鲫肠道上皮细胞原代培养方法的研究

探讨了健康鲫(Carassius auratus)幼鱼肠道上皮细胞的原代培养方法。结果显示,用含有抗生素、胶原蛋白酶Ⅰ、EDTA和胶原蛋白酶Ⅳ组成的D-Hanks液消化无菌分离的鲫肠道可以获得大量细胞团及绒毛隐窝;用含有抗生素、胎牛血清(FBS)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素的DMEM培养液进行培养,并根据肠道上皮细胞与成纤维细胞贴壁时间的差异进一步纯化,连续培养12d后可以得到纯化的肠道上皮细胞。     

对乙酰氨基酚对大鼠原代肝细胞的损伤机制

胶原酶两步灌流法获取SD大鼠的原代肝细胞,并用不同剂量的对乙酰氨基酚处理.MTT法测定肝细胞的存活率,分光光度法测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.Western blotting法测定大鼠肝细胞中细胞色素P450酶2E1(CYP2E1)的表达水平.结果表明,对乙酰氨基酚可导致肝细胞存活率降低,LDH含量显著升高,CYP2E1表达增加.说明达到一定的剂量时.对乙酰氨基酚可引起肝细胞的损伤.     

柔嫩艾美球虫（Eimeria tenella）体外细胞培养

试验比较了玻璃珠层析法，ＤＥＡＥ纤维素层析法，Ｇ３漏斗过滤法３种提纯柔嫩艾美球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）子孢子的方法，柱高８ｃｍ，直径２００μｍ的玻璃株柱用ｐＨ８．０的Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ缓冲液作洗脱提纯子孢子，回收率为６４．１％，子孢子洗脱高峰期集中，且易于无菌操作，柱高５ｃｍ的ＤＥＡＥ纤维素柱用ｐＨ８．０的甘氨酸缓冲液作洗脱液，提纯子孢子回收率为６３．２％，但严格无菌操作困难，Ｇ３漏斗法易     

无芒雀麦人工草地初级生产力动态的研究

以无芒雀麦人工草地为研究对象，对其生物量的季节及垂动态进行连续４ａ的研究。为促进无芒雀麦草地在河南省的高产丰收提供基础资料及其理论依据。     

cDNA cloning and complete primary structures of myosin heavy chains from brushtooth lizardfish Saurida undosquamis and wanieso lizardfish S. wanieso fast skeletal muscles

ABSTRACT:   The complete cDNA sequences encoding predominant types of myosin heavy chain (MYH) in the fast skeletal muscle were determined for brushtooth lizardfish Saurida undosquamis and wanieso lizardfish S. wanieso , which are used as materials for preparing high-quality surimi-based products. The cDNA consisted of 5973 and 5987 bp, respectively, and both encompassed an open reading frame encoding a polypeptide of 1936 amino acid residues. Brushtooth and wanieso lizardfish MYH showed the amino acid sequence identity of 92–93% to white croaker MYH, which was higher than that of 90% to walleye pollack MYH. The putative binding sites for ATP, actin, and regulatory and essential light chains in the subfragment-1 region of brushtooth lizardfish MYH exhibited a high identity with white croaker counterparts as well as the sequences of subfragment-2 and light meromyosin. In contrast, phylogenetic tree, constructed by the neighbor-joining method based on mitochondrial 16S rRNA gene, revealed that the two lizardfish species formed a cluster with walleye pollack, which was paraphyletic with white croaker. Therefore, a good reputation for lizardfish and white croaker to have a high thermal-gel forming ability seemed to be reflected by MYH rather than biological similarity as revealed by the mitochondrial 16S rRNA gene.     

皖西大别山林区黑翅土白蚁工程治理的关键技术

根据二十多年的生产实践,对黑翅土白蚁(Odontotermes formosanus)实施工程治理技术获得成功的技术要点进行了分析总结。经该技术治理的林区,已取得良好防效,不仅有显著的经济、生态效益,且具有广阔的推广应用前景。     

原发性胆囊癌的早期诊断及处理原则

目的探讨原发性胆囊癌的早期诊断及处理原则。方法对我院2001年7月至2008年7月年间收治的36例原发性胆囊癌患者的临床资料及手术治疗情况进行回顾性分析。结果胆囊结石与胆囊癌的发病之间有着密切的关系,80.6%（29/36）胆囊癌患者合并有胆囊结石;首发症状以腹痛最为常见,共19例（52.8%）,其次为黄疸14例（38.9%）。B超、CT及MR诊断准确率分别为52.9%、57.1%及52.9%;36例均行手术治疗,术前确诊率仅为58.3%（21/36）。结论原发性胆囊癌早期诊断非常困难,CT诊断准确率较高。提高对原发性胆囊癌发病的认识,加强对高危人群的定期监测随访,联合运用B超和CT检查有助于本病的早期诊断,改善预后。     

西门塔尔牛胰腺间充质干细胞原代培养及其多向分化潜能研究

旨在对西门塔尔牛胰腺间充质干细胞（pancreatic mesenchymal stem cells,PMSCs）进行原代培养并研究其体外分化潜能,为细胞疗法和组织工程学方面提供新的种子细胞。本研究从3月龄的西门塔尔牛胚胎中无菌分离胰腺组织,分别采用胶原酶消化法和组织块贴壁法分离PMSCs,进行原代培养;绘制第3代、第9代、第15代细胞生长曲线并测定群体倍增时间及克隆形成能力,采用免疫荧光检测干细胞表面标志物（CD29、CD44、CD73、CD90、CD34和CD45）,RT-PCR检测干细胞细胞表面标志物（CD29、CD44、CD73、CD90、CD106、CD166、CD34和CD45）;染色体核型分析检测其基因稳定性,通过向成脂、成骨、成软骨和成肝样细胞诱导分化,检测其多向分化潜能。结果表明,两种方法都可成功分离出PMSCs,细胞贴壁后形态均为长梭形,漩涡状生长,生长趋势呈典型的S形;第9代细胞群体倍增时间显著低于第15代而高于第3代（P<0.01）;第9代PMSCs克隆形成率显著低于第3代而显著高于第15代（P<0.05）;免疫荧光结果表明,PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73和CD90,RT-PCR结果显示PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD106和CD166,未表达造血细胞表面标志物CD34和CD45,与国际细胞治疗学会组织干细胞委员会指定的MSCs表面标记物相对应;核型分析表明,PMSCs为正常二倍体（2n=60,XY）,染色体基因组未发生变异;特异性染色和RT-PCR结果表明,从西门塔尔牛体内获得的PMSCs可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和肝样细胞。本试验证实两种方法均可成功建立西门塔尔牛PMSCs体外分离培养体系,PMSCs具有活性好、增殖速度快的特点,与MSCs有相似的生物学特性和多项分化的潜能。可为组织工程学提供新的种子细胞。     

奶牛乳腺上皮细胞的原代培养及其生物学特性分析

旨在从奶牛乳腺组织中分离原代乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）并传代培养后探究其生物学特性。本研究从屠宰场采集健康泌乳奶牛乳腺并采用改进的酶消化法从乳腺中分离得到原代奶牛乳腺上皮细胞,通过形态学观察、免疫荧光以及染色体核型分析的方法对其进行鉴定。同时,研究第3、第6和第9代乳腺上皮细胞的生长曲线、群体倍增时间和冻存复苏活力,检测不同代次细胞分泌乳蛋白、乳脂、乳糖的功能及泌乳相关基因的表达。结果表明,所分离的奶牛乳腺上皮细胞纯度较好,细胞生长呈现S型,3个代次细胞的群体倍增时间依次为34.87、41.45和65.04 h,冻存复苏活力为88%~93%;在细胞分泌功能方面,诱导培养2 d后均能检测到酪蛋白、甘油三酯和乳糖,且各代次间无显著差异;此外,3个代次的细胞诱导后均能表达乳成分合成相关基因。本研究成功培养了原代奶牛乳腺上皮细胞,并证明直到第9代细胞仍然具有正常的生物学功能,为体外探究乳腺细胞增殖与分化机制提供了良好的试验材料和技术支撑。     

论混交林的优越性

从4个方面论述了混交林的优越性。