利用ISSR分子标记鉴定苦瓜杂交种纯度

【目的】采用ISSR分子标记对苦瓜杂交一代品种秀玉1号纯度进行鉴定,为生产上提高苦瓜新品种纯度鉴定效率提供参考。【方法】利用ISSR技术和91条引物,对苦瓜品种秀玉1号及其亲本的DNA指纹进行分析。【结果】从91条引物中筛选出两条特征引物ISSR-845和ISSR-891,能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带510 和300 bp。其中,ISSR-845能够区分父本机械性混杂,ISSR-891能够准确区分母本自交系与杂种F1代;经群体验证,该标记与田间鉴定结果高度一致。【结论】ISSR技术具有准确、简便、高效、实用性强等优点,可用于生产上苦瓜种子纯度的快速鉴定。     

玉米杂交种纯度鉴定SNP 核心引物的确定及高通量检测方案的建立

纯度是玉米种子质量的重要指标之一,尤其杂交种自交株是影响田间产量的关键因素。KASP(kompetitive allele specific PCR)技术具有高通量、低成本的优点,适用于种子纯度检测。本研究基于12套杂交种及其父母本的三联体样本及335份玉米杂交种国家审定标准样品SNP指纹,从384个SNP基础位点筛选获得60个候选位点,位点转化为KASP引物的成功率为95%。综合考虑引物双亲互补率、多态性、稳定性和分型效果等多项指标,最终确定20个引物作为玉米杂交种纯度鉴定的核心引物,能够有效鉴定99.7%供试样品纯度。对于待测样品京科968通过SNP-DNA指纹数据库查询,并选择双亲互补型引物进行纯度鉴定。在检测的110个个体中,共检出1个自交苗和2个异型株,纯度为97.3%。同时,基于纯度核心引物对批量样品检测建立高通量纯度检测方案,具有快捷、准确、高通量和低成本的特点,为政府监管和企业提供了更多纯度鉴定方案的选择。     

Estimating Out-Crossing Rate of Bg 379-2 Using Morphological Markers and Confirmation by Molecular Markers

Rice is largely self-fertilized and accordingly a field population of rice is completely composed of near homozygotes.Due to the emergence of off-types,homozygosity will be affected.With the time,this will cause the reduction of genetic purity in some rice varieties.One of the reasons has been suspected to be the high out-crossing frequencies of such varieties.Studies were conducted at the Rice Research and Development Institute,Batalagoda,Sri Lanka to estimate the out-crossing rate of Bg 379-2,a variety having the problem of maintaining genetic purity.Bg 379-2 was allowed to out-cross with Bg 450 and the number of out-crossed plants were counted using dominant morphological markers such as short-round grain and purple culm of pollen donor.A molecular confirmation of out-crossing was also performed using sequence tagged site(STS) molecular marker pTA248.The variety Bg 379-2 showed a potential out-crossing rate of 3.41% and an average out-crossing rate of 1.29% using dominant morphological markers.Polymorphism was clearly detected between parents and out-crossed plants as well as selfed plants of Bg 379-2 using their banding patterns.A similar study can be performed to determine the out-crossing rates of other varieties which show high percentage of off-types in the population for the better understanding of the breeding behavior of the varieties.     

西瓜杂交组合T-1种子纯度鉴定的SSR标记研究

【目的】研究有效的西瓜杂交组合种子纯度的SSR标记鉴定方法,为室内鉴定的实际应用提供理论依据。【方法】以西瓜杂交组合T-1及其亲本自交系P-1、M-13为材料,在子叶展平期采用CTAB法提取DNA,利用优化的西瓜SSR标记方法进行杂交种子的纯度鉴定,并与田间表型鉴定进行比较。【结果】从36对SSR引物中筛选出3对(MCPI-5、MCPI-16、MCPI-17)稳定性强、可重复性好、在杂交种及其母本之间具有多态性的引物。将这3对引物中的MCPI-5和MCPI-16用于267株T-1杂交种群体纯度鉴定,显示种子纯度为97.75%,与田间种植鉴定结果一致。【结论】3对SSR引物MCPI-5、MCPI-16和MCPI-17可用于西瓜杂交组合T-1种子纯度的室内鉴定。     

浙江省玉米种子质量分析

以浙江省市售玉米种子为研究对象,测定种子含水量、净度、发芽率、病虫感染率、品种纯度等指标。结果表明,供试的68个玉米品种,有13个品种种子为不合格种子,合格率为80.9%;其中糯玉米种子合格率为84.2%,甜玉米种子合格率为61.1%,普通玉米种子合格率为100%。此外,从包装标注分析,共有12个品种种子包装标注不规范,种子标签合格率为82.4%;其中糯、甜、普通玉米种子包装标注合格率分别为81.6%,72.2%和100%。最后,对提高种子质量的途径和方法进行了探讨。     

小麦种子纯度的分子标记检测方法

为了探索一种准确评价小麦品种种子纯度的技术体系,在比对了400个小麦品种的SSR、EST-SSR和AFLP-SCAR指纹以及对上千份种子进行纯度检测的基础上,提出了检测种子纯度的策略:(1)联合使用SSR、EST-SSR和AFLP-SCAR标记检测种子纯度,并推荐了7对SSR引物、5对EST-SSR引物和3对AFLP-SCAR引物为检测种子纯度的核心引物;(2)在待测品种的种子之间比对核心分子标记位点的带型,当某(些)个体与多数个体之间≥3位点的带型不同时,方可判定为杂株.此外,本文还就如何提高种子纯度检测的工作效率、降低检测成本,提出了合理利用核心引物和合理混合DNA样品的方法.     

水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA提取方法的探讨

为建立水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA最佳的提取方法,以5叶期水稻品种合江19为提取总RNA的材料,对Trizol法和两种改良Trizol法提取的水稻叶片总RNA纯度和完整性进行了比较研究。基因定量仪检测结果表明,Trizol法、改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ提取的RNAOD（260／280）分别为1．529、1．755和1．991;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,改良Trizol法Ⅱ提取的RNA具有28s、18s和5s3条清晰的条带,且无降解,而其他两种方法提取的RNA质量较差,均有降解。该研究结果说明改良Trizol法Ⅱ提取的RNA完整性好和纯度较高,该方法优于Trizol法。     

玉米杂交种纯度鉴定方法

玉米杂交种纯度是检验种子质量的决定性指标,因此纯度鉴定尤为重要,概述了玉米杂交种纯度鉴定的几种常用方法。     

番茄种子RNA提取及快速检测qRT-PCR模板纯度的方法优化

番茄种子内富含多糖、贮藏蛋白、脂肪,同时还含有酚、酮等多种次生代谢物质,给提取高质量的RNA进行基因表达相关研究带来了的困难.本研究通过优化北京华越洋生物科技有限公司RNA提取试剂盒的操作流程,获得大量完整的RNA,并通过设计跨越内参基因(EF1α)内含子的引物鉴定DNA的污染.结果表明,以水和RNA为模板没有扩增出片段,以种子DNA为模板扩增出包含内含子的441 bp DNA片段,以cDNA为模板扩增出363 bp的DNA片段,这说明cDNA没有被DNA污染.利用这种策略分析了种子萌发过程中2个基因的表达水平,基因表达结果证明了这是一种快速、有效的方法.另外,这种策略为植物转录组学的相关研究提供了参考方法.     

甘蓝型CMS杂交油菜品种种子纯度的分子鉴定及其吻合率研究

本研究在大量引物筛选和重复验证的基础上对目前生产上大面积推广的CMS杂交油菜品种秦优7号、秦杂优1号及其对应亲本进行了RAPD标准图谱的构建,并规模化的对该两杂交种的生产商品用种种子纯度进行了检测。对所检样品所代表的种子群体进行了大田吻合率比对研究和群体纯度跟踪,结果显示两品种的室内检测结果和田间表现的单株育性吻合率皆在97%以上,这表明利用该技术进行杂交油菜种子纯度分析方法是可靠的,该方法在连续5年上百份样品、数万单株和20多万公斤的杂交油菜种子纯度分析应用实践中得到检验和证明。