山药糖蛋白体外抗氧化活性研究

采用热水浸提法提取山药糖蛋白,经DEAE-52和SephadexG-75柱层析纯化,得到两种山药糖蛋白纯品,分析其体外抗氧化活性,包括还原能力以及对H2O2、、·OH、DPPH的清除作用、对脂质体过氧化的抑制能力,并分别与抗坏血酸效果作比较。结果表明,山药糖蛋白具有较高的还原能力,对H2O2、、·OH、DPPH有一定的清除能力,对脂质体过氧化具有抑制作用。山药糖蛋白的抗氧化活性在一定浓度范围内（0 ~ 20 mg · mL-1）存在量效关系,随着山药糖蛋白浓度的增加,其还原能力和对H2O2、、· OH、DPPH清除能力增加,但对脂质体过氧化的抑制是先增加后降低。在相同浓度下,山药糖蛋白CYG-1的抗氧化能力稍弱于山药糖蛋白CYG-2。     

鲤春病毒血症病毒糖蛋白的截短表达及其免疫原性分析

为了揭示鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)糖蛋白编码基因的主要免疫原性决定区域,本研究对SVCV的糖蛋白基因进行截短表达,并用纯化的重组蛋白作为免疫原制备了兔抗血清以分析其免疫原性。通过SOSUI以及DNAStar 6.0软件对SVCV糖蛋白基因的跨膜区、亲水性以及抗原表位进行分析后,采用RT-PCR对该基因主要抗原决定区域编码片段进行扩增,并构建重组表达质粒p GEX-Gtr,对其进行诱导表达后获得截短的SVCV糖蛋白的重组蛋白。将表达的重组蛋白进行纯化复性后,作为免疫原制备兔抗血清,采用ELISA法检测其效价,采用免疫印迹以及间接免疫荧光技术检测该重组蛋白的免疫原性。研究结果显示,截短表达的糖蛋白编码基因长1317 bp,编码439个氨基酸(29~467),推测分子量为49.6 k D。利用该重组蛋白制备的兔抗血清,其与重组蛋白的反应效价为1∶64000,。免疫印迹及间接免疫荧光结果显示,该兔抗血清与SVCV-HN株能发生特异性反应,表明该重组蛋白与天然的病毒表面糖蛋白的免疫原性无差异。上述研究结果表明,截短表达的重组蛋白具有很好的免疫原性,可应用于免疫诊断技术研发与基因工程疫苗的研制。     

Do carbon farming practices build bioavailable nitrogen pools?

Agricultural soils contain large amounts of nitrogen (N), but only a small fraction is readily available to plants. Despite several methods developed to estimate the bioavailability of N, there is no consensus on which extraction methods to use, and which N pools are critically important. In this study, we measured six soil N pools from 20 farms, which were part of a multi-year soil carbon sequestration on-farm experiment (Carbon action, 2019–2023). The aim was to quantify the N pools and to evaluate if farming practices that aim to build soil carbon pools, also build bioavailable N pools. We also aimed to test if the smaller and rapidly changing N pools could serve as an indicator for the slower change in soil organic matter. The measured N pools decreased in size, when moving from total N (7700 ± 1500 kg/ha) to slowly cycling (Illinois Soil Nitrogen Test ISNT-N: 1063 ± 220 kg/ha, autoclave citrate-extracted ACE protein N: 633 ± 440 kg/ha), water-soluble organic N (50 ± 17 kg/ha), potentially mineralizable N (33 ± 13 kg/ha) and finally readily plant available inorganic pools (nitrate and ammonium, total: 14 ± 8 kg/ha). In total, the measured pools covered only 18%–44% of total N, indicating a large unidentified N pool, which is either tightly bound to soil mineral fraction and not easily extractable or is bound to undecomposed plant residues and not hydrolysed by the methods. Of the large N pools (ISNT-N, ACE protein and unidentified residual N), clay, carbon (C) and C:Clay ratios explained most of the variability (R² = .90–.93), leaving a minor part of the variation to the management effect. A pairwise comparison of carbon farming and control plots concluded that farming practices had a small (3%–5%) but statistically significant (p < .05) effect on soil total N and ISNT-N pools, and a moderate and significant effect (18%, p < .01) on potentially mineralizable N. The large variation in protein N, water-soluble organic N and inorganic N reduced statistical significance, although individual C sequestration practices had large effects (−30% to +50%). In conclusion, carbon sequestration practices can build both slowly cycling N pools (ISNT) and increase the mineralisation rate of these pools to release plant available forms, resulting in an additional benefit to agriculture through reduced fertilizer application needs.     

表达狂犬病病毒糖蛋白的重组伪狂犬病病毒gG-基因缺失转移载体的构建

以伪狂犬病毒TK-/gI-缺失疫苗株为亲本株提取病毒基因组DNA,克隆含gG基因的EcoRⅤ/StuⅠ片断,用限制性内切酶BamHⅠ和NdeⅠ缺失gG基因,构成重组质粒pIRⅤ。同时,分别将狂犬病病毒SRV9的株糖蛋白和绿色荧光蛋白克隆入载体pIRESneo,构建平行表达糖蛋白和绿色荧光蛋白表达盒。将表达盒插入到pIRⅤ,构建gG基因缺失转移载体,为下一步同源重组获得伪狂犬病毒奠定基础。     

SARS冠状病毒刺突蛋白S144-643的表达及免疫原性分析

将SARS冠状病毒(SARS-CoV)表面的主要结构蛋白刺突蛋白S144-643的基因片段(nt430-nt1929)克隆入表达质粒pET-28b中,并在大肠杆菌中表达。S144-643蛋白分子质量为55 ku左右,以包涵体形式存在于细菌中。ELISA及Western blot证明,S144-643可以与SARS康复病人的阳性血清发生特异性反应,免疫新西兰大白兔可以诱发产生较高水平的特异性抗体,因而证明原核表达的S144-643具有良好的免疫原性。     

白菜S位点糖蛋白基因的克隆与表达分析

 以白菜自交不亲和系为材料,采用RT-PCR技术,用特异引物对SLG基因进行克隆,获得SLG基因cDNA序列长度为1 324 bp,命名为BcSLG。序列分析表明：所获得的白菜BcSLG基因cDNA序列包含一完整的编码框,编码432个氨基酸,含有12个保守的半胱氨酸残基和7个N-糖基化位点。序列比对和系统进化分析表明：BcSLG与其它植物的SLG基因氨基酸序列具有较高的同源性,与大白菜和甘蓝亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明：BcSLG基因在自交不亲和系的柱头中表达量最高,其次是花蕾,叶片中表达最低, 在自交亲和系的柱头、花蕾和叶片中相对表达较低。     

J亚群禽白血病病毒gp37基因的克隆和序列分析

近两年我们从国内不同省份先后分离和鉴定了8株J亚群禽白血病病毒（ALV-J），并对其中的5株进行了gp37基因的克隆和序列分析，结果表明，我们分离的5株ALV-J之间的同源性为94.6%-99.0%；与国内最早分离的SD9901，SD9902和YZ9901等毒株之间的同源性分别为95.3%-98.5%,95.6%-99.0%和94.9%-98.6%；与国际最先报道的原型株HPRS-103之间的同源性为93.4%-95.1%；与其它国外毒株的同源性为92.7%-96.8%。这表明我国ALV-J的gp37基因正在不断发生变异，但相对于gp85基因的变异性要小。     

水疱性口炎病毒糖蛋白基因的克隆和表达

对一株实验室保存多年的水疱性口炎病毒(VSV)的囊膜糖蛋白(VSV_G)基因进行了克隆和测序,并且构建了重组VSV_G真核系统表达载体。结果表明克隆的VSV_G基因全长1536个核苷酸(nt),其编码的G蛋白长为511个氨基酸(aa),氨基酸序列与20个Indiana血清型VSV毒株的同源性在95.4%左右(94.1%～98.0%)。种系发生树分析表明此病毒株属于水疱病毒属的VSV_Indiana血清型。经免疫荧光检测证明构建的重组VSV_G表达质粒pCIVG5和pCRVG6转染23T细胞后能够有效地转录和表达,这为进一步开发利用VSV_G奠定了基础。     

牛疱疹病毒糖蛋白D的结构特点及其在疫苗研发中的应用

来自牛疱疹病毒1和5型(BoHV-1和BoHV-5)的病毒囊膜糖蛋白D(gD)是病毒的主要组成成分,并且在疱疹病毒的致病机理中起到关键作用。gD对于病毒侵入细胞是必不可少的,是病毒感染细胞期间中和抗体的主要靶标。鉴于其在诱导保护性免疫方面的作用,已使用该糖蛋白作为主要抗原开发出亚单位疫苗、DNA疫苗和载体疫苗候选物,证明gD具有在宿主中诱导较强病毒中和抗体和细胞介导的免疫应答以及对宿主进行免疫保护的能力。论文着重介绍了BoHV-1、BoHV-5和一些人类疱疹病毒gD的结构和功能特征,阐述了gD与宿主免疫系统的反应及gD在新型疫苗设计中的应用,为全面了解gD结构特点及其在疫苗研发中的作用提供借鉴。