茎直黄芪化学成分TLC定性与定量分析

为分析茎直黄芪化学成分和吲哚里西啶类生物碱,5kg茎直黄芪草粉经热回流提取,石油醚、氯仿、乙酸乙酯分别萃取,对各萃取部位化学成分,及氯仿部位和乙酸乙酯部位吲哚里西啶类生物碱进行薄层色谱法(TLC)定性分析,同时用薄层色谱扫描软件,对各成分进行扫描计算相对含量。结果显示,3个萃取部位分别检出13、15、15个显色斑点,其中SYM-12、SYM-10、SYM-6、LF-7、YSYZ-8、YSYZ-6等6种物质相对含量均在15%以上。吲哚里西啶类生物碱专项分析表明,茎直黄芪氯仿部位、乙酸乙酯部位至少含8种和6种吲哚里西啶类生物碱,其中LFSWJ-5、LFSWJ-6、LFSWJ-7、YSYZSWJ-3、YSYZSWJ-4和YSYZSWJ-5等相对含量均在15%以上,LFSWJ-3和YSYZSWJ-4Rf与苦马豆素标准品一致,相对含量分别为10.02%和15.67%。     

豆类丝核菌中苦马豆素的提取

采用Ｈ２Ｏ∶ＣＨ２Ｃｌ２萃取、７３２型阳离子树脂交换等方法,从豆类丝核菌中分离到纯结晶,经薄板层析法发现,豆类丝核菌提取物浓缩的粗品液和苦马豆素标准品经Ｅｈｒｌｉｃｈ＇ｓ试剂显色后,二者均出现一椭圆形紫色斑点,且Ｒｆ值均为０．８１;气相色谱法研究发现,提取物纯品标样（１５．９４２０ｍｇ／Ｌ）与苦马豆素标准品在同一色谱条件下显示出完全一致的峰形,证明从豆类丝核菌中分离到的纯结晶是苦马豆素纯品。研究还表明豆类丝核菌干燥菌丝体中苦马豆素含量达１．２３％～２．９９％．     

Clearance of para-aminohippuric acid in wethers consuming locoweed

AIM: To validate the use of para-aminohippuric acid (PAH) as a marker for measuring blood flow in wethers consuming a mixed diet of locoweed and blue grama hay.

METHODS: Fourteen sheep, stratified by bodyweight (BW), were assigned to one of three treatments: 0.8 mg swainsonine (SW)/kg BW (HI), 0.2 mg SW/kg BW (LO), and no SW (Control). Sheep were fed various ratios of locoweed and blue grama hay to deliver SW treatments, for 28 days prior to infusion of PAH. Concentrations of SW and activities of alkaline phosphatase (Alk-P) and aspartate aminotransferase (AST) in serum were measured to confirm exposure to SW and subclinical intoxication. A single 20-ml injection of 5% PAH was delivered into the jugular vein after subclinical intoxication had been achieved. Blood samples were collected and serum analysed for PAH immediately prior to injection, then every 5 min from 5–30 min, and every 10 min from 30–60 min, following injection of PAH.

RESULTS: Effective delivery of SW was evident from the greater concentrations of SW measured in the serum of HI compared with LO animals (p<0.05). No significant differences were detected in the rate of elimination (range 0.097–0.108 L/min), elimination half-life (range 6.62–7.24 min), apparent volume of distribution for the central compartment (range 7.14–9.72 L), and clearance (range 0.73–0.92 L/min) of PAH, between treatments.

CONCLUSIONS: Subclinical intoxication with SW did not affect the pharmacokinetics of PAH. Thus, use of downstream dilution of PAH is a valid method to determine the rate of blood flow in nutrient flux experiments that involve consumption of locoweed.     

小花棘豆及苦马豆素研究文献分析

以《CNKI—中国期刊全文数据库》和《万方数据库》为调查对象,以小花棘豆、苦马豆素为检索词,排除非小花棘豆、苦马素提取等相关文献,对1979—2010年32年来我国对小花棘豆及苦马豆素研究文献的数量、研究领域、文献来源进行分析,初步总结了小花棘豆及苦马豆素研究的主要指标和发展趋势。     

埃里格孢菌FEL3产SW发酵培养条件的优化

【目的】对埃里格孢菌(Undifilim oxytropis)FEL3产苦马豆素(SW)的发酵条件进行优化。【方法】在不同碳源(葡萄糖、蔗糖、乳糖、燕麦片、可溶性淀粉)、氮源(豆粉、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、硝酸钠、氯化铵、硫酸铵)、无机盐(MgSO4.7H2O,FeSO4.H2O,ZnSO4.H2O,CaCl2.2H2O,CuSO4.5H2O,KH2PO4)、初始pH(4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5)和接种量(体积分数2%,4%,6%,8%,10%)培养条件下,将埃里格孢菌FEL3接种到液体培养基中,培养15 d后,测定菌丝湿、干质量浓度和菌液中SW浓度,选择最佳培养条件。【结果】当碳源为燕麦片、氮源为豆粉、无机盐为CuSO4.5H2O、培养基初始pH为6.5~7.0、接种量为体积分数8%时,埃里格孢菌FEL3菌丝湿、干质量浓度和菌液中SW浓度均较高。【结论】得到了埃里格孢菌FEL3产SW的最佳培养条件,为用埃里格孢菌FEL3大量生产SW奠定了基础。     

苦马豆素抑制N-聚糖加工对生殖激素分泌功能的影响

苦马豆素（SW）中毒可引起生殖激素分泌紊乱,其中,促性腺激素是糖蛋白,由N-聚糖糖基化修饰调控其活性和功能。SW是N-聚糖加工过程中ɑ-甘露糖苷酶的抑制剂,而SW如何通过改变N-聚糖加工过程进一步影响生殖激素的分泌功能尚不明确。因此,本试验建立SW染毒妊娠期小鼠模型,利用MALDI-TOF-MS质谱法检测糖蛋白N-聚糖糖链结构的变化,分析N-聚糖加工过程中糖基酶的活性和生殖激素水平及其受体蛋白表达量。随着SW染毒时间的延长,染毒组小鼠垂体前叶糖蛋白的5种复合型N-聚糖糖链结构消失,而新增加3种杂合型N-聚糖糖链结构;N-聚糖糖基转移酶和糖苷酶的活性均显著下降;进一步发现染毒组小鼠卵巢促性腺激素受体、雌二醇和孕酮受体蛋白表达量显著低于对照组,并且生殖激素分泌水平也出现显著下降。SW可显著抑制N-聚糖糖基酶的活性使糖蛋白上N-聚糖糖链结构发生改变,影响促性腺激素及其受体的活性,使其对下游类固醇激素分泌的调控作用失衡,最终导致小鼠妊娠期生殖激素分泌紊乱。     

南疆地区小花棘豆中苦马豆素的分离与鉴定

摘要：小花棘豆(Oxytropis glabra)草粉经稀盐酸浸提、过滤、滤液上732强酸性阳离子交换树脂,用1 mol/L 氨水洗脱,得到总生物碱。将总生物碱用甲醇完全溶解、过滤,回收甲醇后的残留物,过180 μm硅胶柱,用氯仿∶甲醇∶氨水∶水（体积比为70∶26∶2∶2）混合溶剂洗脱,薄层层析检测,合并同类项,挥干后将残留物在90 ℃、-0.094 MPa条件下升华,得到白色针状结晶。经薄层色谱、熔点、紫外光谱、红外光谱、质谱、核磁共振分析,确定为苦马豆素,提取率为19.95 mg/kg。     

小花棘豆产苦马豆素内生真菌的筛选与鉴定

通过对小花棘豆内生真菌的分离纯化,筛选产苦马豆素内生真菌,探讨小花棘豆内生真菌与其毒性成分苦马豆素的相互关系。本研究对采自内蒙古西部草地的6份小花棘豆样品进行内生真菌分离纯化,采用薄层色谱和气相色谱技术对内生真菌发酵液进行苦马豆素定性、定量检测,筛选产苦马豆素内生真菌;结合形态学和分子生物学方法进行内生真菌种属鉴定。从小花棘豆样品中分离得到6株内生真菌。经筛选,其中有2株产苦马豆素,编号为XJ-J-I和XJ-H-1,其发酵液中苦马豆素产量分别为4.209 2mg.L-1和16.733 8mg.L-1。鉴定结果表明,这2株内生真菌虽然形态学存在差异,但基因型相同,同属镰刀属内生真菌—层出镰刀菌(Fusarium prolifera-tum)。小花棘豆中存在产苦马豆素内生真菌。     

豆类丝核菌次级代谢产物的抑瘤作用及其对荷瘤小鼠巨噬细胞活性的影响

建立种植性肝癌(H22)实体瘤动物模型,并给荷瘤小鼠灌服含有苦马豆素(swainsonine,SW)且剂量分别为2.7和16.2mg/(kg·d)的豆类丝核菌次级代谢产物稀释液,分别于灌药前(0d)及灌药后4d和8d时测定其肿瘤抑制率和腹腔巨噬细胞吞噬百分率。结果表明,8d时 组(高剂量灌药组)的腹腔巨噬细胞吞噬率达到(33.99±1.56)%,显著高于 组(生理盐水对照组)的(27.95±4.03)%; (低剂量灌药组)、 2组肿瘤抑制率分别在4d时达到26.44%和33.91%,8d时达到46.98%和47.22%。说明该次级代谢产物能够使荷瘤动物巨噬细胞吞噬力增强,并能抑制种植性实体瘤(H22)的生长。表明该次级代谢产物具有抗肿瘤药用价值。     

豆类丝核菌发酵代谢产物中苦马豆素的测定

利用气相色谱法,对实验室分离保存的6株豆类丝核菌发酵代谢产物中的苦马豆素(swainsonine,SW)进行了定性、定量分析。结果表明,豆类丝核菌发酵代谢产物中含有大量SW,其中02-6B与02-3A2株菌代谢产物中苦马豆素含量分别达到1093.17与1199.64mg/L,说明这2株菌可用于SW生物合成的研究,并有利于降低SW生物合成的成本。