空间诱变柱花草的ISSR分析

采用改良CTAB法从空间诱变柱花草(Stylosanthes spp.)嫩叶中提取得到高质量的DNA,并对柱花草ISSR反应体系中的影响因子进行优化,建立柱花草ISSR反应的最佳体系。在此基础上,用12条引物对86份柱花草进行遗传多样性分析,结果表明:共获得133条谱带,其中多态性条带数为109条,占总条带数的81.95%,品种中间的遗传相似系数在0.75~0.98,表明其遗传关系比较近。当相似系数在0.81水平时,可将供试86份材料分为5大类,其中只有品系85号与原对照品种(热研2号)聚在一起,说明大部分空间诱变柱花草株系在DNA水平上与原对照品种存在差异。     

用正交设计法优化枣树ISSR-PCR反应体系

采用正交设计的方法对枣ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物的浓度)在4水平上进行优化试验,PCR结果用DPS数据处理软件分析。实验结果表明:各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Mg2+影响最大;筛选出了各反应因素的最佳水平,建立枣ISSR-PCR的最佳反应体系(25μL)为:Taq酶1.0 U、Mg2+1.0 mmol/L模板DNA 1.0μL、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.3μmol/L。     

粗皮桉 ISSR-PCR 反应体系优化

为建立粗皮桉 ISSR-PCR 优化反应体系,先通过单因素试验确定影响粗皮桉 ISSR-PCR 5个因素(Mg²⁺、dNTP、Taq DNA 聚合酶、DNA 模板、引物)的较适宜浓度范围,在此基础上进一步通过正交试验对5个因素4个水平进行优化,并用 DPS 软件分析试验结果。结果表明粗皮桉 ISSR-PCR 的优反应体系为：在25μL 反应体系中,10×PCR buffer 2.5μL、MgCl 2.0 mmol·L^-1、dNTPs 0.3 mmol·L^-1、Taq DNA 聚合酶1.25 U、DNA 模板60 ng、引物0.8μmol·L^-1。通过梯度试验确定的扩增程序为：94℃预变性5 min,然后按94℃变性1 min,51℃退火3 min,72℃延伸2 min,进行35个循环,最后72℃延伸5 min,4℃保存。     

翻白草总DNA的提取与ISSR-PCR体系的建立与优化

[目的]针对翻白草ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR分子指纹标记反应体系,为进一步研究翻白草的居群差异奠定基础。[方法]通过筛选引物并设定影响翻白草ISSR反应的诸因子的不同浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立翻白草ISSR稳定可靠的反应体系。[结果]首次建立了可用于翻白草ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系,确定了25lμPCR反应体系中各试剂终浓度:1×Buffer缓冲液,1 UTaq DNA聚合酶,2.5 mmol/LMg2+,0.25 mmol/L dNTP,0.4μmol/L引物,DNA模板约20~30 ng,退火温度在50~56℃;实验表明:Taq酶质量、DNA模板品质、退火温度、Mg2+浓度d、NTP浓度均对ISSR反应结果具有较大影响。[结论]所建立的翻白草ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可以较好地应用于翻白草的居群鉴别及居群分子生态的研究。     

异鳞石山棕ISSR-PCR反应体系的建立及其亲缘关系分析

为进一步明确异鳞石山棕(Guihaia heterosquama)的分类地位以及异鳞石山棕的遗传多样性,本研究以异鳞石山棕及其近缘种共10种40份植物为材料,利用L16(45)正交设计实验建立异鳞石山棕的最佳ISSR-PCR 反应体系(总体积20 μL,包括2 μL 10×Buffer,2.5 μL Mg2+(25 m...     

4种紫菜叶状体的ISSR分子标记分析

4种紫菜样品分别为采自青岛海区的野生条斑紫菜（Porphyra yezoensis）、华北半叶紫菜（P.katadai var.hemiphylla）、少精紫菜（P.oligospermatangia）和浙江象山海区人工栽培的坛紫菜（P.haitanensis）.取其10～15 cm叶状体为材料,采用ISSR（Inter-simple sequence repeats）分子标记进行分析.从100个ISSR引物中筛选出22个引物,扩增出清晰、可重复的条带共计247条,其中多态性条带比例达95.5%.根据扩增结果进行的聚类分析显示,条斑紫菜和少精紫菜的亲缘关系最为接近,在聚类图中二者首先聚在一起,接着与坛紫菜相聚,最后与华北半叶紫菜汇聚.本研究还讨论了紫菜属海藻的遗传多样性以及种间的特异性ISSR分子标记.本研究目的在于为紫菜遗传变异、亲缘关系以及分类研究、探索新的分析手段.[中国水产科学,2006,13（3）：371-377]     

马蔺ISSR-PCR反应体系的建立与优化

以内蒙古呼和浩特市近郊野生马蔺DNA为模板,采用均匀设计,通过5因素5水平和5因素3水平两轮均匀优化试验,对影响ISSR-PCR扩增结果的一些因素(Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA浓度等)进行优化筛选,建立了适合马蔺的最佳ISSR-PCR反映体系:在25μl反应体系中,包括2.5μl 10×PCR Buffer、2.0mmol/L Mg2+、2.5μmol/L dNTP、1μmol/L引物1、.5U TaqDNA聚合酶、50ng模板DNA。在此基础上对扩增程序中的循环次数、退火温度进行筛选,获得的扩增程序为:94℃预变性3min;然后进行40个循环(94℃变性45s,52.3～60.5℃退火30s,72℃延伸1.5 min);循环结束后,72℃延伸5min。