伊氏锥虫HGPRT基因cDNA的克隆及其在E.coli中的表达

根据引物设计的一般原则，参照伊氏锥虫HGPRT基因的核苷酸序列设计、合成一对引物，PCR扩增伊氏锥虫HGPRT基因cDNA。低熔点琼脂糖回收：PCR产物，并将其克隆至pGEM—T Easy载体中，经酶切、PCR鉴定和序列分析，获得重组中间质粒pGEM／HGPRT。重组中间质粒pGEM／HGPRT经Nco I和Sal I双酶切，回收目的片段HGPRT，以非融合形式插入原核表达质粒pBV220构建表达质粒pBV／HGPRT，转化大肠杆菌DH5a，42℃诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析，表达产物HGPRT的分子量约为23kD，与理论推算值相符，表达率占总菌体蛋白的19％，经间接ELISA检测，表达产物能被伊氏锥虫阳性血清所识别。     

味精的选购与食用

味精的化学名叫谷氨酸钠，一般呈晶体状颗粒，如果全部是晶体的就是纯味精，味精产品的谷氨酸钠含量必须大于80％。市场上的味精主要有3类：一是纯味精，谷氨酸钠含量在99％以上；二是含盐味精，是添加了食盐且谷氨酸钠含量不低于80％的味精；三是特鲜味精，也叫强力味精，指味精中加了核苷酸钠等增鲜剂的味精，它比纯味精要鲜得多。     

猪瘟的分子生物学诊断

采用RT－PCR方法，从经临床和血清学初步诊断为猪瘟的病料中扩增了猪瘟病毒（CSFV）的E2基因某一片段；对扩增片段进行序列测定，通过DNAsis软件构建了系统发生树，确定了这一流行株（IPI株）在系统发生树中的位置。结果表明，从IPI株和石门株（Shimen)中均扩增出271bp目标片段，这一流行株与我国20世纪90年代以来流行的绝大多数CSF毒株同属于基因2群中的2.1基因亚群，与YN1、YN2、GX4、GZ1的关系较近，而与Shimen株、兔化弱毒株（HCLV）等我国传统的标准毒株相距较远。这一结果为猪瘟的诊断和检疫提供了一种特异、可靠的方法。     

氨基酸生物配比及外源核苷对雏鸡肝脏核酸含量的影响

以NRC推荐的赖Aa为基准 ,以各种Aa对应的密码子使用频率的比率来确定饲料配方中各主要Aa之间的生物配比。在添加外源核苷酸的条件下 ,雏鸡肝脏中核酸含量明显增加 ,34日龄对照组与试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组鸡肝脏中总RNA含量分别为 (34 5 7.3± 146 .4)、(380 0 .7± 16 5 .6 )、(3814.8± 170 .4)、(36 15 .1± 2 17.2 )、(4 785 .4± 12 2 .9)和 (4 916 .0± 2 0 7.1) μg·g-1。结果显示 ,外源核苷酸在家禽体内能被利用 ,且在氨基酸比例趋于平衡时 ,RNA总量有所增加。     

伪狂犬病病毒Fa株gp63（gI） 基因核苷酸序列测定及分析

对我国最早分离的伪犬病病毒（pseudorabies virus,PRV)Fa株糖蛋白gp63(gI)基因核苷酸序列及的氨基酸序列作了测定与分析，完整的gp63(gI)结构基因从起始密码子ATG到终止密码子TGA共有1050个核苷酸残基，编码由439个氨基酸残基构成的多肽链，4种核苷酸残基的构成比分别为：G35．9％，11.33%,T11.81%,C40.95%,G C含量达76．85％，PRV Fa株gp63基因核苷酸序列与Nice株的相比，两者同源性达98．13％，仅存在3个核苷酸残基的缺失变异，氨基酸推导序列分析表明，糖蛋白gp63具有典型膜蛋白特征，与Nice株相比，同源性为97．42％，gp63基因起始密码子由3个连续的ATG组成，ATG上游区域内无启动子调控区序列。     

鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。     

核苷酸对柑桔1,5-二磷酸核酮糖羧化酶活性的影响

用核苷酸及其降解产物处理从普通甜橙叶片中制备的RuBP羧化酶反应液,比较了不同降解产物对RuBP羧化酶的激活作用。结果表明,在激活效果上,核苷酸>碱基>核苷;除尿嘧啶核苷酸外,其余核苷酸降解产物对RuBP羧化酶的激活效果均不如500ppm的核苷酸混合物。     

禽白血病病毒多重PCR检测法的建立及初步应用

根据GenBank中登录的禽白血病病毒A、B、J亚群的核苷酸序列设计合成了3对引物,各对引物可分别扩增出大小约为195、260、924bp的核苷酸片段;经优化建立禽白血病病毒多重PCR检测法,并进行其敏感性试验及对马立克病病毒(MDV)、火鸡疱疹病毒(HVT)、新城疫病毒(NDV)、传染性囊病病毒(IBDV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和DF-1细胞基因组的特异性试验;应用该方法对1 294份临床样品进行禽白血病病毒检测,对阳性检出样品抽样进行测序鉴定.结果表明:该方法的最小检出拷贝数为103,特异性试验均为阴性,检出临床样品中的核苷酸片段与参考毒株核苷酸序列的同源性达98%以上,符合率100%,具有良好的特异性、敏感性和符合率,可为禽白血病病毒感染的临床诊断及流行病学调查研究提供有效借鉴.     

冰岛硫化叶菌xpb基因缺失突变体的构建及遗传学分析

为在体内研究古菌核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)机制,利用基因敲除的方法,对泉古菌核苷酸切除修复机制进行研究,构建了冰岛硫化叶菌编码真核生物NER解旋酶XPB同源蛋白的基因xpb1和xpb2单缺失突变体,从而在体内分析xpb1和xpb2基因的功能。结果表明:基因xpb1或xpb2不是冰岛硫化叶菌存活的必需基因。表型分析发现,xpb1和xpb2基因单缺失突变体相较野生型菌株REY15A,对DNA损伤试剂4-NQO 4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitroquinoline 1-oxide,4-NQO)分别表现出轻微敏感性和不敏感性,暗示NER解旋酶功能在冰岛硫化叶菌体内存在多重冗余。     

一个遗传性FXIII缺乏症家系的mRNA转录的表达

目的：观察F13基因缺陷对F13转录表达的影响,从而了解F13基因缺陷与F13功能不足的关系。方法：采用RT-PCR法对一个遗传性F13基因缺乏症家系的FXIIIA亚基mRNA转录表达水平进行分析。结果：家系不同成员中FXIIIA亚基mRNA的不同片段的转录水平存在差异。FXIIIA亚基mRNA片段l和片断2的水平在携带双重基因突变杂合子基因的先证者及其弟中明显低于在其父母中;FXIIIA亚基mRNA片段3的水平在整个家系中无明显差异。结论：复合杂合子基因中双重基因突变导致FXIIIA亚基mRNA转录表达异常．不能表达足量正常的FXIIIA亚基,导致FXIII缺乏症。