牛白细胞介素-2在毕赤酵母中的表达

将编码牛白细胞介素-2(BoIL2)成熟肽的cDNA克隆到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZB中，构建出含BoIL2基因的重组质粒BoIL2-pPICZB。将经Sac Ⅰ酶切后线性化的BoIL2-pPICZB电转化到巴斯德毕赤酵母X-33中，转化子经高浓度Zeoein抗性筛选鉴定后，用1％甲醇诱导目的蛋白表达。经SDS-PAGE及Western blotting检测，表明BoIL2在酵母中获得了胞内表达；通过金属螯合亲和层析(MCAC)获得纯化的重组蛋白；培养小鼠CTLL2细胞进行活性检测，证实所表达的重组BoIL2具有生物活性。     

兽药残留检测有效净化技术--免疫亲和层析

免疫亲和层析是一种有效的残留检测净化技术,在农药和兽药中得到了广泛应用。作者对免疫亲和层析的原理、关键技术作了详细的阐述,并且介绍了其在兽药及饲料药物添加剂残留中的应用与进展。     

凝集素亲和层析技术分离金花茶多糖的研究

以蓖麻凝集素（RCA）为亲和配体制备亲和层析树脂,在比较2种固定载体制备亲和树脂对金花茶多糖分离效果的基础上,探讨了多糖上样量、NaCl浓度以及洗涤量对RCA-Sepharose-2B亲和树脂结合率或再生效果的影响,并采用高效液相色谱（HPLC）对亲和多糖进行分离效果分析,为将亲和层析技术应用于金花茶活性多糖的分离纯化提供科学依据。研究结果显示,相比AF-Amino-650 m树脂,RCA-Sepharose 2B亲和树脂的分离效果比较好,而且可以进行反复使用多次。多糖上样量显著影响多糖与树脂的亲和效果,多糖结合率随上样量增加呈倒U型变化,当多糖上样量为10.4 mg/g亲和层析树脂时,其亲合率最高,达到57%左右;NaCl浓度对树脂的再生效果也有显著影响,用含0.2 mol/L NaCl的磷酸缓冲液洗涤树脂可以有效恢复树脂对多糖的亲和效果。HPLC分析结果显示分离获得的亲和活性多糖是由3种不同分子量的多糖组分组成。     

玉米SOD的分离与纯化

探索高速、快速的玉米SOD分离与纯化方法,旨在为玉米SOD的规模化生产提供依据。利用金属螯合亲和层析和DEAE-纤维素离子交换层析相结合的方法分离纯化玉米SOD,得到2种达到电泳纯的SOD组分(A、B),并对它们的基本性质进行了初步分析。SDS-PAGE法测定A、B两组分的亚基分子量分别为20 kD和16.4kD;由电泳后的定位染色情况可知,这2种SOD组分均属于Cu/Zn-SOD;等电聚焦表明,A、B两组分的等电点分别为7.2和6.9。     

三种亲和层析体系纯化大豆凝集素的比较研究

用N-乙酰基-D-半乳糖胺-epoxy-Sepharose 6B、半乳糖胺-CH-Sepharose 4B和瓜尔胶三种亲和层析体系对大豆中的凝集素进行分离提纯,并进行了多方面的比较.结果显示:三种亲和层析体系纯化大豆凝集素的产率存在显著差异,依次分别为147±15、110±12和128±16mg/100g生大豆;三种亲和胶的亲和饱和度差异显著,分别为12.2±1.4、7.5±1.3和2.1±1.6 mg/mL凝胶.这一结果表明大豆凝集素最理想的纯化方法是N-乙酰基-D-半乳糖胺-expoxy-sepharose 6B亲和层析体系.     

双峰驼血清IgG纯化及其抗血清制备

纯化双峰驼血清IgG并制备兔抗骆驼IgG抗血清,为制备针对特定蛋白的特异性纳米抗体储备材料,利用Protein G纯化双峰驼血清IgG,并用纯化的IgG免疫成年家兔后采用ELISA方法检测抗血清效价;采用间接ELISA方法,利用制备的抗血清检测PCV2 Cap蛋白免疫双峰驼血清中抗Cap蛋白的抗体水平,Western blot技术检测制备的抗血清与从噬菌体纳米抗体库中筛选到的针对不同蛋白的纳米抗体的反应性,以确定抗血清的适用性。结果显示,从双峰驼血清中纯化到骆驼IgG,SDS-PAGE分析显示纯化的骆驼IgG包括3条链,约50ku的传统重链IgG1,约43ku缺失CH1的重链IgG3和约30ku的传统轻链;3次免疫后兔抗骆驼IgG抗血清效价达1∶512 000;应用制备的抗血清检测PCV2 Cap蛋白免疫5次的双峰驼血清中抗Cap蛋白的抗体效价达1∶1 024 000;制备的抗血清可以与原核表达的针对不同病毒蛋白的纳米抗体反应;说明制备的兔抗骆驼IgG抗血清可用于免疫骆驼血清和表达的纳米抗体的检测。研究结果为目标蛋白免疫骆驼后抗体效价检测及纳米抗体文库构建提供关键材料。