斑玉蕈β-葡萄糖苷酶基因的序列分析及皂苷对基因表达的影响

通过转录组测序获得了斑玉蕈(Hypsizygus marmoreus)SIEF3133菌株的β-葡萄糖苷酶基因的cDNA序列(命名为bgl1),采用荧光定量PCR检测bgl1的相对表达量。当PDB中加入0.05g/L的皂苷溶液,菌丝培养4~6d时,bgl1相对表达量降低了1/2左右(相比对照),8d开始升高,第10天为对照组的1.8倍;向工厂化生产用的栽培瓶(接种培养85d后搔菌处理)中添加0.05g/L的皂苷溶液15mL,可缩短子实体采收时间约3d(与对照组相比),在此过程中bgl1相对表达量在第5天时最低,20d时超过对照组,5d时为对照组的1.66倍。     

丝氨酸羟甲基转移酶活性测定及酶学性质研究

通过测定苯甲醛在279 nm处的吸光度来确定丝氨酸羟甲基转移酶的活性,利用单因素试验分析Escherichia coli SRZ018菌株最适产丝氨酸羟甲基转移酶的条件。结果表明,最适产酶条件为p H 8.0,反应温度50℃,CTAB为0.03 g/L,DL-β-苯基丝氨酸浓度为200μmol/L,PLP浓度为50μmol/L,该条件下丝氨酸羟甲基转移酶的活性最高达到0.881 U/mg。     

组氨酸对体外培养奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白及酪氨酸激酶2-信号转导与转录激活子5/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路相关磷酸化蛋白表达的影响

本试验旨在研究不同浓度的组氨酸对体外培养奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白及酪氨酸激酶2(JAK2)-信号转导与转录激活子5(STAT5)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关磷酸化蛋白表达的影响。将原代奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,分为对照组和7个试验组,采用无必需氨基酸的培养基,对照组不添加组氨酸,试验组是在对照组基础上分别添加0.15、0.60、1.20、2.40、4.80、9.60、19.20 mmol/L的组氨酸。采用噻唑蓝比色法检测原代奶牛乳腺上皮细胞12 h增殖情况;运用蛋白质免疫印迹检测β-酪蛋白和8个信号通路相关磷酸化蛋白表达。结果表明:1)当组氨酸浓度为0.15~9.60 mmol/L时,与对照组相比,奶牛乳腺上皮细胞数量均增加。2)β-酪蛋白表达量随组氨酸浓度的增加出现先升高后降低的趋势,但试验组均极显著高于对照组(P0.01)。3)与对照组相比,组氨酸的添加可极显著促进各信号通路相关磷酸化蛋白的表达(P0.01);试验组中,随着组氨酸浓度的升高,磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白[P-m TOR(Ser2481)]和磷酸化真核细胞翻译延伸因子2[P-e EF2(Thr56)]蛋白的表达量下降,而磷酸化核糖体S6蛋白激酶1[P-S6K1(Thr389)]的蛋白表达增加;当组氨酸浓度为2.40 mmol/L时,磷酸化酪氨酸激酶2[P-JAK2(Tyr1007/1008)]、磷酸化真核细胞始动因子4E结合蛋白1[P-4EBP1(Thr37)]和磷酸化真核细胞起始因子2α[P-e IF2α(Ser51)]蛋白的表达量最高,磷酸化信号转导与转录激活子5[P-STAT5(Tyr694)]、磷酸化m TOR调控蛋白[P-raptor(Ser863)]和m TOR复合物1中的绑定蛋白(GβL)蛋白在组氨酸浓度为9.60 mmol/L时表达量最高。综合可知,组氨酸的添加可通过促进JAK2-STAT5信号通路中P-JAK2(Tyr1007/1008)和PSTAT5(Tyr694)蛋白的表达来进而调控β-酪蛋白表达。最适浓度(0.15~9.60 mmol/L)范围内的组氨酸还可通过m TORC1的P-raptor(Ser863)蛋白作用于下游靶点P-4EBP1(Thr37)来促进β-酪蛋白表达,最终调控乳蛋白合成。     

澳系荷斯坦牛β-乳球蛋白多态性对泌乳性能的影响

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对海丰奶牛场935头澳系荷斯坦牛β-乳球蛋白多态性进行分型,并利用最小二乘法分析其多态性对泌乳性能的影响。结果表明:β-Lg有A、B两种等位基因,基因频率分别为0.477和0.523,优势基因型为AB型,频率为0.516。方差分析表明:β-Lg对乳脂率、总固体含量和305d脂肪产量有影响显著(P0.05),对日产奶量、脂蛋白比、乳糖含量、305d产奶量和305d蛋白产量有极显著影响(P0.01)。该结果为利用乳蛋白基因多态性提高荷斯坦牛泌乳性能提供了参考资料。     

温度和添加剂对象草青贮发酵品质、α-生育酚和β-胡萝卜素的影响

为提高青贮饲料的发酵品质,降低α-生育酚和β-胡萝卜素的损失,研究了温度(45,30和15℃)和添加剂(无添加:CK;纤维素酶:E;植物乳杆菌:LP)对象草青贮饲料的影响。试验结果表明,在所有温度水平,象草青贮饲料的发酵品质良好,但30℃时产生了少量丁酸,发酵品质略有下降;添加LP和E降低了pH(P0.05),增加了乳酸含量和乳酸乙酸比(P0.05),提高了发酵品质。象草青贮饲料贮藏在45和15℃时的α-生育酚含量显著高于30℃(P0.05),β-胡萝卜素含量显著低于30℃(P0.05)。LP和E添加组在所有温度水平的α-生育酚和β-胡萝卜素含量均较低(P0.05)。E组在45℃的α-生育酚含量显著高于LP组,E组在30和15℃的β-胡萝卜素含量显著高于LP组。     

添加剂对象草青贮发酵品质、α-生育酚和β-胡萝卜素的影响

为提高青贮饲料的发酵品质,降低α-生育酚和β-胡萝卜素的损失,研究了添加剂(无添加,CK;邻叔丁基对苯二酚,T;植物乳杆菌,L;植物乳杆菌和邻叔丁基对苯二酚组合添加,TL)和贮藏时间(35d和70d)对象草(Pennisetum purpureum Schumach.)青贮品质的影响。结果表明:在两个贮藏时间,象草青贮饲料发酵品质都良好;L和TL组降低了饲料pH(P0.05),增加了乳酸含量和乳酸乙酸比(P0.05);T组在两个贮藏时间的所有发酵品质参数与CK组无显著差异。L和TL组在两个贮藏时间的α-生育酚显著低于CK组和T组(P0.05),T和TL组在贮藏70天的β-胡萝卜素含量显著低于CK组(P0.05)。综上所述,无添加剂的象草低温15℃贮藏70d后的青贮发酵品质良好,α-生育酚和β-胡萝卜素的损失较小。     

17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-2(SBD-2)表达的影响

[目的]探讨17β-雌二醇(E2)对体外培养的绵羊输卵管上皮细胞内抗菌肽SBD-2基因表达的影响。[方法]根据E2添加剂量设10-6mol/L组、10-7mol/L组、10-8mol/L组、10-9mol/L组和10-10mol/L组,各组细胞于加药后2、6、12、24及48 h,分别采用real-time RT-PCR技术检测E2对绵羊输卵管上皮细胞内SBD-2 m RNA表达量的影响,同时设相应的对照组。[结果]以剂量为10-8mol/L的E2处理输卵管上皮细胞6 h后,其SBD-2的表达量达到极值,极显著高于对照组(P0.01),以剂量为10-10mol/L的E2处理输卵管上皮细胞24 h和48 h后,也能显著促进SBD-2的表达(P0.01,P0.05),之后随着各时间段E2剂量的增加,SBD-2 m RNA的表达量呈逐渐降低趋势。[结论]一定剂量的E2能够在处理细胞后的特定时间促进绵羊输卵管上皮细胞中SBD-2 m RNA的表达,E2对输卵管上皮细胞SBD-2 m RNA表达的调节作用存在时间效应与剂量依赖关系。     

β-半乳糖苷酶的应用及固定化

β-半乳糖苷酶是一种来源广泛且具有多种用途的酶。主要探讨了来源于微生物中的乳糖酶及其性质,以及在乳品中的应用,并对固定化乳糖酶的应用状况作了综述,提出了急需解决的关键问题。     

Relationship between rat hepatic fibrosis and regulation of hepatic stellate cell autophagy by microRNA-181a

AIM To observe the changes of liver structure, the levels of transforming growth factor-β1 （TGF-β1）, microRNA-181a, LC3-II/-I, beclin-1 and collagen deposition in hepatic fibrosis （HF） rats induced by carbon tetrachloride （CCl₄）, and the effect of microRNA-181a on autophagy of rat hepatic stellate cells （HSCs） induced by TGF-β1, and to explore the possible mechanism of microRNA-181a in regulating HSC activation and HF. METHODS Wistar rats （n=40） were randomly divided into 5 groups （with 8 in each）： control group （subcutaneous injection of olive oil, 3 mL/kg, twice a week）, and CCl₄-induced HF groups of 2, 4, 6 and 8 weeks （subcutaneous injection of 40% CCl₄, 3 mL/kg, twice a week for 2, 4, 6 and 8 weeks, respectively）. Masson staining was used to evaluate the changes of HF in rats. The levels of TGF-β1 in serum and liver tissue of the rats were measured by ELISA. The level of microRNA-181a in rat liver tissues was detected by RT-qPCR. The protein levels of LC3-II/-I, beclin-1, α-smooth muscle actin （α-SMA）, collagen type I （Col I） and collagen type Ⅲ （Col Ⅲ） in rat liver tissues were measured by Western blot. HSC-T6 cells were transfected with microRNA-181a inhibitor, or pretreated with the autophagy inhibitor 3-methyladenine （3-MA）, before treatment with TGF-β1 to stimulate autophagy. The expression of microRNA-181a, LC3-II/-I, beclin-1, α-SMA, Col I and Col Ⅲ in HSC-T6 cells were determined by RT-qPCR and Western blot. RESULTS The levels of TGF-β1, microRNA-181a, LC3-II/-I ratio and beclin-1 in liver tissues showed an overall trend of increasing with the progression of HF, and microRNA-181a expression showed a positive correlation with autophagy-associated proteins （P<0.01）. MicroRNA-181a level was significantly increased, which was associated with TGF-β1-induced autophagy and activation of HSC-T6 cells.MicroRNA-181a expression was significantly down-regulated in the HSC-T6 cells transfected with microRNA-181a inhibitor, along with suppression of autophagy and cell activation （P<0.01）, which were similar to the effects of 3-MA treatment. CONCLUSION CCl₄ promotes rat HF, the microRNA-181a expression of liver tissue, and autophagy in a time-dependent manner. Reducing the expression of microRNA-181a in HSC-T6 cells inhibits the autophagy of HSCs-T6 cells induced by TGF-β1. The regulation of HSC autophagy by microRNA-181a may be involved in rat HF.