种植原体引物(fPl/rP7、fU5/rP7、fU5/rU3、fAY/rEY和fFD9/rFD9)的检测灵敏度进行了比较研究。研究发现,它们的检测灵敏度并不相同。最灵敏的引物(fAY/rEY)要比最不灵敏的引物(fFD9/rFD9)的灵敏度至少高出数千倍。因此,按照不同的检测目的选择所用的检测引物是明智的,特别是当待测样品中的植原体浓度极低时,比如葡萄组织样品中植原体的检测。据此提出了用于不同检测目的时的最佳引物。 相似文献
72.
Multi#ex—CAPS技术及其在番茄遗传鉴定中的应用 总被引:6,自引:1,他引:6
:应用Multiplex—PCR和CAPS(Cleaved amplified polymorphic sequence)原理研究建立了Mutiplex—CAPS技术。该技术包括:(1)在PCR扩增反应体系加入2对、3对或多对核苷酸引物,经30~40个扩增循环后得到每对引物的特异扩增片段;(2)应用同一种限制性内切酶消化这些不同引物经扩增后获得的特异片段;(3)琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色检测酶切片段长度的多态性。利用该技术对番茄(Lycopersicon es—cdentum)TA517及其近等基因系的分析表明,Multiplex—CAPS能同时检测2个、3个或多个CAPS标记的多态性,其效果等同于每个CAPS标记的多态性的叠加,重复性好,分析效率高,降低成本数倍。 相似文献
73.
利用PCR技术同时鉴定番茄抗根结线虫和抗斑萎病毒基因 总被引:7,自引:1,他引:7
利用同一PCR反应体系,对分别与番茄抗根结线虫的 基因和抗斑萎病毒(1w V)的Sw一5基因紧密连锁的SCAR标记进行了同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合,其中与基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记,抗感试材均产生750 bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型试材存在 I酶切位点,酶切后分别产生了570 bp、160 bp和750 bp、570 bp、160 bp的不同特异性片段,而感病基因型试材无 I酶切位点;与Sw一5基因紧密连锁的SCAR2标记为显性标记,只有抗病试材扩增出400 bD的特异性片段。经反复验证,结果稳定准确可靠,可用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。 相似文献
74.
根据南方菜豆花叶病毒(SBMV)两株系B和C的核酸序列设计两对引物,利用RT-PCR可以特异地区分纯化的和0.2g病叶中的两株系,RT-PCR检测SBMV-B的灵敏度为10pg。 相似文献
75.
AFLP是一种新的分子遗传标记技术,它结合了RFLP和PCR技术的优点,具有RFLP的稳定性和PCR的高效性,被称为“最有威力的分子遗传标记”或“下一代分子标记”。相对于国外而言,我国在这方面的研究还比较少。本文综述了扩增片段长度多态性(AFLP)这种遗传标记的原理、技术特点、技术发展及其在动物遗传多样性、种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位和标记辅助育种等研究中的应用。 相似文献
76.
广西鸡传染性贫血流行病学的研究 总被引:10,自引:0,他引:10
应用PCR检测技术 ,对采自广西五个主要养鸡地区 5 0多个鸡群 3 2 1羽病鸡的组织样品 ,进行了鸡传染性贫血病毒核酸的检测。结果检测的病例平均阳性率为 2 8 3 4%;三黄鸡的阳性检出率最高 ( 3 9 2 8%) ;各种日龄的鸡均可检出 ,其中最小的为 7日龄、最大的为 3 5 0日龄 ;对 5个免疫器官的检测结果显示 ,骨髓的检出率最高( 84 3 8%) ;CIAV阳性病例中与MDV、REV和ALV的混合感染率共计 48 40 %。 相似文献
77.
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79.
80.
两种一步法RNA提取试剂的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
RNA的提取在生物医学研究和临床检测上应用广泛。本文分别用进口Invitrogen公司生产的以及我们自己研制的一步法RNA提取试剂,提取大肠杆菌RNA、鸡肌肉组织RNA和尿囊液RNA,通过核酸电泳和荧光定量RT-PCR进行比较。结果表明用我们自己研制的和进口的试剂提取的RNA都不含有DNA;这些RNA都可以作为模板进行RT-PCR检测,并且在数量上相互之间没有明显差异。说明我们自己研制的一步法RNA提取试剂可以取代进口试剂。此外,本文还讨论了此类试剂一些评定方法。 相似文献