樱桃小果病毒1号胶体金免疫层析试纸的研发与应用

近年来，病毒病在甜樱桃主产区的发生呈上升趋势，制约了甜樱桃产业升级和发展。能够侵染甜樱桃的病毒种类中，樱桃小果病毒1号(little cherry virus 1,LChV-1)导致樱桃果实缩小，彻底丧失经济价值，对甜樱桃产量影响较大。LChV-1通常具有潜伏侵染的特性，在樱桃苗期难以通过症状进行判断。同时，多数品种对LChV-1敏感，因此该病毒的早期检测对甜樱桃的生产尤为重要。传统的病毒检测手段需要专业仪器，不能满足田间快速检测的需求。本研究获取了LChV-1外壳蛋白的多克隆抗体，并研发了一种能够准确检测LChV-1病毒的胶体金免疫层析试纸，确定了胶体金的最佳抗体标记浓度为0.24 mg/mL,检测线最佳重组蛋白浓度为0.25 mg/mL,质检线最佳羊抗兔IgG抗体浓度为0.04 mg/mL。运用该试纸检测只需10～15 min,检测时间短、成本低、结果容易判断，可用于田间快速检测。本研究为樱桃小果病的综合防控提供了有效的监测和检测手段。     

胶体金免疫层析技术及其在畜禽疫病诊断中的应用

胶体金免疫层析技术是一种新型的固相免疫标记检测技术,具有快速简便、特异性强、成本低、结果判断直观等优点,被广泛应用于动物疫病诊断。该文对胶体金免疫层析技术的原理、特点、分类以及在动物疫病诊断中的应用进行综述。     

检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用

为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术，本研究采用胶体金标记兔抗鸡Ig G，制备金标垫，将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔Ig G抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线，优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示，胶体金标记兔抗鸡Ig G的最佳p H为8.5，最佳标记浓度为7μg/mL;r PlpB和羊抗兔Ig G抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/m L。利用该方法检测SPF鸡血清，鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清，结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性，其他均为阴性，表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测，结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性，表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时，同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异，表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测，结果显示，二者阳性符合率为91.5%，阴性符合率为100%，总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采...     

胶体金免疫层析试纸条同时检测生乳中吡虫啉、吡唑醚菌酯、氟虫腈残留的研究

[目的]开发同时检测生乳中吡虫啉（Imidacloprid）、吡唑醚菌酯（Pyrazole ether ester）、氟虫腈（Fluorine worm nitrile）3 种农药残留的胶体金免疫层析的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，冻干法制备胶体金标抗体冻干粉，置于微孔杯内，复溶后，吸取全部反应液于胶体金试纸条样品垫上，经层析，在免疫层析试纸条上显示结果。[结果]吡虫啉、吡唑醚菌酯、氟虫腈3 种农药检测检测下限分别为0.1 mg/kg，0.03mg/kg，0.02 mg/kg，保质期为1 年，符合《GB2763—2021食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》对生乳中农药残留做出明确限量规定吡虫啉、吡唑醚菌酯、氟虫腈最大残留量0.1 mg/kg，0.03 mg/kg，0.02 mg/kg要求。[结论]该方法操作简单，快速灵敏，稳定准确，可以作为前期农残检测的快速筛查手段。     

应用于RPA nfo反应产物结果可视化的胶体金试纸条制备与评价

旨在利用6-羧基荧光素(6-FAM)与6-FAM单克隆抗体、生物素与链霉亲和素之间的特异性结合，制备可用于nfo酶切割探针的重组酶聚合酶(RPA)反应产物结果可视化的胶体金侧向免疫层析试纸条(GICS)。通过杂交瘤法和诱生腹水法制备了高亲和力的6-FAM单克隆抗体(亲和力常数为5.38×10⁹ L/mol),再运用高浓度NaCl破坏试验，确定了胶体金与6-FAM抗体的最佳标记pH值为8.0,最佳抗体标记量为12μg/mL,并使用模拟样本确定了最佳检测(T)线包被缓冲液为0.2 mol/L(pH值5.0)。然后使用RPA nfo反应产物作为实际样本，观察条带的深浅，最终确定在层析液为0.1 mol/L PB(pH值7.4)、T线包被1 mg/mL SA、反应液用量5μL及金标抗体用量10μL条件下，能实现试纸条最佳检测性能。自主研发的胶体金侧向免疫层析试纸条在加样5 min后能出现清晰的条带，与目前商品化试纸条的可视化判定结果一致，能替代现有的商品化试纸条，降低检测成本、缩短检测时间，对建立RPA nfo-GICS及RPA-CRISPR Cas12a-GICS检测方...