地高辛标记核酸探针的标记方法及其在食用菌研究领域的应用

综述了非放射性地高辛（DIG）标记系统的原理和主要特点，介绍了地高辛标记核酸探针的主要标记方法，影响探针标记方法选择的因素，标记探针的显色检测方法及其在食用菌研究领域的应用。     

双孢蘑菇性亲和性相关分子标记的初步筛选

以传统的形态，生理生化分析和最新的DCS－PDMA性亲和性测定方法为基础， 结合群体分离分析和RAPD技术来源于同一双孢蘑菇异核体菌株的12个不育同核原生质体个体进行分析，筛选与性亲和性相关的分子标记。研究结果表明，供试的12个不育同核原生质体个体被分成两大类性亲和性类型，其中一类（A^ ）包括不育同核原生质体个体B、C、D、E、F、G、H、I、J、L，另一类（A^-）则仅仅包括不育同核原生质体个体K和M，同时筛选到一个与性亲和性相关的分子标记OPA16 1500。从而为间地利用双孢蘑菇本身特有的交配型作标记来指导杂交育种工作和进一步将性亲和性基因定位分离克隆奠定了坚实的基础。     

苹果柱型基因Co的一个AFLP 标记的SCAR转换

 将苹果柱型基因的一个AFLP 标记成功地转换成了简单实用的SCAR 标记。首先对AFLP 标记片段进行序列测定, 然后根据序列特点设计了两对特异引物CoA1/ CoA2 和CoA1/ CoA3 , 每条引物长20 bp。PCR 结果表明CoA1/ CoA2 可以扩增出216 bp 和148 bp 两条带, 其中216 bp 的为柱型性状的特征带; CoA1/CoA3 可以扩增出273 bp 和205 bp 的两条带, 其中273 bp 的为柱型性状的特征带。两对引物在杂交后代中扩增出的特征带与柱型性状的分离重组率都很低(CoA1/ CoA2 为6. 3 % ±2. 5 %; CoA1/ CoA3 为7. 3 % ±2. 6 %) , 所以它们都可以作为该SCAR 标记的特异引物所用。     

根癌农杆菌介导绿色荧光蛋白基因转化印度酸桔的研究

 通过根癌农杆菌介导将绿色荧光蛋白基因转入印度酸桔的胚性愈伤组织中, 经潮霉素筛选,获得抗性愈伤组织, 并再生植株。对这些植株进行GUS 染色、PCR 分析、绿色荧光检测和Sourthern 杂交验证, 结果表明绿色荧光蛋白已经在转基因植株中表达。     

分子标记在桃上的应用

遗传标记有形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记等几种方法。分子标记是随着分子生物学的发展新近形成的遗传标记方法 ,能从生物体的遗传物质 (ＤＮＡ)去揭示生物体的遗传本质。有关分子标记应用的原理及其在果树上的应用已有文献综述[1～ 2 ] 。本文根据笔者对 2 0 3份桃类植物的分子标记研究和国内外有关桃分子标记方面的研究报道 ,对分子标记在桃上的应用作一简要介绍。1　分子标记技术在桃种质资源研究上的应用1 1　桃属种的系统发育和分类　笔者采用ＲＡＰＤ技术 ,用从 2 0 0多个随机引物筛选的 2 2个引物 ,对桃属主要种的ＤＮＡ进…     

利用RAPD标记评价桃种间杂交一代群体的分离方式

以毛桃2-7(Prunus persica)、山桃白山碧桃(Prunus davidiana)以及两者的F_1代为试材,对RAPD标记的分离方式进行分析。结果表明,RAPD标记在F_1代呈3种分离方式:孟德尔分离、偏离孟德尔分离规律、异常分离。3种分离位点出现的频率和数量分别为:80%、240,14%、42,6%、18。呈孟德尔分离的情况有:不分离、1:1分离和3:1分离,其中不分离的频率为64％。并对偏离孟德尔分离比例和异常分离的RAPD标记进行分析。其研究结果可为该群体是否适合构建遗传连锁图谱进行评价及进一步利用该群体奠定良好基础。     

一个与稻瘟病菌无毒基因AVR-Pik~m连锁的SCAR标记的分离

 本研究将以前在稻瘟病菌菌株S1522获得的与决定对水稻品种梅雨明无毒性的基因(AVR-Pik^m)相连锁的1个RAPD标记OPO12₁₀₀₀进行了克隆和鉴定。核苷酸序列测定与分析结果表明:OPO12₁₀₀₀的大小为946个碱基,不含有与已报道的稻瘟病菌Mg-SINE、Fosburry、Magyy、Grasshopper、Pot2以及Pot3等同源的重复序列。根据OPO12₁₀₀₀的核苷酸序列,设计了1对24个核苷酸的特异引物,对无毒表型亲本S1522和毒性表型亲本S159、无毒表型群体基因池、毒性表型基因池以及有性杂交后代108个菌株进行了PCR扩增,所有无毒表型的菌株均能特异性地扩增出1条与OPO12₁₀₀₀大小相同的DNA条带,而毒性表型的菌株除5个重组个体外,均不能扩增出这条特异带。此结果表明,与稻瘟病菌无毒基因AVR-Pik^m连锁的RAPD标记OPO12₁₀₀₀被成功地转化为SCAR标记,为进一步通过染色体步移克隆该无毒基因奠定了基础。     

梨火疫细菌实时荧光PCR和诱捕PCR-ELISA检测方法的建立

根据梨火疫细菌中独特而保守存在的质粒pEA29，设计了1对引物和3条探针，建立了实时荧光PCR检测方法和诱捕PCR-ELISA检测方法。实时荧光PCR采用带荧光标记的核酸杂交探针，边扩增边检测，步骤简单，不需PCR后处理，可避免假阳性和交叉污染；诱捕PCR-ELISA检测方法只需简单处理的样品就能检测，减少了核酸不纯出现的漏检，由于增加了核酸杂交探针，可不需凝胶电泳EB染色检测，不会出现假阳性问题。     

当前欧盟输华货物木包装检疫监管中的问题和对策

为了防止欧盟诸国检疫性林木有害生物随进口货物木质包装和铺垫材料等传入国门 ,保护我国森林、环境和旅游资源 ,2 0 0 2年6月国家质检总局、海关总署、国家林业局、外经贸部等四部委联合发出 58号公告 ,决定对来自欧盟货物木包装采取临时紧急检疫措施。和全国各入境口岸的检验检疫机构一样 ,近来我局有条不紊地围绕这项任务积极开展有针对性的检疫工作 ,通过严肃的依法施检 ,在实际检疫监管工作中 ,也发现许多有悖我国植物检疫规定的检疫问题 ,值得密切关注和重视。1　欧盟输华木包装带树皮现象严重根据 58号公告规定 ,欧盟输往中国货物所…     

Multi#ex—CAPS技术及其在番茄遗传鉴定中的应用

 ：应用Multiplex—PCR和CAPS(Cleaved amplified polymorphic sequence)原理研究建立了Mutiplex—CAPS技术。该技术包括：(1)在PCR扩增反应体系加入2对、3对或多对核苷酸引物，经30～40个扩增循环后得到每对引物的特异扩增片段；(2)应用同一种限制性内切酶消化这些不同引物经扩增后获得的特异片段；(3)琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色检测酶切片段长度的多态性。利用该技术对番茄(Lycopersicon es—cdentum)TA517及其近等基因系的分析表明，Multiplex—CAPS能同时检测2个、3个或多个CAPS标记的多态性，其效果等同于每个CAPS标记的多态性的叠加，重复性好，分析效率高，降低成本数倍。